猪精液预处理稀释液与冷冻基础液的配伍效应

采用6种预处理稀释液对猪精液进行预处理,然后用3种冷冻基础液冷冻保存,研究精液预处理稀释液和冷冻基础液对精子冷冻保存效果的影响,以及其间的配伍效应。结果表明,不同的预处理稀释液对解冻后精子活力的影响差异显著(P<0.05),而3种冷冻基础液对冻后精子活力的影响差异不显著(P>0.05)。不同的预处理稀释液与冷冻基础液之间存在明显的配伍效应,并且用含甘油的稀释液对平衡不同时间的精液冷冻时,其配伍效应又有所不同。猪精液中去除精清可显著提高精子冻后活力和顶体完整率(P<0.05),有利于提高精液品质。     

稀释液中卵黄浓度对猪精液冷冻保存效果的影响

为探索卵黄在猪精液冷冻中的应用效果,筛选出猪精液冷冻稀释液中卵黄的最佳浓度,分别在猪精液冷冻稀释液中添加不同比例（20%、25%、30%）的卵黄,并以精子活率、活力、路径速率（VAP）、轨迹速率（VCL）、直线运动速率（VSL）等为指标,对猪精液稀释后、平衡后和冷冻后3个阶段的精液质量进行比较分析。结果表明,将猪精液冷冻稀释液中卵黄的添加量提高5～10个百分点,其稀释后、平衡后及解冻后3个阶段精子的5个运动参数与常规添加量相比均无显著差异（P〉0.05）。可见,提高猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度未能显著改善猪精液冷冻后的质量,综合考虑,猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度仍以20%（v/v）为宜。     

褪黑素与盐酸多巴胺在猪精液冷冻保存中的应用效果

为给改良猪精液冷冻稀释液配方提供参考数据,分析了不同浓度褪黑素和盐酸多巴胺对猪精子冷冻后畸形率和顶体完整率的影响。结果表明,10mmol/L褪黑素及3种浓度的盐酸多巴胺(0.1mmol/L,1mmol/L,10mmol/L)均能有效改善冻后猪精子的畸形率和顶体完整率,两种试剂均可在猪精液冷冻中进一步推广应用。     

谷氨酰胺与鸡卵黄低密度脂蛋白提高猪精液冷冻效果的研究

为提高猪精液冷冻保存效果,在9％鸡卵黄低密度脂蛋白(LDL)冷冻稀释液的基础上,研究了添加不同浓度的谷氨酰胺对猪精液冷冻效果的影响.结果表明:在LDL冷冻稀释液中添加谷氨酰胺可显著提高猪精子冷冻效果(P＜0.05),较适宜添加量为40 mmol/L.     

猪精液冷冻保存的初步研究

采用液氮熏蒸法制作猪冻精颗粒 ,对稀释液及冷冻保护剂进行优化筛选。结果表明 ,在 5种稀释液中 ,5号稀释液优于其他 4种 (P<0 .0 5 ) ;甘油的冷冻保护性能优于乙二醇和二甲基亚砜 (P<0 .0 1) ,其适宜浓度为2 m L/ L;稀释液中添加安钠咖可有效延长精子的冻后存活时间 (P<0 .0 1)。猪精液冷冻效果的关键因素是冷冻温度、冷冻速度和解冻温度 ,通过对不同温度情况的研究 ,初步制定了猪精液冷冻温度曲线。     

稀释液·清洁剂·冷冻程序对猪精液冷冻效果的影响

探讨了稀释液、清洁剂及冷冻程序对猪精液冷冻保存效果的影响。结果显示:①稀释液Ⅳ保存鲜精,精子活率明显低于其他组(P<0.05);但其作为冻精的解冻稀释液时,效果最佳(P<0.05),说明猪精液冷冻保存时可采用第Ⅰ～Ⅲ组稀释液,而解冻时采用第Ⅳ组较佳。②稀释液中于不同阶段添加SDS(Sodiumlaurylsulfate,十二烷基硫酸钠)或OEP(OrvusESPaste,清洁剂)均能显著提高冷冻精子活率(P<0.05),SDS与OEP对冻精活率的影响无显著差异(P>0.05)。③精液冷冻程序采用-70℃、液氮熏蒸与直接液氮熏蒸在对解冻后冻精精子活率上无显著差异(P>0.05)。添加咖啡因能有效提高冻精的解冻后活率。     

十二烷基磺酸钠对山羊精液冷冻效果的影响

在山羊冷冻精液稀释液中添加浓度分别为0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%的十二烷基磺酸钠(SDS),探讨SDS对山羊精液冷冻品质的影响。结果表明,在冷冻精液稀释液中添加SDS可显著提高山羊精子活率、顶体完整率和质膜完整率,添加量为0.10%时精子活率最高,为73.90%;添加量为0.20%时顶体完整率最高,为58.46%;添加量为0.10%时精膜完整率最高,达54.13%。随着SDS添加浓度的增加,冻后精子质量也随之改善,但添加量至0.20%时,冻后精子质量显著下降(P<0.01)。本次试验SDS的最佳添加量为0.10%。     

猪精液冷冻与常温保存技术的研究

为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。     

不同抗氧化剂对金华猪精液冷冻保存效果的影响

为了观察冷冻稀释液中添加不同浓度的抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)、绿茶多酚(GTPs)、维生素E(VE)和超氧化物歧化酶(SOD)对金华猪精液冷冻保存效果的影响,分别在冷冻稀释液中添加0.125、0.25、0.5 mmol.L-1的GSH,10、15、20 mmol.L-1的GTPs,1、2、4 mg.mL-1的VE和1 000、2 000、4 000 I U的SOD,采集活率较高的金华猪精液,用上述含抗氧化剂的冷冻稀释液稀释后进行冷冻保存,分别检测4个处理组精子4℃平衡后的活率和解冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率。结果表明,在金华猪精液的冷冻稀释液中分别添加15 mmol.L-1GTPs、2 mg.mL-1VE、4 000 I U SOD可显著提高猪精子4℃平衡后的活率、解冻后精子活率和质膜完整率(P0.05)。     

猪精液冷冻技术的研究进展

文章综述了猪精液冷冻技术的国内外研究概况,简要阐述了精液冷冻保存机理,并从冷冻保存稀释液、冷冻保护剂、冷冻、解冻和保存等方面阐述了影响猪精液冷冻的因素,指出了目前在猪精液冷冻理论和实践中存在的问题,针对这些问题提出了解决方法,并对猪精液冷冻技术的研究前景做了展望。     

他克林对猪精子冻后质量、抗氧化能力及糖代谢的影响

旨在研究他克林对猪精液冻后质量、抗氧化能力及糖代谢的影响机制。手握法采集12头18～24月龄健康杜洛克种公猪精液,在其冷冻保存稀释液中加0.10mmol/L他克林并冷冻保存,检测冻后精子活率、质膜完整率、顶体完整率和畸形率、线粒体膜电位、DNA完整性,同时利用试剂盒检测总抗氧能力、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、总胆固醇含量、丙酮酸含量及己糖激酶活性。结果表明,与鲜精相比,冻融后精子活率和质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位、DNA完整性、抗氧化能力及糖代谢指标均极显著下降,畸形率极显著升高。与空白组相比,他克林显著提高冻后精子顶体完整率、DNA完整率、超氧化物歧化酶、丙酮酸含量;极显著提高精子活率、质膜完整率、线粒体膜电位、总抗氧能力、丙二醛含量、总胆固醇含量及己糖激酶活性,极显著降低畸形率。总之,猪精液冷冻前添加浓度为0.10 mmol/L的他克林可能通过提高抗氧化能力和糖代谢水平改善冻融后猪精子的质量。     

HSP90蛋白表达量与牛精子抗冻性的关系

【目的】探索热应激蛋白90（HSP90）表达量与牛精液冷冻-解冻后品质的关系。【方法】采用假阴道法采集身体健康、年龄2～4岁的9头荷斯坦奶牛精液（编号1～9）,测定新鲜精液指标（活力、形态、活率和密度）,评定其品质,合格的精液样品经过冷冻解冻后检测其精子活率、质膜完整率和顶体完整率,并根据冻后品质将其分为HFTs(High freezing resistance teams)和LFTs（Low freezing resistance teams) 2组,对精子HSP90蛋白进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳和Western blot检测,分析其表达量与精子抗冻性的关系。【结果】不同牛个体精液冻后品质相差较大。SDS-PAGE电泳结果显示,HFTs组的分子质量约为90 ku的蛋白表达量显著高于LFTs组（P＜0.05）,经Western blot分析,该蛋白为HSP90。HSP90蛋白表达量与冷冻-解冻后的牛精子品质呈明显正相关,其与精子活率、顶体完整率、质膜完整率的相关系数分别为0.364,0.447和0.402。【结论】HSP90蛋白表达量可以作为判断牛精子抗冻性的指标之一。     

犬常规冷冻稀释液中添加谷胱甘肽的研究

随着中国国民经济的迅速发展,军、警犬得到广泛应用的同时,肉用犬的饲养已经形成规模,宠物犬进入百姓家庭,犬的数量日益增加。为适应国内军、警、生物医学用犬的特点和宠物犬品质提高的需要,人们已经采用犬的人工授精技术提高种公犬的利用率,使优良公犬能充分发挥高产的遗传性。如今养犬业发达的国家,在犬的繁殖生产中大部分采用冷冻精液技术对犬进行人工授精,这种技术的关键在于精液的稀释处理。为提高犬冷冻精液的质量,人们向稀释液中添加各种物质以保护精液。本实验在稀释液中添加谷胱甘肽(GSH),利用其作为过氧化-还原酶系统的作用物,能及时保护精子免遭氧化及过氧化反应终结产物的伤害,使精子脂膜结构保持稳定,提高精液质量。实验将冷冻稀释液与犬精液按1︰1稀释,平均分成6组,依次向每组添加1、5、10、15、20mmol/L不同浓度的谷胱甘肽,设最后1组为对照组。冷冻后,从每次试验的各浓度组随机抽取3支细管进行解冻,镜检精子活力,记录数据。再经姬姆萨染色法染色,观察顶体完整率和畸形率。试验结束后,采用方差分析法对数据进行分析。实验结果表明:添加5mmol/L谷胱甘肽的冷冻精液解冻后,精子活力、顶体完整率均优于对照组,畸形率低于对照组,5mmol/L为最优添加浓度。     

超低温冷冻对俄罗斯鲟精子抗氧化酶活性的影响

为了探讨超低温（-196℃）对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）和谷胱甘肽还原酶（GR）等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH—PX活性较鲜精组显著升高（P〈0．05）,较未添加保护液组显著降低（P〈0．05）,GR的活性则显著低于鲜精组（P〈0．05）,但显著高于未添加保护液组（P〈0．05）;添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH—PX活性较鲜精组显著降低（P〈0．05）,较未添加保护液组显著升高（P〈0．05）,GR活性则显著高于鲜精组（P〈0．05）,但显著低于未添加保护液组（P〈0．05）。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。     

驴精液冷冻保存的研究

试验以解冻后精子的活力、顶体完整率、顶体膨胀率、顶体破损率、尾部畸形率等几个重要评定指标为依据,筛选了几种驴冻精的冷冻稀释液配方,将其中较好的稀释液作为对照组,再分别进行细管冻精、颗粒冻精和添加不同剂量安钠咖的对比试验.结果表明:5号稀释液的冻后精子活力要显著高于其他4种稀释液(P0.05),精子活力达到0.31,顶体完整率达62.8%;细管冻精的活力要显著高于颗粒冻精(P0.05);在冷冻液中添加安钠咖2mg·mL-1能显著提高解冻后精子的活力(P0.05),使顶体的膨胀率降低9%.     

大豆卵磷脂取代卵黄对猪精液低温保存的影响

为了进一步优化猪精液低温保存稀释液配方,用不同浓度（1．50％、3．00％、4．50%）的大豆卵磷脂取代稀释液中的卵黄,进行猪精液低温保存试验。结果表明,以卵磷脂完全取代猪精液低温保存稀释液中的卵黄时,3．00％、1．50%浓度组与含20．00％卵黄的常用稀释液保存效果相当（3％：P〉0．05,1．5％：P〈0．01）,其中含1．50％卵磷脂的稀释液保存效果最好。     

大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素对山羊冻精效果的影响#br#

为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素（proanthocyanidin，PC）对山羊精子的冷冻保护作用，以20％卵黄为对照（EY组），分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60 μg·mL-1的PC（分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组），冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明，当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40 μg·mL-1（SL3组）时，解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高，分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%，显著高于其他PC添加组和EY组（P<0.05）。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶（SOD）（224.87 U·mL^-1）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量（129.6 U·L^-1）最高，总caspase凋亡率（54.33%）和TUNEL凋亡率（41.36%）最低，与EY和SL0组差异显著（P<0.05）。当PC的添加浓度提高至60 μg·mL^-1（SL4组）时，解冻后精子质量显著下降，表现为对精子毒性作用。综上，在山羊精液冷冻中，大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40 μg·mL^-1可降低精子氧化损伤和细胞凋亡，提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果，提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景