中华鳖洞庭湖群体、黄河群体及其杂交种稚幼体生长对比试验

2011年7月5日至10月27日共114 d,对中华鳖洞庭湖群体、黄河群体及其杂交种绿卡鳖(洞庭♀×黄河♂)的稚幼体阶段进行了生长比较试验,整个生长过程在自然温度下进行。结果表明,生长速度表现为洞庭>绿卡>黄河,存活率为绿卡>洞庭>黄河,其中绿卡的存活率为100%;在整齐度方面,从大到小的顺序为黄河>绿卡>洞庭,而绿卡的非常接近黄河;饵料系数则为黄河>绿卡>洞庭。综合来看,在稚幼期阶段,绿卡群体要优于洞庭湖群体和黄河群体。中华鳖背甲长、背甲宽、体高与体重有明显的正相关关系,体重的影响因子高低表现为体高>背甲宽>背甲长。     

中华鳖5个不同群体的形态差异分析

通过对中华鳖Trionyx sinensis洞庭(DT)、黄河(HH)、黄沙(HS)、日本(RB)以及绿卡(LK)(洞庭与黄河杂交子代,DT♀×HH ♂)5个不同群体16项生物学外部形态性状的测量,采用多元分析方法对其进行比较分析.聚类分析结果表明,绿卡与其母本洞庭群体先聚合,然后再与其父本黄河群体聚为一支,而黄沙和日本群体另外聚为一支,然后两支再汇聚;主成分分析得到了2个主成分,其贡献率分别为51.93％和11.02％,累计贡献率达62.95％;在16个测量参数中挑选9个对判别贡献较大的参数建立5个群体的判别函数,判别准确率为61.7％～89.5％,判别分析结果也显示,中华鳖5个不同群体分为两大支.     

中华鳖5个不同群体的形态差异分析

通过对中华鳖Trionyx sinensis洞庭(DT)、黄河(HH)、黄沙(HS)、日本(RB)以及绿卡(LK)(洞庭与黄河杂交子代,DT♀×HH♂)5个不同群体16项生物学外部形态性状的测量,采用多元分析方法对其进行比较分析。聚类分析结果表明,绿卡与其母本洞庭群体先聚合,然后再与其父本黄河群体聚为一支,而黄沙和日本群体另外聚为一支,然后两支再汇聚;主成分分析得到了2个主成分,其贡献率分别为51.93%和11.02%,累计贡献率达62.95%;在16个测量参数中挑选9个对判别贡献较大的参数建立5个群体的判别函数,判别准确率为61.7%～89.5%,判别分析结果也显示,中华鳖5个不同群体分为两大支。     

中华鳖黄河群体选育世代F_1、F_2及F_3遗传变异微卫星分析

以中华鳖黄河群体的选育基础群体(F0)和太湖群体为对照群体,采用微卫星标记技术对黄河群体的选育世代F1、F2及F3的遗传变异进行了测定和分析。结果表明:(1)从所筛选的10个微卫星位点中,5个测试群体共检测出240个等位基因;平均等位基因数(Na)为4.60～5.30,平均有效等位基因数(Ne)为3.24～3.59,平均观察杂合度(Ho)为0.483 3～0.530 0,平均期望杂合度(He)为0.594 9～0.645 9,平均多态信息含量(CPI)为0.534 0～0.568 4,这些遗传参数表明中华鳖存在丰富的可供选育用的遗传多样性基础。(2)F1、F2及F3选育世代的遗传多样性参数Ho、He及CPI一致地显示出随着选育代数的增加而降低的明显趋势,证明以生长、体色、体型等表型指标为直观选育指标的群体选育,对遗传型指标产生了可检测到的影响。(3)黄河群体的选育基础群体和3个选育世代在聚类分析中聚为一支,而太湖群体单独为一支,显示中华鳖的黄河、太湖两大地理群体间存在较大遗传分化,3代选育并未改变这一历史性格局。     

中华鳖黄河群体选育世代F1、F2及F3遗传变异微卫星分析

以中华鳖黄河群体的选育基础群体（F₀）和太湖群体为对照群体,采用微卫星标记技术对黄河群体的选育世代F₁、F₂及F₃的遗传变异进行了测定和分析。结果表明：（1）从所筛选的10个微卫星位点中,5个测试群体共检测出240个等位基因;平均等位基因数(N_a) 为4.60～5.30,平均有效等位基因数(N_e)为3.24～3.59,平均观察杂合度(H_o)为0.483 3～0.530 0,平均期望杂合度(H_e)为0.594 9～0.645 9,平均多态信息含量(C_PI)为0.534 0～0.568 4,这些遗传参数表明中华鳖存在丰富的可供选育用的遗传多样性基础。（2）F₁、F₂及F₃选育世代的遗传多样性参数H_o、H_e及C_PI一致地显示出随着选育代数的增加而降低的明显趋势,证明以生长、体色、体型等表型指标为直观选育指标的群体选育,对遗传型指标产生了可检测到的影响。（3）黄河群体的选育基础群体和3个选育世代在聚类分析中聚为一支,而太湖群体单独为一支,显示中华鳖的黄河、太湖两大地理群体间存在较大遗传分化,3代选育并未改变这一历史性格局。     

中华鳖5群体稚鳖阶段养殖性能比较

在露天水泥池养殖条件下,比较了黄河鳖、日本鳖、太湖花鳖、本地鳖、杂交鳖等5个群体稚鳖养殖生长情况。结果表明,日本鳖和杂交鳖孵化率最高,达到96%以上,其次是本地鳖和太湖花鳖,黄河鳖最低;杂交鳖生长速度最快,成活率最高,饵料系数最低,养殖性能最佳;5群体越冬成活率达95%。     

中华鳖三群体幼鳖阶段养殖性能的比较

在露天水泥池养殖条件下,比较日本鳖、黄河鳖、本地花鳖等3个群体幼鳖养殖性能。结果表明,生长速度顺序为日本鳖♂>黄河鳖♂>黄河鳖♀>日本鳖♀>本地花鳖♂>本地花鳖♀,日本鳖、黄河鳖均与本地花鳖生长速度有极显著差异,3个群体幼鳖雌雄之间均有极显著差异;日本鳖、黄河鳖群体的单位面积产量分别比本地花鳖群体增加32.49%,31.23%;成活率从大到小顺序排列为日本鳖>黄河鳖>本地花鳖;饲料系数从小到大排列顺序为日本鳖♂<黄河鳖♂<黄河鳖♀<日本鳖♀<本地花鳖♂<本地花鳖♀。建议在目前推广的"温室+外塘"二段法模式中,外塘养殖首选雄性单养模式。     

利用昼夜周期变温促进中华鳖生长的研究

研究了昼夜周期变温对中华鳖生长的影响。在实验室内不同温度条件下,分４组饲养中华鳖,并测定其生长情况。结果表明,在适温范围内的昼夜周期变温,对中华鳖的生长具有促进作用。另外,分析了利用昼夜周期变温促进中华鳖生长的实践意义。     

基于线粒体DNA控制区序列的团头鲂3个选育群体遗传变异分析

为从遗传多样性的角度来了解团头鲂3个选育群体的选育潜力,以团头鲂浦江1号选育奠基群体(F_0)为对照组,采用线粒体DNA控制区标记评估团头鲂3个选育群体的遗传多样性,分析它们的选育潜力。结果显示,在3个选育群体的72条序列中共确定40种单倍型,群体间存在5种共享单倍型,3个选育群体线粒体DNA控制区序列的单倍型多样性(H)范围为0.670～0.978,核苷酸多样性(π)范围为0.004 16～0.006 23,平均核苷酸差异数(K)范围为3.935～5.960,群体内核苷酸序列间平均遗传距离范围为0.003 561～0.004 538,3个选育群体的遗传多样性水平(H、π、K)略高于F_0群体。3个选育群体间Kimura双参数遗传距离和遗传分化指数(F_(ST))范围分别为0.004 039～0.004 700和0.046 4～0.138 6。3个选育群体间成对F_(ST)值差异均显著(P0.05),3个选育群体与F_0群体间成对F_(ST)值差异均极显著(P0.01)。说明3个选育群体的遗传多样性较高,选育潜力较大;同时,选育群体间均存在显著的遗传分化,可见不同方向上的累代人工选育已在一定程度上改变了选育群体的遗传结构。     

饲料中添加牛磺酸对中华鳖摄食和生长的影响

在配合饲料中添加不同浓度(0、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%)的牛磺酸,饲喂中华鳖稚鳖8周,分析牛磺酸对中华鳖摄食和生长的影响。结果表明:添加0.2%~0.8%牛磺酸均能显著促进中华鳖稚鳖对配合饲料的摄食量,日摄食量与摄食率显著提高(P<0.05)。添加量为0.2%时,摄食率最高,随着添加量的逐渐增大,摄食率呈现逐渐下降的趋势。添加0.2%和0.4%的牛磺酸能显著提高中华鳖稚鳖的增重率和特定生长率(P<0.05)。饲料中添加牛磺酸可对中华鳖起到诱食作用,并促进其生长,添加量以0.4%时效果最好。     

中华鳖弗氏柠檬酸杆菌的鉴定及病理组织观察

为了确定重庆地区仿生态养殖中华鳖(Pelodiscus sinensis)患病死亡的原因,从患病鳖的肠道分离得到一株优势菌PS01,对该菌进行了形态学观察、人工感染、生理生化特性测定、16S rRNA和gyrB基因序列分析、病理切片观察以及药敏试验。结果表明:人工感染中华鳖患病症状同自然发病症状;16S rRNA和gyrB序列构建的进化树表明,该菌与弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)同为一枝,相似性分别为99.7%、98.7%;病理组织观察发现,患病中华鳖的肝、脾、肾、胰和肠均有不同程度病变,其中以肠、肝脏、脾脏3个组织病变最为严重,肠绒毛大部分坏死脱落、肝细胞肿胀、胞核空泡化、脾脏红白髓混合分布、胰脏和肾脏轻度病变、胰腺细胞与肾小管上皮细胞肿大,其余组织未观察到明显变化。药敏试验表明,菌株PS01对多西环素等18种抗菌药物高度敏感,对氟苯尼考等3种抗菌药物中度敏感,对复方新诺明等18种抗菌药物表现为耐药。研究结果表明,弗氏柠檬酸杆菌为中华鳖的致病菌,其对30 g左右的中华鳖半致死浓度为9.3×10⁴ CPU·g^-1,...     

中华鳖、黄沙鳖及黄沙鳖F_1代生长性状比较分析

【目的】比较分析中华鳖、黄沙鳖及黄沙鳖F1代群体的生长性状,以期获得黄沙鳖的性状评价指标,为黄沙鳖优良生长性状的选育提供参考。【方法】中华鳖、黄沙鳖和黄沙鳖F1代种群在相同条件下饲养,养殖1年和2年时分别测量3个鳖群的体重、体长、体宽、裙边长和裙边宽,并进行各性状指标的优劣分析。【结果】中华鳖、黄沙鳖和黄沙鳖F1代种群在相同条件下饲养1年后,3个鳖群的平均体重差异不显著（P〉0.05）,但在体长、体宽、裙边长和裙边宽指标方面,黄沙鳖F1代极显著优于中华鳖（P〈0.01）;饲养2年后,黄沙鳖F1代比中华鳖更具生长优势,黄沙鳖F1代与黄沙鳖的生长性状差异不显著（P〉0.05）,但各项生长指标均有所提高。【结论】对黄沙鳖的后代不断进行筛选,可获得性状优良的黄沙鳖群体。     

MicroRNA-499对中华鳖脂类代谢相关基因表达的影响

采用体内注射microRNA-499特异性抑制剂antagomirs的方法,揭示microRNA-499对中华鳖脂类代谢相关基因的调控作用。选取健康稚鳖15只,随机分成3组,分别设为空白对照组、注射生理盐水组和注射miR-499 antagomirs组。在同一时间点连续注射3 d后,测定中华鳖血清和肝脏中甘油三酯和总胆固醇含量,采用实时荧光定量PCR测定肝脏中microRNA-499和脂类代谢相关基因表达水平。结果表明,相对于空白对照组和注射生理盐水组,注射miR-499 antagomirs导致中华鳖肝脏甲状腺激素应答蛋白(THRSP)和钠/碘共同转运体(NIS)的表达水平升高,肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)表达水平降低(P<0.05)。microRNA-499影响中华鳖脂类代谢相关基因的表达水平,这可能与中华鳖脂肪生成和脂肪酸β-氧化有关。     

不同雌雄配比对中华鳖人工繁殖受精率的影响

研究了中华鳖(Pelodiscus sinensis)人工繁殖不同雌雄配比的受精率差异,结果显示:在放养密度3750~4500 kg/hm2,亲鳖规格♀1.5 kg/只、♂2.0 kg/只条件下,雌雄配比可达8∶1。在不增加水体面积和投资情况下,雌雄比8∶1与5∶1相比多产受精卵13500~18000枚/hm2,可增加纯利润27000~30000元/hm2。     

饲料蛋白水平对中华鳖稚鳖生长和消化酶活性的影响

配制蛋白水平分别为34%,37%,40%,43%和46%的五组等能饲料,饲养中华鳖日本品系稚鳖（370±005 g）8周,探讨饲料不同蛋白水平对稚鳖生长、饲料利用率以及消化酶活性的影响。试验结果表明,试验鳖的增重率、饲料利用效率随着饲料蛋白含量的增加而提高,在43%蛋白饲料组达到最佳值（P<005）;当饲料蛋白含量增加到46%,试验鳖生长表现不再显著提高（P>005）。随着饲料蛋白水平的提高,试验鳖胃、肝脏和肠道的蛋白酶活性均呈现上升趋势,其中胃和肝脏蛋白酶活性均在43%蛋白饲料组达到最大值,肠道蛋白酶活性在46%蛋白饲料组最高。各组织中淀粉酶活性以及肝脏脂肪酶活性随饲料蛋白水平的提高显著下降（P<005）,胃和肠道脂肪酶活性下降趋势不显著（P>005）。     

Effects of Stocking Density on Water Quality,Growth and Economic Benefits of Chinese Soft-shelled Turtle Pelodiscus sinensis in Ponds

The Chinese soft-shel ed turtle Pelodiscus sinensis is a high-valued freshwater species cultured in China. This study in-vestigated the effects of stocking density on water quality, growth performance and economic return of Pelodiscus sinensis cul-tured in ponds. P. sinensis were stocked at densities of 1 ind./m2 (LD: low stocking density) and 2 ind./m2 (HD: high stocking density) in 3 000-m2 ponds, with three replicate ponds for each density. P. sinensis juveniles were fed with a commercial dry pel et feed of 46% crude protein and minced fil et of silver carp ans cultured for 122 days. The results showed that the levels of total nitrogen (TN), total phosphorous (TP), Chlorophyl-a (Chl. a) and turbidity in LD treatment were significantly lower than those in HD treatment (P<0.05). The mean TN and TP concentration in LD treatment was 29.3% and 35.7% lower compared to the HD treatment at the end of the experiment, respectively. Mean survival rates, final weight, average growth rates and PER were significantly higher in LD treatment compared with the HD treatment (P<0.05), respectively. Production was significantly af-fected by stocking density, which was higher in HD treatment, but the net income was higher in LD treatment. The results sug-gest that turtles with mean weight 55.6 g rearing at a low stocking density (1 ind./m2) in ponds had a positive effect on overal economic return and was effective at improving turtle growth performance and water quality.     

中华鳖人工繁殖不同雌雄配比对孵化率的影响研究

采用雌雄配比(5～8)∶1,不同配比亲鳖所产受精卵在相同孵化条件下,孵化率无显著性差异(P>0.05)。孵化率高低只与孵化环境因子有密切关系,与性别比无关。     

有益微生物对中华鳖养殖池塘水质及细菌数量的影响

[目的]研究枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌及二者等比例混合剂的应用对中华鳖养殖池塘水质及总异养细菌数量的影响.[方法]在试验池塘分别施用1 mg/L枯草芽孢杆菌、1 mg/L植物乳杆菌,枯草芽孢杆菌(0.5 mg/L)和植物乳杆菌(0.5 mg/L)的混合剂,研究其对中华鳖养殖池塘水体的亚硝酸盐含量、氨氮含量、溶解氧含量、pH及总异养细菌数量的影响.[结果]施用这些有益微生物对养殖水体的溶解氧及pH没有明显影响.混合剂对养殖水体的氨氮及亚硝酸盐的去除效果最为明显,氨氮及亚硝酸盐含量分别降低42.37％和45.56％.其次为枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌,可使水体中的氨氮及亚硝酸盐含量分别降低34.60％、31.63％和14.54％、15.59％.混合剂、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌添加组和对照组的总异养细菌数量分别为3.02×105、3.09×105、3.13 × 105、3.45 × 105 cfu/ml,各试验组无显著差异(P＜0.05).[结论]使用混合剂不仅能有效地改良水质,而且水体总异养细菌数量最少.     

中华鳖对嗜水气单胞菌粗脂多糖(LPS)的免疫应答

将采用温酚法从嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、柱状嗜纤维菌(Cytophaga columnaris)和叉尾鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)中提取的粗脂多糖(crude lipopolysaccharide,LPS)作为免疫原,注射接种中华鳖(Pelodiscus sinensis)后,通过测定受免鳖的交叉凝集抗体效价、肾脏和血液中吞噬细胞的吞噬活性和对A.hydrophila活菌细胞内杀菌活性,比较了3种致病菌的粗LPS对中华鳖的免疫原性。试验结果表明,从3种致病菌中提取的粗LPS对中华鳖均具有较强的免疫原性,受免鳖的血清中存在对3种致病菌的交叉凝集抗体,与对照鳖相比,肾脏和血液中吞噬细胞对吞噬原的吞噬活性和对A.hydrophila活菌杀菌活性明显上升。说明在3种供试菌的粗LPS上不同程度地存在3种致病菌的共同保护性抗原。     

兴安落叶松基本群体与育种群体RAPD多样性分析

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)分子标记并结合表型性状对来自乌伊岭、甘河、库都尔、嫩江、莫尔道嘎、阿尔山等6个兴安落叶松Larix gmelinii基本群体的270个样本进行遗传多样性分析.从450个RAPD引物中筛选出23个条带清晰、多态性高的引物,共检测出186个条带,其中182个为多态性条带,多态位点百分率为97.85％,各群体多态位点百分率(PPB)为87.10％～94.09％,所有群体的基因多样度指数(Ht)为0.374 3,群体内基因多样性(Hs)为0.322 6,群体间遗传多样性为0.051 7,86.19％的遗传变异存在于群体内,13.81％的遗传变异存在于群体之间,Shannon指数平均值为0.482 1,Nei's指数平均值为0.322 6;通过对6个群体聚类分析,以0.09的遗传距离可将6个群体聚为3个类群,为小兴安岭分布区、大兴安岭西北部分布区、大兴安岭南部分布区,遗传距离与地理距离存在显著正相关;兴安落叶松4个群体的生长性状表明,树高、胸径、材积遗传变异系数分别为10.25％～20.78％,14.93％～28.37％,35.03％～74.36％,存在着丰富的变异.同兴安落叶松育种群体的遗传变异比较,多态位点百分率、等位变异标记数、Nei's指数、Shannon指数分别高出5.32％,1.13％,4.94％,5.68％,群体总遗传变异高出8.78％,表明兴安落叶松基本群体的遗传变异水平、遗传多样性均高于育种群体,基本群体在群体间的遗传分化要高于育种群体,两者都证实遗传变异主要存在于群体内.