甜玉米成熟胚和幼胚再生性比较分析

采用21种不同基因型的甜玉米,以成熟胚和幼胚两种不同外植体,对其愈伤组织的诱导、继代培养和分化进行了研究.结果表明,玉米的成熟胚和幼胚与愈伤组织诱导率相关,但两种外植体诱导出的愈伤组织状态明显不同,幼胚诱导出的愈伤组织状态普遍比成熟胚的好.对愈伤组织状态进行了分类,研究了出愈率、克隆力、芽点数与植株再生的关系,结果表明出愈率、克隆力与再生能力有较大的相关性.     

甜玉米和糯玉米幼胚离体培养试验

以N1、N28、T5、1＇6等4个玉米（Zea mays L．）自交系为材料,进行幼胚离体培养．通过愈伤组织的诱导、继代、分化和植株再生等试验,对影响玉米幼胚愈伤组织诱导率和胚性率的因素进行了分析．结果表明,甜、糯玉米幼胚诱导出愈伤组织的能力较为普遍,但诱导率及胚性率因基因型不同、所选用培养基不同而不同,基因型是影响玉米幼胚愈伤组织诱导和幼苗再生的一个重要因素;选择大小为1～2mm的幼胚作为外植体有利于诱导出理想的胚性愈伤组织;2,4-D是愈伤组织诱导和继代不可缺少的植物激素,在愈伤组织诱导及继代过程中2,4-D含量以2．0mg／L为宜;AgNO3有利于胚性愈伤组织的诱导和生长,最佳含量为10mg／L,比对照高27．15％．     

小麦胚愈伤组织的诱导和植株再生

对3个小麦品种的成熟胚及幼胚进行培养，研究不同基因型、培养基对愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明，不同培养基对小麦愈伤组织诱导有一定影响；不同基因型的小麦愈伤组织诱导、分化及生根的能力有一定差别。陕280愈伤组织诱导率及分化率最高。同一品种不同外植体经诱导后愈伤组织产生的能力有所不同，同一品种愈伤组织的诱导率幼胚比成熟胚愈伤组织的高。     

玉米幼胚离体培养的影响因素研究

以玉米幼胚作外植体诱导愈伤组织,研究了幼胚长度、培养基、基因型对愈伤组织诱导和继代的影响,结果表明,基因型是限制幼胚培养的主导因素;幼胚长度以１．０～２．５ｍｍ为宜;试验采用的６种培养基对出愈率影响不大,但它们诱导出的愈伤组织类型不同,在继代过程中,脯氨酸和水解酪蛋白有利于Ⅱ型愈伤组织的形成。     

2,4-D对扁穗牛鞭草幼穗离体培养的影响

以雅安扁穗牛鞭草的幼穗为外植体,研究了2,4-D浓度和不同取材部位对愈伤组织诱导的影响以及继代培养时不同浓度的2,4-D对愈伤组织增殖、分化、生根的影响.结果表明:以幼穗下部为外植体接种在MS+2,4-D 7.0 mg/L培养基中,颗粒状愈伤组织的诱导率高达100.00％;MS+2,4-D 1.0 mg/L是幼穗愈伤组织较为适宜的继代增殖培养基,在该培养基上颗粒状胚性愈伤组织的出愈率为89.44％,愈伤组织的绿苗分化率和生根率都可达100％,平均绿芽点数和生根数等均极显著高于其他处理.     

黑龙江省骨干玉米自交系愈伤组织的诱导及植株再生

选择取了 8个基因型的黑龙江省主栽玉米自交系 ,以幼胚为外植体诱导愈伤组织探讨了基因型、胚龄及幼胚大小、2 ,4 - D浓度对愈伤组织诱导的影响。结果表明 ,基因型是影响幼胚培养的主要因素 ,它决定了愈伤组织的诱导率、状态和类型及分化率 ;幼胚大小以 1～ 2 m m时诱导效果为最佳 ;2 ,4 - D是愈伤诱导的必需外源激素 ,浓度范围为 1～ 3mg· L- 1 ;幼胚的接种方式、夹碎幼胚、Ag NO3的添加一定程度上影响愈伤组织的产生 ;不同基因型继代培养及分化有差异 ;同时建立了较好的玉米再生体系     

粳稻成熟胚高频率再生因素的研究

以水稻成熟胚为外植体,就不同基因型、不同激素浓度对愈伤组织诱导、继代及分化的影响进行研究,并建立了水稻成熟胚高频再生系统。研究结果表明:NMB、NB、CC为较适宜的培养基,可以用于北方粳稻愈伤组织的诱导;在诱导过程中加入2,4-D1～2mg/L有利于愈伤组织的诱导;在继代的过程中加入甘露醇4g/L可明显改善愈伤组织的质量;诱导分化时,进行预分化-分化培养可以显著提高分化率。     

玉米自交系幼胚培养体系的建立

以重庆地区常用的8个玉米自交系幼胚为外植体,研究不同基因型和培养基对玉米幼胚愈伤组织诱导率的影响.结果表明:自交系082在N6B5培养基的愈伤诱导率最高,达到98%,Hy04未诱导出愈伤组织,不同基因型愈伤诱导率的差异具有高度统计学意义.海09042在G1继代培养基的胚性愈伤组织呈颗粒状分散、结构松软、淡黄色,愈伤接种在加KT或加NAA的分化培养基中,以加NAA的绿苗数多.     

玉米成熟胚和茎尖愈伤诱导及其植株再生能力比较

以3种不同基因型的成熟胚和茎尖两种不同外植体为材料，对它们的愈伤组织诱导，继代培养和分化进行了研究。结果表明：玉米的成熟胚和茎尖愈伤诱导率相关，但两种外植体诱导出的愈伤组织状态明显不同，茎尖诱导出的愈伤组织状态普遍比成熟胚的好；两种外植体的愈伤分化率差异明显，成熟胚愈伤组织最高分化率为2．13％，茎尖愈伤组织最高分化率可达21.2％。     

玉米幼胚和成熟胚愈伤组织分化反应性比较

以鲜食玉米为主的13种基因型的成熟胚和幼胚为材料，对它们的愈伤组织诱导．继代培养和分化进行了系统研究。结果表明：玉米的成熟胚和幼胚愈伤诱导率相关，但两种胚诱导出的愈伤组织状态明显不同．幼胚诱导出的愈伤组织状态普遍比成熟胚的好；两种胚的愈伤分化率差异明显，成熟胚愈伤组织最高分化率为2．5％,幼胚愈伤组织最高分化率可达83．3％。     

Study on Somaclonal Variation of Spring Wheat

Somaclonal variation of calli and regenerated plants of spring wheat were detected by using technique RAPD in the study. Calli at different culture stages and regenerated plants derived from young spikes and immature embryos were used as materials. Molecular variation could be reflected from electrophoresis pattern of RAPD fragments at different culture stage in calli, and in regenerated plants derived from different explants, even no phenotype variations were found. Somaclonal variation in calli and in regenerated plants appeared regularly: A higher frequency of variation in hybrids F2 was detected than that of the cultivar that is stable genetically. High variation frequency of RAPD fragments appeared in calli when cultured 75 days. The identical variations of RAPD fragments were observed in calli and in the regenerated plants induced from different genotype or explants. The variation frequency detected is higher in regenerated plants than that of in calli. RAPD could be applied easily and simply to determine variation in level of DNA at each stage cultured in vitro.     

水稻培养力的差异及再生植株诱导研究

以42个水稻品种为材料,采用幼胚、幼穗与成熟胚三种外植体,分别接种于M_1、M_2和M_3三种培养基上诱导愈伤组织,继代培养后,再转入二种分化培养基D_1与ID_2上诱导再生植株。通过统计分析,筛选出再生绿苗率高的基因型有东野-1、P_16、P_11、P_10与P_23等五个:外植体选用幼胚最佳,幼穗次之;愈伤组织诱导基以M_1与M_3效果较好;分化培养基D_1的诱导再分化能力高于D_2。     

Establishment of Plant Acceptor System for Hyperosmosis Transformation.

Calli and adventitious buds induced from different explants such as young stems and leaves of tomato variety Moneymaker,and mature embryos and young spikelets of rice variety TP309 were used to establish hyperosmotic transformation system at various osmotica treatments.The results revealed that the calli induced from tomato young leaves and rice young spikelets were the ideal transfomation acceptor.The cells fo calli were still vigorous when treated with 0.75 mol/L hyperosmotic solution for 4 hours.The differentiation rates of calli varied from 7.5% to 93.3% in different media.The bud differentiation was apparently inhibited by hyperosmotic treatments.0.75mol/L sucrose hypertonic solution and 0.2mol/L CaCl2 solution were favorable hyperosmoticum and hypoosmoticum respectively.     

玉米幼胚转基因受体系统的建立

以5个玉米自交系幼胚为外植体,研究了基因型、预处理时间、继代时间、培养温度以及器皿等因素对受体系统建立的影响。结果表明:5个基因型的外植体在相同条件下均可诱导出愈伤组织,但是不同基因型间胚性愈伤组织的诱导存在显著差异。继代时间对于愈伤组织生长亦有显著影响。此外,不同培养温度以及不同培养器皿等亦是胚性愈伤组织诱导的重要影响因素。实验得出最佳玉米幼胚转基因受体系统为:基因型78599在4℃冷藏预处理1 d,用试管25℃环境下诱导培养2次,继代培养3~4次。     

激素对小麦幼胚胚性无性系高频率诱导的影响

研究了 3种外源激素对 3个小麦品种 (系 )幼胚体细胞胚性无性系高频率形成的影响。结果表明 :2 ,4- D能显著促进小麦幼胚体细胞胚性无性系的形成 ,并存在着基因型间的差异 ,在小麦体细胞无性系形成中起主要作用。其最佳适用质量浓度为 2 .0～ 3.0 m g/ L ,2 ,4- D的这种作用能被培养基中加入的细胞分裂素所加强 ,这种作用在不同的细胞分裂素间是有差异的 ,在质量浓度 0 .1～ 2 .0 m g· L- 1 内 ,随 KT浓度的升高 ,6 - BA浓度的降低 ,胚性愈伤诱导率提高     

Bar表达框基因载体高频转化栽培小麦

    为探讨无载体主干序列(细菌DNA)的表达框基因直接转化栽培小麦的可行性和有效性,对栽培小麦(Triticum aestivum L.)进行了bar表达框基因的基因枪转化.通过试材培养、外植体分离、bar表达框基因分离提取和纯化、基因枪轰击、诱导分化与再生培养、再生苗核酸抽提、转基因检测及除草剂涂抹试验等方法,筛选到23株全部来自幼胚愈伤的独立再生苗,其中18株显示bar表达框基因的整合,且均表现抗除草剂效应.基因型鄂麦12号的转化频率(1.55%)高于鄂恩1号(0.87%),两基因型在1100 psi轰击压下的转化频率均高于900 psi,其中鄂麦12号达到3.51%,明显优于鄂恩1号,且高于常规小麦基因枪的平均转化频率0.50%～1.00%.鄂麦12号幼胚在1100 psi轰击压下转化bar表达框基因可获高转化效应.表明受体基因型、外植体类型、轰击压等因素在优化表达框基因转化体系中具重要作用.推断表达框基因转化方法具有片段小、环境安全、转化效率高、整合模式简单、表达高效等优势,在作物遗传转化中具有广泛应用前景.     

农杆菌介导的水稻草矮病毒NS6基因的转化

水稻草矮病毒(Ricegrassystuntvirus,RGSV)RNA6片段毒义链编码的非结构蛋白NS6,与病害症状密切相关,被称为病害特异蛋白.因此,应用农杆菌介导法,选取对RGSV表现不同抗性的台农67、中花6号、中花12号、中花15号、台中1号、合系28和063817个水稻品种,以其未成熟胚或成熟胚预培养4d后,诱导生长旺盛的愈伤组织为外植体,将NS6基因导入其中,对影响水稻再生及农杆菌转化的主要因素进行了比较研究,并获得了转NS6基因工程植株.结果表明,以未成熟胚为受体,获得的抗性愈伤组织转化率明显高于成熟胚;水稻不同品种对农杆菌转化反应不同;添加一定浓度乙酰丁香酮和葡萄糖,可提高抗性愈伤组织形成率;选用G418进行抗性筛选能获得转NS6基因再生植株,用卡那霉素筛选产生的愈伤组织则未能获得再生植株.     

植物激素对玉米愈伤组织诱导的影响

设计了含有不同植物激素的4种培养基用于玉米未成熟合子胚愈伤组织的诱导,以确定植物激素在玉米愈伤组织诱导中的作用。结果表明,KT和6-BA会明显降低愈伤组织和胚性愈伤组织的诱导频率,对愈伤组织的生长有明显的抑制作用;2,4-D在愈伤组织诱导中起着重要作用,但是在诱导培养基中添加3.3mg/L Dicamba比2 mg/L 2,4-D的诱导效果更好,除了能提高愈伤组织诱导频率外,更重要的是能提高胚性愈伤组织比例和获得更好的愈伤组织生长状态;并获得了一个用于从玉米未成熟合子胚高效诱导出良好愈伤组织的培养基配方LM6-CI。     

根癌农杆菌介导反义蜡质基因获得水稻植株研究初报

采用根癌农杆菌介导法,将水稻反义蜡质基因导入寒地 4 个水稻品种(系)成熟胚的愈伤组织。这些愈伤组织经连续2 次 25~50 mg/L潮霉素抗性筛选,获得抗性愈伤组织的转化频率为12.15%~25.95%,经分化培养,不同品种的绿苗转化频率分别为 2.49%~4.43%。分化成苗的植株经GUS检测,80%以上的植株叶片呈阳性反应,显示兰色。经 PCR检测,也能扩增出外源基因相应的DNA片断,证明外源基因已整合到转基因植株中。     

蔗糖与麦芽糖质量浓度及添加成分对水稻成熟胚培养的效应

以IR54、639、金糯2号、特优63等4个水稻品种的成熟胚为外植体,以MS为基本培养基,研究了蔗糖与麦芽糖质量浓度及不同添加成分对水稻成熟胚培养的影响.结果表明,在这2种糖质量浓度及其配比试验中,在麦芽糖与蔗糖总量为60 g.L-1下,麦芽糖与蔗糖质量浓度比为1∶2时,愈伤组织诱导率、愈伤组织分化率、绿苗分化率均最高;0.5 mg.L-12,4-D和2 mg.L-1KT配合使用,比使用其他激素配比效果好;不同水稻基因型在不同培养基中的诱导效应存在差异.