油茶上几株类拟盘多毛孢菌的鉴定

类拟盘多毛孢属真菌(Pestalotiopsis-like fungi)是油茶上重要的病原菌,能够引起病害并造成损失。从安徽省旌德县庙首林场油茶病叶中分离到6株类拟盘多毛孢属真菌,采用形态学结合3基因(ITS+TUB+TEF)分子系统学分析鉴定。结果显示,6株类拟盘多毛孢属真菌属于4个种,其中Pestalotiopsis chamaeropis为已知种,系油茶上首次报道,其余3个为系统发育种,由于缺乏足够菌株,没有进一步描述,菌株致病性也需要进一步研究。研究结果预示油茶中可能有更多的未描述的类拟盘多毛孢属的种。应对全国油茶类拟盘多毛孢属真菌的进行全面系统的调查研究,为油茶病害防治和抗病育种提供基础数据。     

从分子系统发育探讨内生拟盘多毛孢与病原拟盘多毛孢的关系

收集马尾松、罗汉松、竹柏、山茶、茶和茶梅等植物的内生和病原拟盘多毛孢菌株,进行形态鉴定,根据rDNA ITS序列分析建立的系统发育树探讨病原与内生拟盘多毛孢之间的相互关系.结果表明,同一个种拟盘多毛孢不论是内生还是病原均聚在系统发育树的同一个分支,如罗氏拟盘多毛孢(Pestalotiopsis lawsoniae)既是马尾松枝条的内生真菌,又是马尾松针叶的病原真菌;卡斯特尼拟盘多毛孢(Pestalotiopsis karstenii)是山茶枝条的内生真菌,在山茶叶片上也是病原真菌;石楠拟盘多毛孢(Pestalotiopsis photiniae)是山茶和茶梅枝务的内生真菌,在马尾松针叶上也是病原真菌;茶拟盘多毛孢(Pestalotiopsis theae)是茶的病原真菌,在金花茶枝叶和罗汉松枝上是内生真菌.说明某些拟盘多毛孢在不同(或相同)的植物或器官中可以表现为内生状态或病原状态,内生拟盘多毛孢在一定条件下可以转变为病原拟盘多毛孢.本研究结果还支持拟盘多毛孢种一般对寄主植物没有专化性的结论.     

根腐病草莓及根系土壤真菌的分离纯化及ITS分子鉴定

为探索根腐病草莓及根系土壤的微生物种类,本文采用稀释涂布平板法和平板划线法对患病草莓根系土壤以及草莓根茎进行真菌分离,并利用ITS基因序列进行分子鉴定。结果表明,从根腐病草莓病株中共分离得到12种不同的真菌,经ITS序列同源性分析,这12种真菌分别属于孢球拖霉属(Gongronella sp.)、黄瓜萎蔫病菌(Plectosphaerella sp.)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis clavispora)、织球壳菌属(Plectosphaerella sp.)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、盘多毛孢属(Neopestalotiopsis sp.)、青霉属(Penicillium sp.)和梭孢壳属/草根霉属(Thielavia sp.)八个真菌种属。其中孢球拖霉属(Gongronella sp.)、盘多毛孢属(Neopestalotiopsis sp.)和梭孢壳属/草根霉属(Thielavia sp.)为首次在草莓根腐病植株中发现。本文的研究结果为草莓土传疾病根腐病的研究及防治提供了参考资料。     

贵州油茶叶枯病病原鉴定研究

本研究采用形态学鉴定及多基因分子鉴定的方法,对贵州省油茶叶枯病病原进行分离、纯化和鉴定。根据形态特征,结合ITS1-TUB2基因所构建的系统发育树综合鉴定,结果表明本研究分离致病菌为拟盘多毛孢属的小孢拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis microspora)。分离菌株KLXY-7-3与Genbank中同源性较高的菌株序列比对分析,分别与小孢拟盘多毛孢菌MF375901. 1、MK409844. 1菌株聚为一个独立的进化分支,且置信度为99%。本研究系统调查采集贵州油茶主要种植区的典型病样,可为该病原菌发生规律及防治时期的研究提供理论依据。     

湛江金银花内生真菌多样性研究

为了解湛江金银花内生真菌的多样性,比较分析不同地区金银花真菌种类差异.采用真菌形态鉴定同时结合真菌ITS序列方法对金银花内生真菌的多样性进行研究.结果从湛江金银花分离鉴定了内生真菌17株,分别属于9个属17个种,其中拟盘多毛孢属Pestalotiopsis为优势属,占分离总株数的29.41％,叶部分离的主要是木霉属Trichoderma和拟茎点霉属Phomopsis,茎部分离的是镰刀菌属Fusarium,花部分离得到的主要是拟盘多毛孢属Pestalotiopsis.不同组织部位的湛江金银花内生真菌在数量和种群组成中存在差异,表现出较丰富的多样性.     

油茶叶枯病原的形态及ITS序列分析鉴定

对一株引起油茶落叶的叶枯病菌进行分离鉴定,为防治该病菌奠定基础。从油茶叶枯病斑中分离得到一株优势菌,通过对其形态特征的观察及rDNA的转录间隔区(ITS)序列测定,并与Genbank中同源性较高的菌株构建系统发育树,最后确定该菌株为拟盘多毛孢属菌,且与小孢拟盘多毛孢菌亲缘关系最近。     

一株韦司梅拟盘多毛孢的鉴定及其发酵液抗乳腺癌活性

【目的】对1株分离自桃树枝的内生真菌N1进行分类鉴定与系统发育分析,探讨其深层发酵液的抗乳腺癌活性,为该菌资源的进一步开发利用提供依据。【方法】通过形态学特征和ITS rDNA序列对野生菌株N1进行分类鉴定;基于ITS1-5.8S-ITS2序列的变异程度对菌株N1遗传多样性进行分析;采用MTT法检测菌株发酵液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇提取物的抗乳腺癌活性;观察乙酸乙酯提取物不同作用时间下乳腺癌细胞的形态变化;采用LC-MS/MS对乙酸乙酯活性提取物的成分进行分析。【结果】根据菌株形态学和ITS rDNA序列特征,将该野生菌株N1鉴定为韦司梅拟盘多毛孢Pestalotiopsis vismiae;其ITS1-5.8S-ITS2序列总变异率为10.3%,表明韦司梅拟盘多毛孢在自然界中具有丰富的遗传多样性。菌株N1深层发酵液乙酸乙酯提取物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的抑制作用最强(P0.05),作用24h的半数抑制浓度(IC50)为131.39μg/mL,作用48h时,细胞呈现凋亡状态。LC-MS/MS数据表征了其中的13个化学成分,确定了6种物质,对其他未能鉴定的7个物质的分子式进行了初步表征。【结论】获得了韦司梅拟盘多毛孢遗传多样性的基础信息,其深层发酵液乙酸乙酯提取物是发挥抗乳腺癌细胞的主要活性物质。     

麻疯树根部内生真菌分离及鉴定

从能源植物麻疯树的根部凸起部分韧皮部、木质部中分离到内生真菌42株,应用PCR技术对分离菌rDNA的内转录间隔区（ITS区）基因克隆后测序,并将所测序列提交到欧洲分子生物学实验室核酸数据库（European Molecular Biology Laboratory Gen-bank）,通过Blast程序将该序列与数据库已有的序列进行分析比较。结果表明,42个菌株分别与Genbank中的拟盘多毛孢菌属Pestalotiopsis、头孢霉属Cephalosporium、枝顶霉孢霉属Acremonium、镰孢霉菌Fusarium、木霉属Trichoderma、毛霉属Mucor、青霉属Penicillium、根霉属Rhizopus、曲霉菌属Aspergillus和茎点菌属Phoma具有高度同源性（达到99%以上）,其中拟盘多毛孢为优势属,其次为青霉属和茎点菌属。表明麻疯树内生真菌有着丰富的多样性特点。     

1株拟盘多毛孢菌的培养·纯化及其ITS区的克隆测序

[目的]为拟盘多毛孢菌分离、纯化及ITS区克隆测序相关研究提供依据。[方法]对鸡枞菌内生拟盘多毛孢菌进行分离、纯化,并通过形态学及分子生物学的方法进行鉴定,对其ITS区进行PCR扩增和克隆测序分析。[结果]形态学鉴定结果显示没有已报道的拟盘多毛孢菌与其相似,系统发育树结果也表明其属于一单独分支中。[结论]建立拟盘多毛孢菌的ITS序列数据库是十分必要的。     

1 株拟盘多毛孢菌的培养·纯化及其ITS区的克隆测序

[目的]为拟盘多毛孢菌分离、纯化及ITS区克隆测序相关研究提供依据。[方法]对鸡枞菌内生拟盘多毛孢菌进行分离、纯化,并通过形态学及分子生物学的方法进行鉴定,对其ITS区进行PCR扩增和克隆测序分析。[结果]形态学鉴定结果显示没有已报道的拟盘多毛孢菌与其相似,系统发育树结果也表明其属于一单独分支中。[结论]建立拟盘多毛孢菌的ITS序列数据库是十分必要的。     

瓜栗病原真菌的鉴定

鉴定了广州地区瓜栗「Ｐａｃｈｉｒａ ｍａｃｒｏｃａｒｐａ（Ｃｈａｍ．ｅｔ．Ｓｃｈｌｅｃｈｔ．）Ｗａｌｐ．」上８种病原真菌,即大果拟茎点霉（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｍａｃｒｏｃａｒｐａｅ Ｐ．Ｇ．Ｘｉ．Ｚ．Ｄ．Ｊｉａｎｇ ｅｔ Ｐ．Ｋ．Ｃｈｉ ｓｐ．ｎｏｖ．）,榴莲拟茎点霉（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｄｕｒｉｏｎｉｓ Ｈ．Ｓｙｄ）、可可球二孢（Ｂｏｔｒｙｏｄｉｐｌｏｄｉａ ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ Ｐａｔ．）、胶     

不同保鲜剂对栀子花保鲜的影响

[目的]筛选适用于栀子花保鲜的保鲜剂。[方法]以白色的大花栀子为材料,分别用100、150、200、300 mg/L的8-HQ和1.0%、1.5%、3.0%、5.0%的蔗糖及15.0%、30.0%、45.0%、60.0%的蛇床子配制保鲜液,测定栀子花的鲜重,研究不同保鲜剂对栀子花保鲜效果的影响。[结果]200 mg/L 8-HQ处理的栀子花的重量变化比其他浓度的8-HQ处理都小,说明其采后衰老较慢。1.0%蔗糖处理的栀子花的重量变化比其他浓度的蔗糖处理都小,说明其对栀子花的保鲜效果较好。15.0%蛇床子处理的栀子花的重量变化较小,说明其采后衰老较慢。蛇床子对栀子花的保鲜效果没有8-HQ和蔗糖对栀子花的保鲜效果好。[结论]200 mg/L 8-HQ、1.0%蔗糖、15.0%蛇床子3个处理对栀子花的保鲜效果较好。     

信阳市油茶病害及其病原鉴定

通过野外调查及室内病原分离、检测与鉴定对信阳市油茶(Camellia oleifera Abel)病害发生及病原种类进行了研究。结果表明:信阳油茶病害发生普遍,为害严重。主要病害为炭疽病、灰斑病、褐斑病、枝枯病、枯稍病,病原菌分别为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、茶拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis theae)、壳囊孢菌(Cyto-spora sp.)、壳色单隔孢菌(Diplodia sp.)、小孢拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis microspora)。其中,壳囊孢菌为油茶病害病原新记录。     

大花栀子非组培微体快繁研究

[目的]研究大花栀子非组培微体快繁时基质与激素浓度对外殖体生根的影响,以及生根后外殖体叶片生物学反应。[方法]选择带一叶一芽的1年生大花栀子短枝作外殖体,采用珍珠岩与蛭石2种不同基质,用NAA5种浓度(0、300、500、800、1000mg/L)处理外植体,在外植体展叶后测定叶片光合速率、蒸腾速率及气孔导度。[结果]基质类型对大花栀子外植体生根无显著影响;NAA的5种浓度中,500、800和1000mg/L3种浓度对外植体生根都有一定的影响,但以800mg/L对外植体生根影响显著。展叶后20d叶片的蒸腾速率和气孔导度与初展叶片差别不大,但光合速率明显高于初展叶片。[结论]大花栀子外植体生根率与培养基质种类关系不大,但与激素浓度密切相关。     

洛阳牡丹、芍药4种真菌性病害鉴定

通过调查洛阳牡丹、芍药种植园圃,记述了牡丹的2种真菌性病害(牡丹灰霉病和牡丹黄斑病)和芍药的2种真菌性病害(芍药红斑病和芍药拟盘多毛孢褐斑病)。根据形态学特征,4种真菌性病害的病原菌分别为灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers.et Fr.)、斑点叶点霉(Phyllostica commonsii Ell.et Ev.)、芍药枝孢霉(Cladosporium paeoniae Pass.)、多毛粘质拟盘多毛孢[Pestalotiopsis langloisii(Guba)P.L.Zhu]。     

大蒲葵叶斑病病原生物学特性研究

对引起大蒲葵叶斑病的拟盘多毛孢(Pestalotiopsis neglecta)进行了生物学特性和形态学研究,结果表明该菌在10～30℃范围内均可生长,最适生长温度为25℃;该茵适宜在偏酸性基质中生长,最适pH值为5；供试碳源对茵丝生长的影响不显著,供试氮源中磷酸二氢铵较有利于茵丝生长.     

灰斑病对山茶叶部真菌群落的影响

为了解叶部病害与真菌区系的关系,本研究比较了山茶(Camellia pitardii)健康叶片与受灰斑病侵染的病叶在春、夏、秋、冬4个季节叶部真菌数量、种群组成和多样性特征等。结果表明:健叶真菌数量和物种丰富度在各个季节都高于病叶,健叶以叶面附生真菌Cladosporium cladosporioides和内生真菌Botryosphaeria dothidea为优势种,而病叶则都以Pestalotiopsis guepini和内生真菌Guignardia camelliae为优势种,并且健叶内生真菌的多样性明显高于病叶。     

黄瓜枯萎病拮抗菌的分离鉴定及其生物防效

从黄瓜根际土壤和根、茎中分离出对黄瓜枯萎病病原菌——尖孢镰刀菌黄瓜专化型具有较强拮抗作用的细菌菌株7株,这些细菌在平板上对尖孢镰刀菌的抑菌效果最高可达46%。经济福平抗生素诱导抗性后,这7株菌株共得到具有抗性的菌株4株:GJ-9、NH-1、P_7、XX_2J_7。检测有利福平标记的菌株在黄瓜苗根系和植株内的定殖能力,结果显示菌株在黄瓜苗具有良好的定殖能力,并且能通过根部运输进入茎中,从而显著提高黄瓜苗的PAL、POD和PPO防御酶活性。盆栽试验结果表明:将筛选到的7株拮抗菌的发酵液对黄瓜苗进行处理,其中拮抗菌NH-1的发酵液对黄瓜枯萎病具有显著的防治效果,其处理后的黄瓜苗病情指数为26.00,防治效果达到66.03%。根据其生长形态特征及对其进行gyrb基因序列分析,鉴定其为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)。