卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响

[目的]确定马齿苋遗传转化时适宜的卡那霉素筛选浓度。[方法]在诱导愈伤组织培养基和愈伤组织增殖培养基中添加不同浓度的卡那霉素,通过统计愈伤组织诱导率和愈伤组织增长率来研究卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响。[结果]卡那霉素对愈伤组织诱导的影响很大,当卡那霉素浓度为20 mg/L时严重抑制了愈伤组织的诱导,而其愈伤组织在卡那霉素浓度为100 mg/L时仍能少量生长,但随着卡那霉素浓度的增大,增长速度变慢,褐化程度逐渐增加。[结论]在进行马齿苋的遗传转化时,愈伤组织诱导阶段可采用20 mg/L卡那霉素作为选择压,如果直接以愈伤组织为转化受体,则可采用80 mg/L作为选择压。     

结缕草农杆菌介导遗传转化影响因子的研究

以结缕草愈伤组织为试材,对利用农杆菌介导法时就辐照、愈伤组织状态、共培养条件及负压处理等辅助处理方法对愈伤组织转化频率的影响进行研究.结果表明,2Gy的辐照剂量利于提高转化频率;1～2个月的愈伤组织适于转化;全光照的共培养条件下转化频率高于16h/8h光照培养和暗培养条件下转化频率;农杆菌与愈伤组织混合培养时给予适当的负压条件可提高愈伤组织转化频率和存活率.     

植物高渗转基因新技术的初步建立

以番茄愈伤组织和水稻愈伤组织为转化受体，以pBG和pB1121为外源DNA，以蔗糖和甘露醇为渗透剂，对植物高渗转基因技术进行了研究．结果表明：高渗转化后愈伤组织GUS基因瞬问表达率为38．9％，经抗性筛选，获得番茄和水稻Basta抗性愈伤组织，番茄Basta抗性愈伤组织经分化培养后，共得到29个Basta抗性芽，证明植物高渗转基因技术得到初步建立。     

卡那霉素对紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响

[目的]研究紫花苜蓿叶片在诱导愈伤组织阶段、愈伤组织分化阶段对卡那霉素的敏感程度。[方法]确定卡那霉素对紫花苜蓿叶片愈伤组织形成的影响,并在形成愈伤组织的基础上,进一步确定卡那霉素对愈伤组织分化的影响。[结果]不同浓度的卡那霉素对紫花苜蓿叶片诱导愈伤与分化均有一定的抑制作用,而且随浓度升高,抑制作用增强;卡那霉素对愈伤组织分化阶段的敏感程度比诱导愈伤阶段高;分化阶段选择压力要控制在25 mg/L以下;延迟加入卡那霉素或在分化阶段降低卡那霉素浓度是对筛选转化苗的可取办法。[结论]该研究为利用农杆菌介导法转化紫花苜蓿奠定了基础。     

南丰蜜橘胚性愈伤组织诱导及其转化研究

南丰蜜橘是原产于中国的古老柑橘品种,其果实皮薄而内甜,深受消费者喜爱,当前南丰蜜橘的品质发生劣变,影响了其商品价值.为采用基因工程育种以改善南丰蜜橘品质,通过诱导其愈伤组织并以其为试材进行了转基因研究.南丰蜜橘自种子实生苗下胚轴处长产生出愈伤组织,挑选胚性愈伤组织进行增殖后,采用根癌农杆菌介导法进行开花相关基因AP1的转化.结果获得22团抗性愈伤组织,平均产出率为7.3团/皿,表明该品种有较高的转化率.抗性愈伤组织经PCR分析、Southern blot检测证实为转化子.研究结果表明南丰蜜橘胚性愈伤组织是基因工程改良的良好受体,可用于其他基因的转化研究.     

硝酸银在水稻农杆菌转化中的作用

以籼稻、粳稻两种类型的成熟种子为外植体研究了不同浓度的AgNO3在水稻农杆菌转化中的作用。结果表明，在农杆菌转化前添加AgNO3可以提高愈伤组织诱导率，最适浓度为8～10mg／L，但对愈伤组织的分化没有明显促进作用；转化后添加低浓度的AgNO3可以减轻愈伤组织的褐化，提高抗性愈伤率和绿苗分化率，最适浓度为2-8mg／L。同时发现，无论是转化前还是转化后，添加高浓度的AgNO3对水稻愈伤组织的分化均具有毒害作用。     

低酚棉胚性愈伤组织农杆菌转化体系建立及转DREB1C植株的获得

利用农杆菌介导法对低酚棉胚性愈伤组织转化转录因子DREB1C基因,探讨了低酚棉胚性愈伤组织对潮霉素的敏感性和胚性愈伤组织状态对转化效率的影响。结果表明：胚性愈伤组织对潮霉素较为敏感,适宜的筛选浓度为25mg／L,可明显抑制非转化组织生长。以继代培养7～14d的胚性愈伤组织作为转化受体,转化率高达56．3％。将转化后获得的抗性愈伤组织转入分化培养基中分化成苗,经过PCR检测得到5株阳性植株。     

普通小麦基因枪转化高效受体系统的建立

以小麦幼胚愈伤组织为转化受体,以植物表达载体质粒pROK2为外源DNA,以蔗糖和甘露醇为渗透剂,研究了愈伤组织生长状态、渗透剂种类及其处理时间和浓度对基因枪转化效率的影响。结果表明,在采用基因枪轰击法对小麦幼胚愈伤组织进行转化的体系中,受体愈伤的最佳发育阶段为胚性启动前期;高渗处理可以使基因枪转化频率得到明显提高,但处理时间过长对愈伤组织的增殖和分化又有明显的抑制作用,用蔗糖进行高渗处理对愈伤组织生长及再生的抑制作用较用甘露醇弱;用0.6 mol/L蔗糖和0.5 mol/L甘露醇分别在轰击前6 h和轰击后18 h进行高渗处理转化效果均最佳。文章建立了高效蔗糖高渗基因枪转化受体系统。     

农杆菌介导的柳枝稷遗传转化体系的优化

【目的】为建立农杆菌介导的柳枝稷高效再生及遗传转化体系。【方法】试验以柳枝稷品种Alamo、Performer及Blackwell的成熟种子为外植体诱导愈伤组织。愈伤诱导6周后,借助解剖镜观察愈伤形态,去除愈伤组织外层含水量大、海绵状愈伤组织,挑选位于愈伤组织中心位置的核状、紧实型愈伤置于继代培养基培养。暗培养3周后,在解剖镜下挑选结构松脆、生长旺盛的愈伤组织按细胞系继代增殖培养。该类愈伤组织易于分化,属单子叶植物愈伤组织分类中的第Ⅱ型。经两次继代增殖培养后,可以获得足够的愈伤组织进行再生和遗传转化研究。为优化柳枝稷Ⅱ型愈伤组织的农杆菌侵染流程,试验比较了3种农杆菌侵染流程下的转基因效率。真空和干燥处理（VD）：将装有愈伤组织及菌液的50 mL离心管置于真空泵中抽真空10 min（压力-0.8MPa）,28℃, 80 r/min慢摇20 min后弃菌液,将愈伤组织堆放于3层滤纸上干燥处理2 h,随后将愈伤组织转入含有500 μL无菌水的2层滤纸上进行共培养;冷处理加真空和干燥处理（CVD）：侵染前将愈伤组织置于3%麦芽糖、300 μmol·L^-1谷氨酰胺（Gln）溶液中冰浴20 min,然后依VD流程侵染,共培养阶段用MP培养基代替无菌水;渗透冷处理加真空和干燥处理（PVD）：用6%的麦芽糖溶液替代CVD中3%麦芽糖溶液。通过比较Gus染色及PCR阳性率来评价三种方法的转化效率。【结果】愈伤挑选方法不仅从柳枝稷低地型品种中挑选得到再生率达95%以上的Ⅱ型愈伤细胞系,也首次获得高地型品种Blackwell的Ⅱ型愈伤组织,分化率达50%。不同转化方法评价过程中发现,低地型品种AlamoⅡ型愈伤组织采用CVD农杆菌侵染流程转化效率最高,达72%,显著高于侵染流程VD（53%）和PVD（44%）。应用CVD转化法,Performer转化率达96%;首次成功进行了高地型品种Blackwell的遗传转化,转化效率为5.6%。【结论】本研究建立了借助解剖镜挑选柳枝稷易于再生的Ⅱ型愈伤组织的方法,该方法适用于柳枝稷不同生态型品种;农杆菌转化过程中采用CVD侵染流程可显著提高转基因效率。本研究首次报道了柳枝稷Ⅱ型愈伤组织的挑选流程,建立了适合不同生态型柳枝稷的高效再生及遗传转化体系,首次获得高地型品种Blackwell的转基因植株,为柳枝稷遗传改良及其功能基因研究奠定基础。该方法也适用与其他难于再生的单子叶植物再生及遗传转化体系的建立。     

雀舌黄杨(Buxus harlandii)愈伤组织遗传转化的研究

利用处在对数生长期的根癌农杆菌Bo Ss和T37菌株和雀舌黄杨愈伤组织共培养后,在无激素MS培养基上获得了转化愈伤组织,经测定转化的愈伤组织内存在相应的冠瘿碱,结果证明T-DNA编码的激素合成酶基因和冠瘿碱合成酶基因在转化愈伤组织内实现了转移和表达。     

4种植物对大灰食蚜蝇生长发育及行为的影响*

 通过以甘蓝、苤兰、青花、油菜植物上的甘蓝蚜喂食大灰食蚜蝇幼虫,研究了这4种十字花科植物次生物质对大灰食蚜蝇生物学习性的影响,结果表明产生的差异是明显的。幼虫历期最短的和最长的是青花与油菜,为9.5d和11.06d。蛹期最短和最长的是甘蓝和油菜,为8.81d和9.68d。蛹重以苤兰的处理最轻,为26.46mg。产卵期以甘蓝和油菜最短,分别为10d和10.5d。产卵量以青花的处理为少,为214.6粒,甘蓝最多,达364.4粒。而成虫寿命、产卵前期、卵孵化率差异都不显著。大灰食蚜蝇幼虫可以取食死亡的甘蓝蚜。对高温致死的取食量是8.3~10.5头,低温致死的是8.3~12.7头,机械致死的为19.7~22.7头。带蚜植物与涂抹蚜虫体液植物均能使其产卵,而无蚜植物则不会产卵。     

镉·汞胁迫对豌豆种子的毒害效应

[目的]缓解重金属离子对豌豆种子的毒害作用。[方法]采用水培方法,研究镉、汞单一胁迫及复合胁迫对豌豆种子萌发、幼苗叶绿素含量及过氧化物酶活性的影响。[结果]镉、汞单一胁迫及复合胁迫对豌豆种子萌发均有抑制作用,单一汞胁迫对豌豆幼苗的毒害作用最大,镉、汞复合胁迫次之,单一镉胁迫最小。幼苗叶绿素含量最高的是单一镉胁迫,其次是镉、汞复合胁迫,单一汞胁迫的叶绿素含量最低。单一汞胁迫的灰度值是单一镉胁迫的67.00%,镉、汞复合胁迫的灰度值是单一镉胁迫的91.32%;单一汞胁迫的酶带迁移率最大,镉、汞复合胁迫次之。[结论]汞胁迫对豌豆种子的毒害作用大于镉胁迫,镉、汞复合胁迫的毒害作用介于两者之间。     

改善秋茶茅山长青品质的加工工艺研究

[目的]找出一种既能提升秋季茅山长青茶各项品质指标,又适合规模化生产的工艺流程。[方法]采用不同加工工艺处理茅山长青茶原料,并对不同处理茶样进行品质评审和生化成分检测。[结果]在相同失水率下延长摊放时间有利于成品茶香气的形成;醇化处理成品茶的香气优于未经纯化处理的;蒸汽杀青成品茶的香气优于滚筒杀青和微波杀青的。鲜叶自然摊放的成品茶滋味优于通风摊放的,蒸汽杀青的优于其他方式杀青的,醇化处理的优于未经醇化处理的。蒸汽杀青加醇化处理的成品茶滋味最好。蒸汽杀青时保证茶汤色泽有一定的作用。醇化处理对样品茶的叶底色泽有一定的影响。[结论]利用工艺流程“自然摊放-蒸汽杀青-理条-整形-醇化-足火”制得的成品茶综合品质最优。     

单端孢酶烯3-O-乙酰转移酶编码基因Tri101的 原核表达及多克隆抗体制备

【目的】克隆Tri101并通过原核表达获得纯化蛋白,通过免疫SPF大白兔获得高效价、高灵敏度的多克隆抗体,为Tri101蛋白及转Tri101作物的检测提供抗体基础。【方法】以禾谷镰刀菌（Fusarium graminearium）F3210为材料,PCR法获得Tri101并连接至表达载体pET29a（+）,将重组表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3）后利用IPTG进行诱导表达。利用纯化表达产物制备多克隆抗体。【结果】SDS-PAGE分析结果表明,Tri101在大肠杆菌BL21（DE3）中得到表达,重组蛋白大小为50 kD左右,以包涵体形式存在。利用HisTrap亲和柱纯化重组蛋白,最佳咪唑洗脱浓度为200 mmol•L-1。采用烟草蚀纹病毒蛋白酶切除重组蛋白中的His标签,酶切产物经HisTrap亲和柱再次纯化后免疫SPF大白兔,制备多克隆抗体。经ELISA法检测抗体效价为1﹕12 000,检测灵敏度为0.05×10-6 µg•mL-1。Western blotting结果证明制备的多克隆抗体对Tri101具有较好的专一性。【结论】通过Tri101的克隆及原核表达,获得了纯化的融合蛋白,通过免疫动物制备了兔源多克隆抗体,可用于Tri101蛋白及转Tri101小麦的检测。     

高效液相色谱法检测饮料中阿斯巴甜的含量的不确定度评估(摘要)(英文)

[目的]评估高效液相色谱法检测饮料中阿斯巴甜含量的不确定度。[方法]用高效液相色谱法测定饮料中阿斯巴甜的含量,对整个测量过程的不确定度来源进行分析,并对不确定度各分量进行了评估和合成。[结果]用GB/T22254-2008《食品中阿斯巴甜的测定》方法重复6次测定饮料中阿斯巴甜平均含量为(0.806±0.038)g/kg,k=2。影响过程不确定度的主要来源为样品称量过程、样品定容体积所引入标准溶液的配制过程、拟合标准曲线所引入的不确定度。①标准工作液的不确定度。标准工作液的合成不确定度为0.013 9,包括标准样品纯度引入的不确定度0.005 8、标准物质称量引入的标准不确定度1.49×10-4、阿斯巴甜标准储备液配制过程中玻璃器具校准产生的相对不确定度0.007 88、标准工作溶液配制过程中玻璃器具校准产生的不确定度0.009 9。②样品试样制备过程引入的不确定度。包括样品称量过程的相对标准不确定度0.009和样品定容过程引入的不确定度0.000 78。③标准曲线拟合过程不确定度。曲线拟合的相对不确定度为0.002 46。阿斯巴甜测定结果的不确定度为0.017 0,合成总的相对标准不确定度为0.023 9,扩展标准不确定度为0.019。[结论]标准溶液、标准曲线和重复性的不确定度分量是不确定度的主要来源,待测样品的称量和定容的不确定度分量占的比例不大。     

液相色谱法测定土壤中单甲脒农药残留

用液-液萃取净化法和衍生化反相高效色谱检测法对绿色新农药单甲脒在土壤中的残留进行了分析。样品经甲醇提取,氢氧化钠衍生化,乙酸乙酯萃取,弗罗里硅土和活性炭净化后,用高效液相色谱（DAD检测器）测定,紫外波长为238 nm,平均回收率为81.85%~90.16%,变异系数为1.37%~9.32%,单甲脒的最低检出限为0.05 mg/kg。     

纳米增效肥料对冬小麦产量及品质影响的研究

[目的]探索纳米增效肥料对冬小麦的应用效果。[方法]通过不同地域的田间试验,研究纳米增效肥料对冬小麦产量及品质的影响。[结果]施用纳米增效肥料,小麦的增产幅度在12.34%~19.76%。纳米增效肥料使小麦蛋白质含量减少7.52%,脂肪含量增加33%。高量尿素肥料比低量型纳米增效肥料增产2.31%,但低量型纳米增效肥料比高量尿素肥料节省肥料用量为150 kg/hm2,有明显省肥效果;中量型纳米增效肥料为秋季一次性施肥,比高量尿素肥料节省春季两次追肥工序,增产17.0%,还有省工效果。[结论]该研究为纳米材料在肥料应用方面的机理研究奠定了基础。     

不同提取工艺制备的海藻肥中甜菜碱含量的比较

[目的]测定不同提取工艺制备的海藻肥中甜菜碱含量。[方法]设计试验比较重量法和非水滴定法的准确度,并采用重量法测定了不同工艺制备的海藻肥中甜菜碱的含量。[结果]不同工艺制备的海藻肥中甜菜碱含量最高为18.76 mg/m L,碱提取工艺制备的海藻肥中甜菜碱含量最低为10.60 mg/m L。[结论]生物方法提取的海藻肥中甜菜碱活性成分损失少,而化学方法提取的海藻肥中甜菜碱活性成分损失大。     

小鼠FGF9在大肠杆菌中的表达与纯化

为了建立小鼠FGF9的原核表达体系,获得纯化的FGF9重组蛋白,采用PCR技术扩增FGF9,并将其克隆入原核表达载体pET30a(+)中,经测序验证后将该重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,采用亲和层析技术进行目的蛋白的纯化,并用Western blotting进行了免疫原性验证.测序结果显示插入到载体中的片段与FGF9的天然序列一致,在BL21(DE3)中表达出了可溶性的FGF9重组蛋白,其表达量达到总蛋白的40 %;用镍螯合亲和层析方法获得了纯度大于95 %的FGF9重组蛋白.     

节杆菌Arthrobacter sp.XW-02酶解产物壳寡糖性质的研究

[目的]研究节杆菌Arthrobacter sp.XW-02发酵酶解产物壳寡糖的生理活性。[方法]采用端基法测定壳寡糖的平均聚合度和分子量,采用分光光度法测定壳寡糖的抑菌活性,采用种子水培法测定壳寡糖的促水稻生长情况。[结果]酶解10、20、30min壳寡糖平均聚合度分别为5.40、2.66和1.70,平均分子量分别为870.16、446.25和292.04;壳寡糖对多种细菌和酵母类真菌有明显的抑制作用,但对水稻纹枯病菌的抑制作用不明显,抑菌效果随着壳寡糖作用浓度的增加而增强;低浓度的酶解产物对水稻幼苗的生长有促进作用,高浓度的酶解产物对水稻幼苗生长有抑制作用,酶解产物浓度和水稻幼苗根的生长相关性不明显。[结论]节杆菌Arthrobacter sp.XW-02发酵酶解产物壳寡糖可以进一步开发为植物生长促进剂和病害生物防治剂。