microRNA靶基因检测技术研究进展

microRNA是真核生物基因表达调控的重要因子,对其靶基因的验证是研究microRNA功能必不可少的环节。验证microRNA与其靶基因的相互作用,可以根据能否进行靶基因切割、能否造成目标靶基因RNA表达量或蛋白表达量降低以及能否形成RISC-mRNA复合体等特征进行检测。基于此,从以上三方面对验证microRNA靶基因的技术进行了综述。     

血清microRNA在癌症诊断中的进展

microRNA是长约19到25单位的内生性的微小RNA,它通过与靶信使RNA的3’UTR的特异性结合从而调节靶基因的表达。大量的试验证明了其在肿瘤的发生发展中microRNA发挥了重大的作用。近年来,在血清中发现了稳定存在的microRNA,而对microRNA的研究主要聚焦在血清microRNA与疾病的关系上。通过对患者和正常血清microRNA的检测和对比后,发现了一批可以用于肿瘤临床检测的microRNA。作为新的检测生物标志物,血清microRNA具有方便、快捷以及较高的准确性等优点,甚至可以区分在临床很难诊断的早期肿瘤,诸如非小细胞肺癌、胃癌以及胰腺癌。     

牛基因组per microRNA SNP多态性

研究牛microRNA的进化模式和现状,阐明microRNA的功能性SNP的作用和对动物表型的影响。选取牛per-microRNA及其相邻区域,统计各区域SNP数量和密度,考察SNP对microRNA二级结构稳定性和靶基因选择的影响。结果显示,per-microRNA的SNP密度显著低于其侧翼区,Seed区的SNP的密度较高,Seed区的SNP变异对per-microRNA二级结构稳定性的影响最高,microRNA成熟体SNP可能影响mi-croRNA对靶基因的选择。上述结果表明,牛在进化过程中可能存在加速进化的现象,目前牛microRNA的进化正处于活跃期。microRNA上的功能性SNP位点对microRNA的靶基因选择和结构稳定性有很大影响,并最终通过microRNA来影响动物表型的改变。     

葡萄microRNA156b和microRNA172c及其靶基因在冬芽二次成花过程中的表达特性研究

利用半定量RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测‘藤稔’葡萄microRNA156b(Vv-miR156b)和microRNA172c(Vv-miR172c)及其靶基因(Vv-SPL9和Vv-AP2)在摘心处理(5月14日、5月20日、5月28日)后不同发育时期冬芽中的表达情况,并利用RLM-5’-RACE验证了miRNAs作用其靶基因的方式。结果表明:仅5月28日摘心处理的冬芽能够进行花芽分化并形成花序,而其他处理及对照未能花芽分化。2种RT-PCR检测结果基本一致,5月28日摘心处理的2条miRNAs表达水平明显下降,且花序中有最低表达。相应的靶基因在冬芽二次成花过程中的表达水平呈现出与其miRNAs相反的变化趋势。RLM-5’-RACE结果显示,2条miRNAs介导靶基因裂解,裂解位点均在miRNAs 5’端的第10和11位碱基之间。表明microRNA156b和microRNA172c通过介导相应靶基因的裂解调控其靶基因的表达,从而影响葡萄冬芽的二次成花。     

家兔中microRNA的研究进展

microRNA(miRNA)是一类内源性非编码单链RNA分子,通过与靶基因mRNA配对以指导其功能表达,在动物中扮演着重要的基因调节作用。研究表明,miRNA广泛参与调节动物的生长发育、生殖调控、新陈代谢和疾病发生等生命过程。本文综述了miRNA在家兔中的研究,例如促进肌肉细胞增殖分化、调节脂肪代谢和影响疾病发生等,探讨miRNA在家兔中的研究现状和发展方向,旨在为家兔遗传育种与繁殖提供理论依据。     

MicroRNA参与植物发育调控的研究进展

MicroRNA是1类约22nt的小分子RNA，可通过与靶基因转录的mRNA互补配对来调节靶基因的表达，这些靶基因大多为参与动植物发育的转录因子。在植物中已发现microRNA参与了分生组织特征维持、叶极性建立和形态发育、花器官特征决定等多种发育过程。     

调控动物表型microRNA在分子育种中新的重要标记

microRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为21~22个核苷酸的非编码单链RNA分子,以基因沉默的方式来调控靶基因的表达。随着大规模转录组学研究的进行和深入,发现了大量与动物表型相关的microRNA。简要介绍了microRNA的基本特征,概述了近年来在动物性状决定及表型关联性分析方面的研究进展。越来越多的miRNA与多种动物的重要表型相关联,将为动物表型调控的研究提供一个新的思路。     

绒山羊胚胎期次级毛囊发生发育相关miRNA的筛选及靶基因验证

为筛选绒山羊次级毛囊发生发育相关microRNA(miRNA)及靶基因验证，本研究基于课题组前期高通量测序技术得到绒山羊胎儿期(45、55、65、75、95、115和135 d)皮肤组织miRNA表达谱的基础上，鉴定各比对组中差异表达的miRNA并根据毛囊形态发生规律筛选次级毛囊发生发育相关的miRNA，运用RNAhybrid、miRanda和TargetScan软件预测筛选到的miRNA靶基因并与次级毛囊发育相关基因取交集，所得基因进行GO和KEGG富集分析，筛选毛囊发生发育重要通路中的关键基因构建miRNA-mRNA调控网络，进而运用双荧光素酶报告验证关键miRNA-mRNA的靶向关系。结果表明:1)筛选到次级毛囊发生发育相关miRNA 153个，共预测到32 978个靶基因；2)取交集后得到1 352个靶向的次级毛囊发生发育相关的基因，且显著富集在29条KEGG通路中，其中毛囊发生发育重要通路TGF-β同样显著富集；3)构建了chi-miR-26b-5p-SMAD1和 chi-miR-495-3p-SMAD1等232对次级毛囊发生发育可能相关的miRNA-mRNA关系对，双荧光素酶报告系统进一步验证了关键靶向关系。本研究为解析miRNA在绒山羊次级毛囊发育过程中的分子机制奠定了前期基础。     

动物病毒microRNA的研究进展

MicroRNAs(miRNAs)是一种含有约22～25个核苷酸的非编码单链RNA分子,广泛存在于人类及其他各种生物中。它通过与靶mRNA特异性的碱基互补配对,引起靶mRNA降解或者抑制其翻译,从而调节基因的转录后表达水平。病毒microRNA是新发现的一类miRNA,综述了近年来病毒microRNA的产生、作用机制、生物学功能及其在动物上的研究进展。     

降解组测序与剪切位点分析研究进展

动植物细胞内都存在大量的microRNA(miRNA),miRNA的功能之一是通过互补指导内切酶切割与之互补的mRNA,对该mRNA进行转录后调控。但miRNA与靶基因之间并不是完全互补,所以通过序列计算方式预测的靶基因中假阳性也是很高的。单独验证预测的靶基因不能确定是否正确且费时费力,高通量测序与计算预测结合可以很好地验证和发现miRNA的靶基因。介绍了寻找miRNA靶基因的降解组测序方法,包括降解组测序的方法原理、试验流程、miRNA靶基因寻找等主要环节。经研究发现,降解组测序已经成为寻找miRNA靶基因的常用方法。     

活动平板试验配合心脏放射性核素检查诊断冠心病的价值（附53例报告）

对临床拟诊为冠心病５３例作活动平板试验并配合心核素检查的结果显示：双阳性２６例（４９．１％），平板试验阳性／心核素检查阴性４例（７．５％）；平板试验阴性／心核素检查阳性１４例（２６．４％）；双阴性９例（１７％）。表明双阳性可肯定冠心病的诊断，双阴性可否定诊断。平板试验阴性／心核素检查阳性，应结合临床做出诊断，平板试验阳性／心核素检查阴性为冠心病的危险因素，宜长期随诊。     

西门塔尔牛肌内和皮下脂肪miRNA表达谱及miR-27b靶基因分析

【目的】通过分析西门塔尔牛肌内脂肪和皮下脂肪差异表达miRNA,及对重要的候选miRNA-27b进行靶基因预测及相关生物信息学分析,探索miRNA在动物肌内脂肪生长、发育过程中的作用及其调控机制。【方法】利用miRNA微阵列芯片技术对肌内脂肪和皮下脂肪miRNA表达谱进行检测和分析以筛选差异表达miRNA;qRT-PCR方法验证4个在肌内脂肪显著高表达的候选miRNAs;采用Targetscan生物信息学计算方法预测目标miR-27b（对肌内脂肪沉积可能起重要调节作用）的靶基因,并对靶基因进行GO注释描述、富集分析及KEGG富集。【结果】miRNA芯片分析发现肌内脂肪和皮下脂肪共有88个差异表达极显著miRNA（P＜0.01）。候选的4个在肌内脂肪高表达miRNAs（miR-140、miR-145、miR-143、miR-27b）的qRT-PCR检测结果与芯片分析结果具有很好的一致性。KEGG富集显示,目标miR-27b的预测靶基因在MAPK、Wnt、Hedgehog、TGF-beta、GnRH等信号通路中显著富集,其中在MAPK信号通路中富集度最高。【结论】牛肌内脂肪和皮下脂肪组织中确实存在一些差异表达的miRNAs,某些重要的在差异高表达miRNA（如miR-27b）可能以独特的通路（如MAPK信号）来调节牛肌内脂肪的形成过程。     

冠状动脉钙化63例CT诊断分析

目的：观察冠状动脉钙化（ＣＡＣ）的ＣＴ表现及临床意义。方法：对２０８例胸部ＣＴ图像及临床资料作分析。结果：２０８例胸部ＣＴ图像中发现ＣＡＣ６３例（３０．３％）。４０岁以上者，ＣＡＣ检出率随年龄的增加而增加，不同年龄组ＣＡＣ率差异有显著性（Ｐ〈０．０１）。５６例诊断冠心病者，４１例有ＣＡＣ（７３．２％）；１０２例无冠心病者，２２例有ＣＡＣ（２１．６％）（Ｐ〈０．０１）。结论：ＣＴ能及早发现ＣＡＣ，这     

多层螺旋CT冠状动脉造影技术及其临床应用

目的：探讨多层螺旋CT(MSCT)冠状动脉成像技术及其临床应用价值。方法：分析18例(其中3例为冠状动脉血管成形术并置入支架者；2例为冠状动脉搭桥术后；其余为冠心病可疑者)的MSCT冠状动脉造影(MSCTCA)和CT冠状动脉成像结果。并将3例CT检查结果与导管法冠状动脉造影结果进行比较。结果：18例MSCTCA左冠状动脉主干显示清晰，左前降支、左回旋支及右冠状动脉显示较清晰，满足影像诊断的需要，但右冠状动脉和左前降支、左回旋支的远段及其小分支有运动伪影的干扰。3例CT检查结果与导管法冠状动脉造影结果相同。结论：MSCT冠状动脉成像能较好地显示冠状动脉及其主要分支．MSCT是诊断和随访冠状动脉疾病很有意义和潜力的非创伤性检查方法。     

鸡miR-18la靶基因的生物信息学分析

对鸡miR-18la的靶基因进行了预测及相关生物信息学分析,为深入研究miR-18la生物学功能提供理论指导.利用TargetScan 5.1与PicTar 2种计算方法对miR-18la进行靶基因预测,交集的基因集合分别进行GO富集分析和KEGG分析.结果预测到交集靶基因有137个下游靶基因,GO富集分析结果表明,1...