分段盐析联合两步柱层析纯化巢湖蓝藻藻蓝蛋白

以巢湖打捞的新鲜蓝藻藻泥为处理对象,利用冻融破壁的方式获得藻蓝蛋白(phycocyanin,PC)粗提液。采取两步盐析初步纯化粗提液获得PC,再用纤维素(Cellufine A-500)阴离子交换树脂中度纯化PC,最后用羟基磷灰石(HA)柱高度纯化PC。结果表明,在室温25℃下,两步盐析(NH_4)_2SO_4的最佳摩尔浓度分别为1.0mol·L~(-1)和1.8 mol·L~(-1),PC纯度(A_(620)/A_(280))达到2.168,PC回收率可达37.5%。再经Cellufine A-500和HA两步柱层析纯化,PC纯度(A_(620)/A_(280))分别达到3.211和4.133,回收率分别为20.3%和7.2%,纯度达到试剂级纯度要求。     

粉末活性炭联合柱层析法纯化藻蓝蛋白的研究

以巢湖新鲜蓝藻藻泥为原料，通过冻融破壁的方法获得藻蓝蛋白粗提液，采用粉末活性炭法-羟基磷灰石柱层析法纯化藻蓝蛋白。在粉状活性炭法的研究中，通过单因素试验研究了粒径、添加量、藻蓝蛋白浓度和时间对藻蓝蛋白的提纯效果，并与羟基磷灰石柱层析法联用以优化高纯度藻蓝蛋白的提取纯化工艺组合。结果表明，粉末活性炭法纯化藻蓝蛋白的最优条件是粒径400~500目，藻蓝蛋白浓度1.0 mg·mL^-1，添加量100 g·L^-1和吸附时间15 min，经羟基磷灰石柱层析法纯化后，藻蓝蛋白纯度可达4.51，回收率为36%。     

太湖蓝藻藻蓝蛋白的提取及纯化

为利用太湖打捞蓝藻的蛋白质资源,采用冻融破壁、絮凝、盐析、透析、双水相萃取等方法制备荧光试剂级藻蓝蛋白。研究结果表明,以水为介质冻融2次破壁,将冻融藻浆中蓝藻干物质调节为0.95%,用浓度为7.5g/L的聚合氯化铝絮凝初分离,所得藻蓝蛋白纯度(A6 20/A280)为0.31;采用20%、50%饱和度的硫酸铵两步盐析可将其纯度(A620/A280)提高至2.29;盐析后藻蓝蛋白经100 000的透析袋透析,再以140 g/L的聚乙二醇(分子量2 000)和140 g/L的磷酸钾盐萃取纯化,最终纯度(A620/A280)高达4.60,达到荧光试剂级要求。     

不同试验条件对藻蓝蛋白提取效率的影响

以实验室培养的水华蓝藻单种[铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa,M.A)、水华微囊藻(Microcystis flos-aquae,M.F)、惠氏微囊藻(Microcystis wesenbergii,M.W)、鱼腥藻(Anabaena sp,A.s)]以及野外新鲜水华蓝藻为研究对象,通过设置不同细胞破碎方法和提取剂种类,筛选并优化藻蓝蛋白荧光分析法的前处理技术。结果表明,冻融试验中,冷冻温度与提取剂添加顺序对蓝藻细胞破碎率无显著影响;以去离子水为提取剂时,冻融2次即可达到最佳破壁条件;在冻干试验中,蓝藻真空抽滤在滤膜上能提高蓝藻细胞的破碎率;综合比较冻融和冻干,后者对蓝藻细胞的破碎效率高于前者;对比3种提取剂对藻蓝蛋白的提取效率,去离子水对藻蓝蛋白的提取效率最高。     

坛紫菜藻红蛋白粗提技术的研究

[目的]快速、有效、大批量地提取藻红蛋白。[方法]以坛紫菜为原料,采用溶胀法、化学试剂法和搅切法3种粗提技术,以藻红蛋白的提取得率、纯度和提取时间为参数对3种方法进行比较。[结果]溶胀法采用0.01mol/LTris-HCl（pH8.0）浸提9h,藻红蛋白得率为9.71mg/g,纯度（A565/A280）为0.45;化学试剂法在0.100mol/LSDS溶液作用4h时,藻红蛋白得率为24.35mg/g,纯度（A565/A280）为0.22左右;搅切法采用搅切速度18000r/min作用6min,藻红蛋白得率达到23.11mg/g,纯度（A565/A280）为0.30。[结论]综合比较,搅切法提取藻红蛋白效率高,藻红蛋白得率和纯度较好,处理量较大,是一种十分有效的粗提方法。     

普通念珠藻(Nostoc commune Vauch.)藻蓝蛋白的提取

[目的]为普通念珠藻藻蓝蛋白的提取及开发提供试验及理论基础。[方法]以普通念珠藻为材料,比较藻体及细胞的破碎方法、提取液类型及饱和硫酸铵浓度对藻蓝蛋白提取的影响。[结果]结果表明:利用发酵法破碎藻体和细胞,0.05 mol/L的KP缓冲液(pH值7.2)作为提取液,经过30%~50%饱和硫酸铵盐析和DEAE-Toyopeal 650 S离子交换柱层析后,藻蓝蛋白纯度达2.51,最大紫外-可见吸收峰位于616 nm。[结论]普通念珠藻藻蓝蛋白分离提取较为理想的程序为:藻粉→0.05 mol/L KP缓冲液(pH值7.2)浸泡→发酵法破碎细胞→35%~50%饱和硫酸铵盐析→DEAE-Toyopeal 650 S柱层析→较纯的藻蓝蛋白。     

鱼腥藻藻蓝蛋白的提取·分离纯化和抑菌研究

[目的]对鱼腥藻藻蓝蛋白的提取进行优化,并对藻蓝蛋白粗品进行分离纯化、凝胶电泳以及抑菌作用研究。[方法]采用反复冻融法提取藻蓝蛋白,液相色谱分离纯化藻蓝蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白质成分,并利用96孔板法培养、酶标仪浓度检测,进行抑菌作用研究。[结果]藻蓝蛋白提取的最佳条件为固液比1∶1 g/ml,冷冻时间60 min,硫酸铵饱和度为60%。藻蓝蛋白的最大吸收光是620nm。高效液相色谱分离得到3种蛋白质,标记为PC-1、PC-2、PC-3。SDS-PAGE电泳可知,PC-1和PC-2的分子量在14～18 kD。PC-2对苏云金芽孢杆菌和藤黄叠球菌有较弱的抑菌作用。[结论]为鱼腥藻藻蓝蛋白的提取、纯化和性质研究提供了试验依据。     

湿藻藻泥乙醇脱水干燥法的研究

[目的]为有效降低小球藻油脂提取过程中湿藻体脱水干燥成本。[方法]以BG11培养液培养的小球藻进行离心预处理后加入不同浓度和比例的乙醇、经不同的脱水次数,探究在不同条件下湿藻泥的脱水效果,并以湿藻泥脱水干燥后制备的藻粉为材料,比较了小球藻藻粉在不同含水率条件下的油脂提取率。[结果]加入的乙醇浓度为80%,乙醇溶液与藻泥中原含水量的体积比为1∶1,经一次挥发脱水后,湿藻泥中的含水率可从89.04%降至30.1%。[结论]藻粉含水率在40%以下时,对粗油脂得率影响较小,即湿藻用乙醇进行协助脱水时,藻泥含水量降至40%以下即可进行油脂提取。     

超声波-反复冻融协同法优化黑木耳菌丝体破壁条件

[目的]研究超声波-反复冻融协同作用对黑木耳菌丝体破壁的影响,并确定最佳破壁组合条件。[方法]利用单因素试验,研究了超声波处理过程中破壁时间、加水量、破壁次数、冷冻时间、冻融次数对多糖得率的影响,并利用正交试验设计确定最佳条件组合。[结果]单因素试验结果表明,破壁时间以20 min为宜,选择15倍为最适加水量,选择2次超声波破壁次数较宜,冷冻时间以30 min为宜,选择3次冻融次数较为合适。正交试验结果表明,各因素的影响效果依次为破壁时间、破壁次数和冻结时间,最佳组合条件为冷冻时间30 min,破壁时间25 min,破壁2次,此时多糖得率可达到57.76 mg/g。[结论]该研究可为指导实际生产提供依据和参考。     

超声波-反复冻融协同法优化黑木耳菌丝体破壁条件（英文）

[目的]研究超声波-反复冻融协同作用对黑木耳菌丝体破壁的影响,并确定最佳破壁组合条件。[方法]利用单因素试验,研究了超声波处理过程中破壁时间、加水量、破壁次数、冷冻时间、冻融次数对多糖得率的影响,并利用正交试验设计确定最佳条件组合。[结果]单因素试验结果表明,破壁时间以20 min为宜,选择15倍为最适加水量,选择2次超声波破壁次数较宜,冷冻时间以30 min为宜,选择3次冻融次数较为合适。正交试验结果表明,各因素的影响效果依次为破壁时间、破壁次数和冻结时间,最佳组合条件为冷冻时间30 min,破壁时间25 min,破壁2次,此时多糖得率可达到57.76 mg/g。[结论]该研究可为指导实际生产提供依据和参考。     

不同方法提取海洋硅藻粗多糖的比较

采用不同提取方法(水提法、酸提法、碱提法、超声辅助法、冻融辅助法等)从室外培养的海洋硅藻生物质中提取粗多糖。通过比较不同方法下的粗多糖提取率、多糖总糖、蛋白质及硫酸基含量筛选较优的方法。试验结果显示,水提法的粗多糖提取率最低,浓碱法粗多糖提取率最高。物理法(超声、冻融结合高温法)提取的粗多糖中总糖含量总体比化学试剂法(酸碱法)高,以冻融+90 ℃最高,稀酸法最低;硫酸基含量则以稀酸法最高,浓碱法最低。综合单位质量海洋硅藻生物质粗多糖提取率与单位质量粗多糖组成的结果可知,单位质量硅藻生物质提取的总糖量大小为:浓碱+冻融法>浓碱+冻融+90 ℃法>浓碱法>稀酸法>超声+冻融+90 ℃>稀碱法>超声+冻融>冻融+90 ℃;硫酸基质量以浓碱+冻融法最高,稀碱法最低。这些结果表明,利用浓碱+冻融法可从海洋硅藻中提取出较多多糖并使硫酸基处于较高水平,利于硅藻多糖后续的纯化与利用。进一步利用浓碱+冻融法提取4种海洋硅藻(角毛藻、菱形藻、茧形藻、海链藻)粗多糖,结果表明,单位质量生物质提取的粗多糖总糖含量以茧形藻最高(约24%),海链藻最低(约5%);硫酸基含量则以角毛藻最高(5.05%),茧形藻最低(0.51%)。     

真空冷冻干燥芒果片的工艺研究

[目的]优化芒果片冷冻干燥的工艺条件。[方法]差示扫描量热法测量芒果共晶点和共熔点,设计4因素3水平正交试验,按国标法测量的Vc含量为指标,并进行感官分析。[结果]芒果片的共晶点为-16.59℃,共融点为-4.61℃。正交试验得到芒果片冻干的最佳工艺条件是切片厚度3mm,预冻时间3h,一次干燥温度-5℃,二次干燥温度30℃。在此最佳冻干工艺条件下,芒果片的Vc含量达到618.299mg/kg,明显高于热风干燥。冻干芒果片基本能保持原有的色泽、香味和形态。组织呈多孔海绵状,复水性能好。[结论]芒果冻干工艺流程合理有效,最佳工艺条件下的冻干芒果片Vc含量高,感官评价优良。该工艺条件有较高的工业生产应用价值。     

螺旋藻藻蓝蛋白在水和磷酸缓冲液中稳定性的对比研究

[目的]为了寻找一种代替磷酸缓冲液的提取溶液,满足尽量保持其活性的要求。[方法]分别用蒸馏水和磷酸缓冲液,采用研磨法提取藻蓝蛋白并保存。[结果]两者提取效果差别不大。但是,水保存的藻蓝蛋白溶液比磷酸缓冲液保存的藻蓝蛋白溶液易分解。[结论]综合试验条件及藻蓝蛋白稳定性影响因素考虑,可确定pH变化为藻蓝蛋白分解的主要原因;蒸馏水可代替磷酸缓冲液用于提取藻蓝蛋白,活性维持时间不超过15d。     

冬季积雪与冻融对土壤团聚体稳定性的影响

以长白山地区3种不同林型土壤为研究对象,利用野外采样观测与室内模拟培养相结合的方式,研究积雪与冻融过程对土壤团聚体稳定性的影响。结果表明:1)冬季冻融过程使白桦成熟林土壤团聚体稳定性(MWD)出现显著下降(P<, 0.01),但并未显著影响白桦幼龄林和阔叶红松成熟林。冬季冻结及春季冻融过程都能显著影响团聚体MWD值(P<, 0.01), 2)提前雪盖能够防止土壤秋冬季冻融及冬季土壤结冻,并能够显著增加团聚体MWD值,但并不能防止春季融雪冻融阶段团聚体MWD值下降。3)土壤团聚体在冻融过程中受到不同冻融次数、不同林型以及不同含水率影响,差异显著。本文的研究结果表明,气候变暖、冬季降水格局变化这些全球变化因素能够影响到雪盖、土壤温度、湿度等因素,从而影响土壤团聚体稳定性。      

季节性冻融期土壤剖面含水率变化特征研究

在干旱、半干旱气候区,采用野外田间试验和室内分析相结合的方法,分析了季节性冻融期土壤剖面含水率的变化特征,试验共设裸地(LD)、覆膜地(MD)和茬覆膜地(CMD)3种处理地块。结果表明,季节性冻融期土壤剖面含水率发生了明显的变化,在土壤剖面的不同深度出现了范围不等的含水率高值区和低值区,各处理地块含水率高值区变化的层位、形成时间以及含水率达到相对稳定的深度均不同,其中CMD的聚墒区最大,含水率最高达22%;LD的聚墒区最小,含水率最高达21%,土壤剖面含水率由上到下为增大-减小-保持稳定的动态变化特点。研究结果对干旱和半干旱地区季节性冻融土壤储水保墒及高效利用土壤水资源、确定冬春灌溉合理灌水技术参数提供了参考。     

洋葱黄酮类物质不同提取工艺的比较研究

[目的]比较不同提取方法对洋葱中黄酮类物质的提取效果。[方法]采取热水浸提法、微波辅助冻融法、超声波法及乙醇溶液浸提法从新鲜洋葱和洋葱皮干粉中提取黄酮,用紫外分光光度法测定总黄酮含量。[结果]试验确定槲皮素为标准品,检测波长为258nm,利用紫外分光光度法测定洋葱中总黄酮含量是准确、可行的,平均回收率达99.54%,RSD为1.2%。不管是新鲜洋葱还是洋葱皮干粉,热水浸提法所得的总黄酮最多,洋葱皮中含量为3.965%(干计),肉质部分含量为0.376%(干计)。洋葱皮中黄酮含量明显高于肉质鳞茎,洋葱皮中的总黄酮含量是新鲜肉质洋葱中的10倍。[结论]热水浸提法是提取洋葱黄酮类物质较为合适的方法。