超声波联合乳酸对金黄色葡萄球菌的杀菌效果

研究超声波(US,400 W,50 kHz)、乳酸(LA,质量分数为0.5%, 1.0%)和超声波联合乳酸处理(US+0.5%LA,US+1.0%LA)对游离和生物膜状态下的金黄色葡萄球菌的抗菌和抗生物膜机制,并且选用US+0.5%LA对羊肉上的金黄色葡萄球菌进行杀菌处理。结果显示,超声波联合乳酸处理对金黄色葡萄球菌的杀菌作用明显,显著降低了生物膜胞外多糖的含量,破坏了生物膜的胞外基质(P<0.05);通过扫描电子显微镜观察发现,超声波联合乳酸处理使得菌体细胞产生了严重的凹陷;激光共聚焦电镜和核酸泄露试验结果表明,超声波联合乳酸处理对菌体的细胞膜造成了严重破坏,使其通透性显著增加,进而造成内部核酸大量泄露;US+0.5%LA处理可以显著地控制羊肉上金黄色葡萄球菌的生长。因此,超声波联合乳酸处理通过影响菌体细胞膜的完整性、改变细胞膜的通透性,使生物膜胞外多糖含量降低及内部核酸泄露,进而发挥杀菌作用。     

聚合酶链式反应(PCR)技术检测牛奶中金黄色葡萄球菌

根据金黄色葡萄球菌特异性STAA-Aul基因序列,设计、合成了一对引物,运用聚合酶链式反应(PCR)技术从10头患有奶牛乳房炎的奶牛奶样中扩增得到8个大小为420 bp的DNA产物;阴性样品中未扩增到产物。测定了其中2个DNA片段的核酸序列,确定为金黄色葡萄球菌的STAA-Aul基因。     

食品中金黄色葡萄球菌的快速检测

本文介绍一种检测食品中金黄色葡萄球菌的快速方法,甲胶乳颗粒与人血浆制成试剂(PS胶乳),分别与BP和MSEY培养基中分离培养的菌落作平板凝集反应。在BP培养基中的金黄色葡萄球菌,98.1％为PS胶乳凝集阳性;在MSEY培养基中95.9％为PS胶乳凝集阳性。用BP培养基和PS胶乳组合,其检出率和特异性均高于其他组合,并可在数分钟内直接检出平板上的金黄色葡萄球菌,且与凝固酶试验具有很高的一致性。     

紫菜中金黄色葡萄球菌的检测

笔者在对紫菜中致病菌污染现状分析的基础上,对金黄色葡萄球菌的检测方法进行了比较,结果表明快速检测因其方便省时可靠性高而值得推广应用。     

PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌

【目的】利用PCR技术,无需增菌，直接检测乳品中的金黄色葡萄球菌。【方法】通过溶剂提取的方法从人工样品中提取模板，以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因（nuc）为靶基因，经过PCR扩增得到279 bp的产物。经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物。采用PCR方法实际检测了乳品中的金黄色葡萄球菌，同时，与国标GB 4789.10-94方法及两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌测试片Petrifilm RSA.Count Plate 及Baird-parker+RPF Agar进行了比较。【结果】PCR方法的灵敏度高，全脂乳和脱脂乳检测的检出限为10 CFU/ml，奶酪检测的检出限为55 CFU/g，可在6 h内完成对乳品中金黄色葡萄球菌的检测，比目前普遍采用的先增菌再进行PCR检测的方法缩短了12～24 h。与国标方法相比，PCR方法的符合率为94.3％，敏感性为100％。【结论】采用溶剂提取制备模板的方法可有效的用于PCR直接检测(无需增菌)乳及乳制品中的金黄色葡萄球菌。     

RT-PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素A基因

金黄色葡萄球菌是引起细菌性食物中毒的重要病源菌之一,尤其是肠毒素。国内外由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的食物中毒屡屡发生。目前,国内检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素仍采用传统的方法,其操作繁琐、检测时间较长,通常需要3~5 d才能完成,且灵敏度较低。本研究缩短食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测时间,针对PCR检测的灵敏性、特异性,建立了检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法,为检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素提供了技术支持。分别采用TRIZol法和热酚法提取金黄色葡萄球菌总RNA并进行比较研究,在此基础上反转录获得cDNA,用特异引物对sea基因进行扩增,并优化PCR反应条件,获得理想的sea基因阳性扩增条带。结果表明,热酚法在总RNA提取方面优于TRIZol法,改进PCR反应时间和循环次数,最终初步建立RT-PCR检测金黄色葡萄球菌A基因的方法。     

动物性食品污染金黄色葡萄球菌的检测

从市售的烧鸡中分离并纯化病原菌,经培养特性观察、血浆凝固酶试验和生化试验等确定该病原菌为金黄色葡萄球菌。药敏试验结果显示,该菌对环丙沙星、新生霉素和庆大霉素敏感;对青霉素G、头孢氨苄、磺胺嘧啶钠有耐药性。动物试验结果表明,该菌对小白鼠有致病力。     

牛源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测

【目的】了解内蒙古地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染的情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】采用K-B纸片扩散法,检测分离自内蒙古地区38株金黄色葡萄球菌对17种药物的敏感性,同时用琼脂稀释法检测苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）;再用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林盐琼脂筛选法和PCR方法扩增mecA耐药基因对分离菌株进行全面MRSA检测。【结果】分离菌株对每种抗生素都有不同程度抗性,对氨苄西林、头孢拉丁、青霉素、复方新诺明、新生霉素和链霉素的耐药率都高于45%,而对氧氟沙星、丁胺卡那霉素、万古霉素、环丙沙星、庆大霉素和头孢唑林的敏感性高于90%,2株细菌的万古霉素MIC≥16 μg•mL-1;其中8株细菌的苯唑西林MIC≥8 μg•mL-1,而其它菌株的苯唑西林MIC≤2 μg•mL-1;分离菌株多重耐药情况严重,耐受3种及3种以上药物的菌株占84.21%,其中4株细菌能同时耐受9种不同抗菌药物;16（42.11%）株细菌被检测携带mecA耐药基因,而仅有其中7株的苯唑西林MIC≥4 μg•mL-1;头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐琼脂筛选法分别检出7株、10株和7株表型为MRSA的菌株。【结论】分离菌株的耐药性和多重耐药现象较为严重,被调查地区奶牛场中已经存在MRSA和OS-MRSA感染情况,且感染率高。     

市售鲜牛奶中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

[目的]通过对石河子地区市售鲜牛奶中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性的分析,评估该区域鲜牛奶的安全性。[方法]采用稀释涂平板法分离金黄色葡萄球菌,结合接触酶、兔血浆凝固酶试验,nuc基因扩增,16S r RNA基因测序进行鉴定。同时,选用K-B纸片法测定分离菌株的耐药性。[结果]从10份样品中分离得到金黄色葡萄球菌16株。其中,47.8%的菌株表现为多重耐药,12株金黄色葡萄球菌对头孢他啶具有耐药性。[结论]样品中金黄色葡萄球菌多重耐药性严重,应该采取相应的措施加以监管。     

食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测

建立一种快速聚合酶链反应(PCR)方法,用于食品中金黄色葡萄球菌的检测.针对金黄色葡萄球菌独有的SEA基因设计1对引物,在PCR体系中对相应片断进行扩增,最后通过电泳技术与阳性对照进行对比来判断阴阳性.结果表明,该方法检出率高,样品中模板DNA含量仅有0.05 pg即可检出金黄色葡萄球菌,24 h即可报告结果.因此,PCR方法是一种高效、敏感、特异性高的检测技术,可用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测.     

速冻蔬菜中金黄色葡萄球菌检测方法研究进展

金黄色葡萄球菌是食品安全检测中非常重要的强制性检测指标,本文在对速冻蔬菜中金黄色葡萄球菌污染现状分析的基础上,对其多种检测方法的原理、特点和应用范围予以论述。     

食品中金黄色葡萄球菌的快速检测及其评估

[目的]分析食品样品中金黄色葡萄球菌的含量,评估金黄色葡萄球菌快检试剂盒的可操作性和准确性.[方法]分别购买市售苹果脆片和真空包装水果玉米,采用国标GB 4789.10-2006和快检试剂盒测定其金黄色葡萄球菌含量,并以金黄色葡萄球菌为目标菌,采用人工污染样品,根据《食品快速检测方法评价技术规范》评估其快检试剂盒的相关...     

食品中金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立

目的:建立快速检测食品中金黄色葡萄球菌的PCR方法。方法:优化金黄色葡萄球菌DNA提取方法并设计基因特异性引物,采用PCR方法扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶(nuc)编码基因,验证检测的特异性及灵敏度。结论:所检出的金黄色葡萄球菌在497bp处出现特异片段,该方法具有较高的敏感性和特异性,可作为食品中金黄色葡萄球菌快速检测的手段。     

金黄色葡萄球菌px-1 DNA芯片的制备及检测

提取金黄色葡萄球菌px—1总DNA经酶切后,与载体质粒Puc18链接,并转化E.coli DH5α,从而构成金黄色葡萄球菌px—1的基因文库。用PCR方法扩增基因文库,所得PER产物点于芯片上,从而制各px—1DNA芯片。分别提取不同盐浓度培养的px—1的总RNA,把不同盐浓度培养的px—1的总RNA反转录为DNA,用Cy3,CY5分别标记反转录的DNA。通过杂交检测芯片,并获得杂交图像。     

金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测

[目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺激动物产生抗体。以自制SEB为免疫抗原注射BALB/c小白鼠,其最高效价为1∶100 000。SEB浓度在1~1 000 ng/ml范围内,竞争抑制率与SEB浓度的对数值呈显著线性关系。当SEB的浓度为5~500 ng/ml时,随样品中SEB浓度的增加,污染样品的回收率变异系数减小,检测准确度提高。[结论]对不同污染程度的牛奶样品,利用间接竞争ELISA法检测其SEB残留的灵敏度远远高于生化法。     

沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的基因芯片检测技术研究

本研究建立了检测致病菌的基因芯片检测方法,通过16SrRNA基因序列设计了通用引物和特异性探针,并对下游引物进行荧光标记,通过PCR扩增、基因芯片杂交和信号扫读,实现在相同条件下能够同时检测并区分沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的目的。     

金黄色葡萄球菌TraP蛋白单克隆抗体制备

研究通过骨髓瘤细胞SP2／O与经金黄色葡萄球菌（S．aureus）Trap蛋白免疫的小鼠脾细胞融合,并进一步筛选种单克隆化,获得了11株稳定分泌抗TraP蛋白的单克隆抗体（McAb）杂交瘤细胞株,其中8株McAb（2A1、3A6、381、184、2C5、4C7、5C3和2D8）亚类为IgGl,3株McAb（2A7、3A1和1c4）亚类为IgM,轻链均为K链。8株IgGl型McAb的小鼠腹水的抗体效价均达到1：128000,交叉实验结果显示这8株McAb不与S．aureus的ClfA、ClfB、Cna、FnbPA和IsdB蛋白以及链球菌的GapC蛋白反应,具有良好的特异性,Western—blotting结果显示这8株McAb识别的都是TraP的线性表位。     

食品中金黄色葡萄球菌定量检测方法比较研究

[目的]探求一种适应食品微生物实验室检验要求的快速准确的方法.[方法]比较研究Baird-Parker平板法、MPN法、科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基法和PettifilmTM测试片法这4种定量方法对金黄色葡萄球菌的选择性、灵敏度和在食品中的应用.[结果]试验显示,4种方法检测金黄色葡萄球菌选择性良好;MPN法、显色培养基法和纸片法灵敏度比Baird-Parker平板法稍高;4种方法应用在食品检测中,金黄色葡萄球菌检出率无显著差异.因此可选择显色培养基和PetrifilmTM测试纸片法作为日常检验的辅助手段,以提高检测灵敏度、缩短检验周期.[结论]研究可为食品检测方法的研究及应用积累一定的经验,为今后金黄色葡萄球菌的检测工作提供一定参考.     

金黄色葡萄球菌检测方法的研究进展

对目前金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,金葡菌)快速检测方法的研究进展进行综述,为从事金葡菌检测鉴定的科研人员和临床工作者提供了科学指导和借鉴。