中国林蛙皮肤抗菌活性肽的分离提取

将中国林蛙毁双髓,置冰浴中迅速剥皮,冲洗血污后粉碎,经80％甲醇抽提2次;再经sephadex G-100、sephadex G-25和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离等,从林蛙皮肤中分离获得5种小分子多肽。抗菌活性试验表明：经sephadex G-25凝胶过滤获得的小分子多肽洗脱峰第6峰,对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌具有较强的抗菌活性;SDS-PAGE电泳表明为单一区带,此抗菌活性多肽的相对分子量为4．31ku。     

红褐林蚁多肽的免疫活性及镇痛、抗感染作用

对红褐林蚁的多肽蛋白质进行了分离和制备,并对其免疫活性、镇痛及抗感染作用进行了研究.红褐林蚁水提物经SephadexG-50凝胶过滤层析分离得到组分Ⅰ和组分Ⅱ,经紫外检测均为蛋白质;每个组分经反相高效液相色谱分离和制备,组分Ⅰ得到a,b,c3个组分,其中组分a含量最高;组分Ⅱ得到d,e,f3个组分,其中组分e含量最高.淋巴细胞转化试验结果显示：组分a和组分e能抑制淋巴细胞增殖,表明其具有免疫活性;热板法所致小鼠痛阈值的变化和二甲苯诱发小鼠耳肿胀试验显示：红褐林蚁多肽试剂具有镇痛和抗感染作用.     

梅花鹿茸多肽新成分的提取分离及其生物效应研究

梅花鹿二杠茸经４０％ＥｔＯＨ提取,用Ｍｅ２ＣＯ分级沉淀、离心分离,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５～５０柱层析纯化,得梅花鹿多肽Ⅰ和Ⅱ组分。测定了Ⅰ和Ⅱ的ＵＶ、ＩＲ光谱。生物效应实验表明,组分Ⅰ和Ⅱ均具有抗炎、促生长作用。     

豌豆光系统Ⅰ多肽HPCE分离特性的研究

为进一步探讨豌豆光系统Ⅰ（PSⅠ）的结构与多肽组成，本研究提取了经DOE—PAGE分离的光系统Ⅰ多肽，采用毛细管凝胶电泳方法，以1％的葡聚糖为毛细管凝肢线性高分子筛分基质，0．5％乙基纤维素，0．1％SDS为磷酸盐缓冲液添加剂。在35min内进行了较好地分离。所得的色谱图基线平稳、分离度较高。为进一步利用毛细管电泳技术进行蛋白复合物多肽的分离奠定了良好的基础。     

章鱼下脚料发酵液中多肽的分离及抗氧化活性的研究

以章鱼下脚料为原料,V-3菌种发酵后,采用阴离子交换层析法分离章鱼下脚料发酵液中的多肽.通过改变缓冲液流速、上样量和洗脱离子强度,确定了最佳分离条件,并测定了分离组分的含量及抗氧化活性.结果表明:最佳分离条件为流速o.8 mL/min,上样量90 mg,洗脱离子强度1 mol/L.经测定发酵液多肽含量为40.5 mg/g(下脚料粉),分离后组分FⅠ多肽含量为65.2 mg/g,FⅡ多肽含量为921.3mg/g.同时,FⅠ和FⅡ两个组分在浓度为0.6 mg/mL时对羟自由基清除率分别为60.1％和40.2％,IC50分别为0.40 mg/mL、0.62 mg/mL,对超氧阴离子自由基清除率分别为42.0％和36.4％,IC50分别为0.83 mg/mL、1.08 mg/mL.对DPPH自由基清除率分别为40.2％和31.5％,IC50分别为0.73 mg/mL、0.93 mg/mL,说明FⅠ和FⅡ对自由基具有清除作用,且FⅠ的清除作用强于FⅡ.     

抗菌肽制剂对提高金华猪生长性能的效果

抗菌肽是生物体抵御外源性病原微生物的入侵而产生的一类小分子多肽,与传统的抗生素相比具有分子量小、抗菌谱广、热稳定性好、抗菌机理独特等优点。试验主要是研究抗菌肽制剂对提高金华猪生长性能的临床效果,并设立对照组、试验Ⅰ组(抗生素组)在预防腹泻的效果上进行比较。结果表明,用抗菌肽制剂组(试验Ⅱ组)与试验Ⅰ组相比差异不显著,两试验组与对照组相比差异极显著。     

仙人掌抗菌肽的筛选、分离纯化及性质研究

目的:研究仙人掌植物是否具有起抑菌作用的抗菌肽,并对其进行分离纯化和部分性质研究。方法:采用梯度盐析的方法提取6种仙人掌不同饱和梯度硫酸铵沉淀的蛋白质组分进行抑菌性试验,筛选蛋白质组分具有抗菌效果的仙人掌品种。用Sephadex G-75和Sephadex G-25柱层析对抗菌效果最为显著的蛋白质组分进一步分离纯化,并对纯化到的具有抗菌活性的多肽物质进行分子量、理化性质和抗菌活性检测。结果:发现4种仙人掌中存在对金黄色葡萄球菌有抗菌作用的小分子量蛋白质成分。其中金手球所含蛋白质组分的抗菌效果最为显著,并从中分离纯化得到具有抗菌活性的多肽物质,命名为MH-AMP-1。MH-AMP-1的分子量(Mr)约为8511 Da,在pH 2.5~7.5的乙酸铵缓冲液中抗菌活性强,且具有一定的热稳定性,对检测的病原菌具有广谱抗菌活性。     

大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型基因的分子克隆

本文克隆了含大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型基因的2．0kbSau3AⅠ酶切片断，对插入片段进行了核苷酸序列测定，1298bp的核苷酸序列包含2个完整的开放读框，其中SLT ⅡA亚基基因编码区长957bp，编码319个氨基酸多肽，SLTⅡB亚基基因编码区长267bp，编码89个氨基酸多肽，与已知人源的SLTⅡ基因核苷酸序列比较具有99％的同源性，与SLTⅠ结构基因相比，A亚基同源序列为56．43％，B亚基为60．15％。     

柞蚕抗菌多肽对若干蔬菜细菌病原的抑制作用

柞蚕抗菌多肽对若干蔬菜细菌病原的抑制作用王富德，赵姝华，张世苹（辽宁省农科院大连生物技术研究所）经生物或理化因子诱导柞蚕蛹产生的抗菌多肽，具有较强的广谱杀细菌能力。已报道可被柞蚕抗菌多肽杀灭的植物病原细菌有：马铃薯、烟草、番茄、桑、桉树、木麻黄青枯病...     

不同品种小麦叶片光合膜PSⅠ和PSⅡ颗粒光合特性及多肽组分比较

比较分析了小麦化杀型杂交种麦优４号及其父本扬麦１５８和对照品种扬麦５号的叶片光合膜ＰＳⅠ和ＰＳⅡ颗粒荧光发射光谱、电子传递活性及多肽组分。研究结果表明：杂种麦优４号ＰＳⅠ和ＰＳⅡ颗粒具较高的电子传递活性，其光合膜ＰＳⅡ室温荧光发射光谱峰值明显高于其它品种；ＰＳⅡ多肽组分间不存在明显差异，但ＰＳⅠ颗粒的多肽却存在区别。     

林蛙皮活性肽抗氧化活性研究

[目的]探讨林蛙皮活性肽的抗氧化活性。[方法]林蛙皮经木瓜蛋白酶水解后,将产物经葡聚糖凝胶G-25层析纯化,测定活性组分对DPPH.、.OH、O2-.的清除能力。[结果]柱层析共分离出4个组分(PⅠ、PⅡ、PⅢ、PⅣ),各组分抗氧化能力的大小顺序依次为PⅡPⅢPⅠPⅣ。PⅡ组分对各自由基清除能力的大小顺序依次为DPPH..OHO2-.。蛋白浓度为1 mg/ml时,对DPPH.的清除率为94.23%;蛋白浓度为16 mg/ml时,对.OH的清除率为86.79%,对O2-.的清除率仅为26.32%。[结论]该研究为林蛙的综合开发和利用提供了新的依据。     

从麦胚清蛋白分离制备高活性抗氧化肽

【目的】探究能有效地从小麦胚芽清蛋白二步双酶酶解物中分离得到高活性抗氧化肽的工艺。【方法】以小麦胚芽清蛋白为原料,DPPH自由基清除率和Fe~(2+)螯合能力为抗氧化活性的评价指标,通过胰蛋白酶进行酶解,依次采用超滤膜和凝胶过滤色谱(Sephadex G-75)对酶解产物进行分离纯化,筛选出活性较高的组分;采用碱性蛋白酶对获得的活性较高组分进行酶解,通过凝胶过滤色谱(Sephadex G-15)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化其酶解产物;采用质谱技术(ESI-TOF MS/MS)对抗氧化活性最高的组分进行结构鉴定。【结果】分离得到3个活性组分(峰)P_a、P_b、P_c,采用DPPH法和Fe~(2+)螯合能力测定法测定其抗氧化活性的结果都显示,在3个组分中,提取率为23.1%的组分P_b抗氧化活性最强(P0.05),因此选取组分Pb进行下一步碱性蛋白酶酶解。该酶解物经Sephadex G-15分离后得到Pd和Pe两个组分(峰),经抗氧化活性测定,选取提取率为52.1%的高抗氧化活性组分Pd(P0.05)进一步通过RP-HPLC进行疏水性分离,得到P_1、P_2、P_3、P4、P5五个活性组分(峰),其中提取率为7.3%的组分P3的抗氧化活性最强(P0.05),其DPPH自由基清除率和Fe2+螯合能力的EC50值分别为1 mg·m L~(-1)、0.6 mg·m L~(-1)。最后通过质谱技术(ESI-TOF MS/MS)鉴定组分P3的结构,得到其氨基酸序列为AREGETVVPG,分子量为1 013.51 Da,纯度约为85%,与用化学方法合成的多肽AREGETVVPG(纯度95%以上)的抗氧化活性相比,结果没有显著差异(P0.05)。【结论】二步双酶酶解结合超滤膜、凝胶过滤色谱和RP-HPLC等蛋白分离纯化技术为直接得到单一的高活性抗氧化肽提供了技术参考。     

草鱼肠道抗菌肽的提取及体外抑菌效果初步研究

将新鲜草鱼肠道组织经超声破碎、乙酸浸提后,再经Sephadex G50和Sephadex G25 凝胶柱过滤层析,收集各组分,采用药敏纸片法检测各组分的抗菌活性.收集具有抗菌活性的组分,经Tricine SDS-PAGE,考马斯亮蓝染色后分析获得1条较明显的蛋白带,相对分子质量约为6 200.该抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和嗜水气单胞菌均表现出较强的抗菌活性,说明抗菌肽对维持鱼类肠道微生物区系稳定具有重要作用.     

猪源抗菌肽的粗提及生物学活性的初步验证

将新鲜猪小肠超声破碎,经高温处理、乙酸浸提后,高速离心提取上清,上清液再经Sephadex G-50凝胶层析纯化,收集洗脱液.用纸片法检测抗菌肽粗提物的抑菌活性;鸡胚接种试验检测抗菌肽粗提物抑制病毒的作用.结果表明,抗菌肽粗提物有明显的抑制菌、病毒增殖的活性.     

一种新型乳清蛋白肽的核磁共振研究

乳清蛋白经碱性蛋白酶酶解的产物,经超滤、凝胶过滤色谱以及反向高效液相色谱分离纯化得到一种纯度较高的多肽。多肽经液质分析,初步确定其氨基酸序列为Asp-Gln-Trp-Leu,为一种新的肽段。本文采用核磁共振波谱法[包括~1H、~(13)C、~1H-~1H COSY(~1H-~1H correlation spectroscopy),HMBC(heteronuclear multiple bond correlation),HMQC(heteronuclear multiple quantum coherence),TOCSY(total correlation spectroscopy),NOESY(nuclear overhauser effect spectroscopy)]对其结构进行了解析,并对核磁信号进行了归属。实验结果显示TOCSY、HMBC和NOESY技术在多肽核磁共振信号的归属中发挥着关键的作用。     

抗菌肽MagaininⅡ的原核表达与抗菌活性分析

根据MagaininⅡ氨基酸序列,选用大肠杆菌偏爱密码子,化学合成了2个DNA片段,利用重叠区互补PCR法得到MagaininⅡ的基因序列.构建了融合表达载体pET21 b-MagaininⅡ,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,在5.1 kD处可见目的蛋白条带,...     

黑眶蟾蜍皮肤白蛋白的纯化及胰蛋白酶抑制活性

[目的]探讨黑眶蟾蜍皮肤白蛋白的纯化及胰蛋白酶抑制活性。[方法]通过离子交换层析和凝胶过滤层析，从黑眶蟾蜍皮肤中得到其白蛋白，命名为BufomA-skin。65nmol／L的BufomA-skin分别与30nmol／Ltrypsin在25℃不同保温时间（0．25—24h）下测定胰蛋白酶抑制活性，计算剩余酶活力。[结果]BufomA-skin为单链蛋白，分子量约为66．7kDa。但在非还原状态下，50～66kDa条带呈弥散样。该蛋白有抑制胰蛋白酶水解小肽底物的活性，但对其他丝氨酸蛋白酶如凝血酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶无抑制。BufomA-skin与胰蛋白酶保温24h后，胰蛋白酶活性无恢复。[结论]黑眶蟾蜍皮肤白蛋白具有稳定的胰蛋白酶抑制活性，在黑眶蟾蜍防御天敌捕食的过程中发挥重要作用.     

棉花黄萎菌拮抗细菌BDT-25抑菌蛋白的分离纯化

拮抗细菌BDT-25是从根际土壤中分离得到的1株芽孢杆菌，其菌株发酵液产生的抑菌物质对棉花黄萎菌具有较强的抑制作用。为了明确其抑菌活性组分，本研究通过硫酸铵沉淀的方法从BDT-25菌株去菌体发酵液中提取得到对棉花黄萎病菌具有抑制作用的抑菌蛋白，分别采用阴离子交换层析和凝胶过滤层析的方法对其进行了纯化，抑菌活性检测结果显示，P1具有抑菌活性，为有效抑菌活性组分。经SDS—PAGE电泳纯化为单一蛋白带，分子量约为30kDa。     

犬血清IgG的纯化、抗体制备及其鉴定

[目的]探讨犬血清IgG的纯化方法。[方法]采用硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析提取纯化犬血清IgG,利用SDS-PAGE电泳和免疫印迹法鉴定所得产品的纯度和免疫活性。[结果]获得的纯化犬血清IgG的SDS-PAGE图谱中存在2条蛋白条带,表明获得了高纯度的犬血清IgG;重链分子量为58kD,轻链分子量为27kD,IgG分子量为170kD。特异性检测发现犬血清IgG重链和轻链都能与鼠抗犬血清IgG抗体结合,表明纯化犬血清IgG具有免疫原性和反应原性。[结论]硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析可获得纯度高、活性好的纯化犬血清IgG,为犬血清IgG相关的免疫学试验提供了高质量的免疫材料。