紫外线诱变选育高产醋酸的醋酸菌研究

[目的]选育适合酿造杏渣醋的高产醋酸的醋酸菌株.[方法]对初始醋酸菌C1-0的生长曲线进行测定,对处于对数期的C1-0进行紫外线诱变,使诱变菌株的致死率达85;～90;,以产酸量为指标,选育高产醋酸的醋酸菌菌株,通过初筛和复筛,选育高产醋酸的醋酸菌菌株,并将其进行传代培养,测定产酸的稳定性.[结果]采用紫外线对培养至24h的初始菌株C1-0照射20s,使其致死率达到88.72;,获得了3株高产醋酸的醋酸菌突变株C1-11、C1-27、C1-30,产酸量分别达到37.29、38.80和36.60g/L.这3株突变株传代5次,产酸量变化幅度较小.[结论]通过紫外线诱变的方法获得三株高产醋酸的醋酸菌株C1-11、C1-27、C1-30,比初始菌株C1-0产酸量分别提高4.5;、8.6;、2.6;,且遗传稳定性较好.     

禽用乳酸菌的筛选与功能鉴定

【目的】从健康鸡肠道中分离筛选优质乳酸菌,为制备禽用微生态制剂提供技术支持。【方法】选用30日龄健康青年鸡,取其盲肠内容物,通过选择性培养基筛选出具有产酸能力的乳酸菌,对其进行耐pH 3.0胃酸和3g/L牛胆盐筛选试验及菌株生长曲线、产酸能力测定,并通过平板抑菌试验筛选出具有较强抑菌效果的菌株。最后对此菌株16SrRNA进行克隆测序,经Blast比对和系统进化树分析,对菌株进行鉴定。【结果】从所取鸡盲肠内容物中分离得到L1~L9 9株乳酸菌,其中L2、L4和L9株耐pH 3.0和3g/L牛胆盐的综合能力较强。经过比较3株菌的生长曲线和产酸曲线,发现L2菌株耐酸耐牛胆盐、生长迅速、产酸能力强,且具有较强的抑制致病性大肠埃希菌的活性。经16SrRNA序列比对和系统进化树鉴定,确定L2为唾液乳酸杆菌。【结论】成功筛选出了1株可用以研制禽用微生态制剂的乳酸菌菌株。     

柑桔果醋酿造用菌种分离及其生产性能测定

为筛选出适于柑桔果醋酿造的专用菌种,提高果醋品质,以自然酸发酵的柑桔醋液为菌源,利用钙平板筛选性能优异的醋酸菌,并对其进行鉴定及产酸量、产酯量、耐酒精度、耐温性能和稳定性等性能指标检测。结果共筛选出41株醋酸菌,其中ZY.C4和ZY.A5菌株产酸量较高,经鉴定分别为苹果醋杆菌(Acetobacter malorum)和恶臭醋杆菌(Acetobacter rancens),均不产生肠毒素。ZY.C4菌株的产酸产酯能力、耐温性能和耐酒精能力均优于ZY.A5菌株和对照菌株沪酿1.01,其最适发酵时间为5 d,最佳发酵温度为31℃,最适初始酒度为7%;传代5次性能稳定,适合于柑桔果醋酿制。     

产纤维素酶真菌菌株的分离筛选及产酶条件优化

【目的】由于真菌的纤维素酶系较全,且可分泌至胞外,易分离,所以试验致力于筛选高产纤维素酶真菌菌株.【方法】利用羧甲基纤维素钠培养法、刚果红染色法、纤维素酶活性测定法从样品中分离筛选出产纤维素酶菌株,同时结合菌落形态观察、显微镜观察和ITS序列同源性分析进行鉴定.【结果】通过初筛,筛选出15株Hc值较大的产纤维素酶真菌菌株,再经过液体发酵复测羧甲基纤维素酶活和滤纸酶活,筛选出一株产纤维素酶活最高的菌株B-2-3,经鉴定B-2-3为烟曲霉(Aspergillus fumigatus),其羧甲基纤维素酶活为2 341.76U/mL,滤纸酶活为398.18U/mL.经过产酶条件优化,确定其最适产酶条件为温度25℃、接种量4μL、蛋白胨0.5~0.6g/L、CMCNa 0.3~0.35g/L、pH 6.5.【结论】筛选出一株产纤维素酶活较高的烟曲霉菌株B-2-3.     

杏皮渣醋酸发酵醋酸菌的分离筛选和鉴定

[目的]筛选获得适宜杏皮渣醋发酵的醋酸菌并对其进行鉴定,为杏皮渣醋质量及产量的提高奠定基础.[方法]在杏皮渣汁自然发酵液、固态发酵醋醅和杏园的土壤中分离醋酸菌,对分离菌株进行产酸曲线的测定及生理生化鉴定,对产酸量高的菌株进行16S rDNA序列测定并建立系统发育树,对其进行鉴定.[结果]共分离得到6株菌,其中Ac01、Ac02、Cp01、Cp02和Tr01属于醋酸菌属.初步判定,在杏皮渣汁的自然发酵液中分离的Ac01和Ac02可能属于醋化醋杆菌(Acetobacter aceti),菌株Ac02醋酸产量在分离菌株中最高,可达到3.04 g/100 mL,其16S rDNA序列与Acetobacter pomorum strain LMG 18848 16S rDNA序列相似度大于99;.[结论]在杏皮渣汁自然发酵液中分离得到的菌株Ac02为醋杆菌属(Acaobacter)的Acetobacter pomorum strain LMG 18848,是一株在杏皮渣醋生产中有应用潜力的醋酸菌.     

培养液组胺的检测及鲣鱼产组胺菌的生物活性评价

通过直接将培养液中的组胺经丹酰氯衍生化生成稳定的物质,以1,7-二氨基庚烷为内标,建立高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-VWD）方法检测培养液中的组胺;并研究了温度和pH对产组胺菌生长和组胺产生的影响。结果表明,培养液中组胺的检测方法定量限为0.5μg/mL,回收率在100%～107%,满足方法培养液中组胺的检测。经分离得到的2株产组胺菌分别记为J2和J4,2株菌在添加L-组氨酸的胰酶大豆肉汤里均能够产生组胺;菌株J2和J4最适生长温度均为30℃,最适pH分别为7和6,菌株J2和J4产组胺的最适温度分别为25℃和30℃,最适pH均为5,在适宜的实验条件下组胺产生量最大值为12.47 mg/L。     

高产几丁质酶高温紫链霉菌的筛选和发酵条件优化

从土壤中筛选得到1株高产耐热几丁质酶的嗜热菌株Z16,对其进行鉴定及产酶发酵条件优化研究.采用分子生物学结合形态学方法鉴定该菌为高温紫链霉菌(Streptomyces thermoviolaceus).通过发酵培养基组分及培养条件的优化,得到了最佳发酵产酶培养基:胶体几丁质5 g/L,粉末几丁质10 g/L,酵母浸粉1.25 g/L,黄豆粉3.75 g/L,吐温20 4 g/L.最佳培养条件为:接种量5％,45℃培养60 h.在优化后的发酵条件下,该菌株最大产酶水平达5.5 U/mL,比优化前产酶量提高了4.2倍,较高的产酶量为进一步研究该菌所产几丁质酶的纯化和性质提供了基础.该菌具有较好的应用前景.     

山东部分地区棉花黄萎病菌的致病类型及毒性分析

从德州、东营和泰安等棉花黄萎病田采集病株样本,经分离培养和鉴定,共获得Verticillium dahliae Kleb.分离物202株,分别用落叶型和非落叶型菌系特异引物INTD2f/INTD2r和INTND2f/INTND2r对各分离物进行PCR扩增,并随机选择8个菌株分析其产毒素及致萎能力。结果表明,202株分离物中,落叶型菌系201株,非落叶型菌系1株;落叶菌株HDF4-3-1产毒素能力最强,毒素浓度约50.82μg/m L,非落叶菌系HLX5-1-1产毒素能力较弱,毒素浓度约13.85μg/m L;落叶菌系HDF5-3-1的致萎指数最高,为72.5%,非落叶菌系HLX5-1-1的致萎指数最低,为42.5%。表明,落叶型菌系产毒素和致萎能力总体较高。     

厌氧产乙酸菌株ZY-3的筛选、鉴定及产酸条件

为筛选高效厌氧水解产乙酸菌,将其应用于高浓度有机废水的厌氧生物处理,强化产乙酸菌群的产乙酸作用,提高消化效率。采用Hungate厌氧操作技术以及选择性培养基分离筛选高效产乙酸菌,经生态学、生理生化、16S r DNA序列同源性分析对菌株的发酵产酸特性进行分析鉴定。结果表明,从污水处理厂活性污泥中分离出1株厌氧水解产乙酸菌ZY-3,经鉴定为双酶梭状芽孢杆菌(Clostridium bifermentans)。该菌株在以麦芽糖为碳源、初始pH值为7.5、30℃温度下培养12 h,乙酸产量最高达1 346.7 mg/L;在添加0.4 mol/L NaCl的发酵培养基中可正常生长且产酸量较0、0.2 mol/L NaCl处理增加,高达1 588.7 mg/L。菌株ZY-3产酸能力强,发酵性能稳定,还能利用丙酸盐发酵产乙酸,对加速乙酸转化、防止丙酸积累、提高厌氧消化效率具有重要意义。     

L-精氨酸产生菌诱变育种及发酵条件优化

本文以Corynebacterium glutamicum DSM1412为出发菌株,经紫外线和1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍逐级诱交处理和选育,并采用N-硝基-L-精氨酸甲酯进行抗性选育,获得一株高产L-精氨酸和遗传性稳定的菌株Corynebacterium glutamicum ZDNTG5.该菌种产L-精氨酸的量可达31 g/L,比出发菌提高了1.4倍.通过对发酵培养基优化,确定最佳摇瓶发酵条件为葡萄糖9.0%,玉米浆3.0%,(NH4)2SO4 6.0%,KH2PO4 0.05%,MgSO4·7H2O 0.03%,碳酸钙2.0%,接种量6%,pH 7.0,装液量15 mL/100 ml,转速100 rpm,30℃发酵培养96 h.在此条件下发酵,产酸量达44 g/L,产精氨酸的量比未经优化时提高了41.9%.     

层次分析法在金花梨果实品质评价上的应用

运用层次分析法,对金花梨及其12个变异单系果实的糖酸比,总糖、总酸、可溶性固形物(TSS)和V c含量及果形指数、单果重等7个品质指标进行了综合评判。结果表明,J4、J14、J18和J134个单系表现优良,具有较高的经济价值,可在四川省大面积推广,而J10、J5、J8和J154个单系表现较差,应淘汰或作为授粉树。     

TiCl_3法快速筛选L-苹果酸高产突变株

[目的]探讨并验证TiCl3法筛选L-苹果酸高产突变株的可行性。[方法]将34株米根霉诱变株及出发株(CK)分别接种到含葡萄糖的发酵培养基中发酵96 h,发酵液经稀释后加入TiCl3,根据沉淀发生情况,筛选L-苹果酸高产突变株。[结果]当发酵液稀释40倍时,有4株诱变株发酵液产生沉淀,而出发株发酵液未产生沉淀。据此筛选出4株发生显著正突变的诱变株,其L-苹果酸产量约为16~20g/L。其发酵液经HPLC测定分析,表明4株突变株发酵液中L-苹果酸的产量为15.88~18.26 g/L,而出发株L-苹果酸产量为11.76 g/L,突变株L-苹果酸产量增幅达35%~55%。[结论]TiCl3法可有效应用于L-苹果酸高产突变株的筛选。     

两株细菌的特性及物理模拟驱油试验

分别采用红外光谱法和高效液相色谱法对菌株HD-322-2和T103代谢产生的成分进行分析,并采用这两种菌株进行了岩心模拟驱油实验。结果表明：菌株HD-322-2和T103属于高产表面活性剂的菌株,产量分别为321mg/L和195 mg/L。在发酵20 h后,菌株T103主要产生小分子有机酸,包括乙酸（1.10 g/L）、丙酸（0.24g/L）和丁酸（1.57 g/L）。物理模拟驱油试验结果表明,菌株HD-322-2和T103有较强的驱油性能,复配使用后在水驱的基础上可提高原油采收率5%～7%。     

醋酸菌发酵条件优化的研究

[目的]优化苹果醋发酵的工艺条件。[方法]以新鲜苹果汁为原料,采用液态发酵法,通过单因素试验和正交试验研究了温度、接种量、转速、发酵周期、碳源、氮源、pH、初始酒精浓度对K-8醋酸菌发酵产酸量的影响。[结果]试验确定了K-8醋酸菌发酵的最佳工艺条件,即:蔗糖1.0%,酵母膏1.6%、起始pH为4.5,初始酒精浓度为4%、接种量为6%,于30℃、175 r/min的恒温摇床上振荡培养4d。经优化后,K-8醋酸菌发酵的产量可达到50.251 g/L。[结论]研究可为苹果醋的工业化生产提供参考依据。     

某些因子对四株维氏固氮菌菌株合成海藻酸的影响

本试验结果表明:相同条件下,四株维氏网氮菌(Azotobacter vinelandii)中,以菌株N_(13)的发酵周期短(1～2天),海藻酸合成最大(5.82 g/L),产海藻酸活力强(活力系数为2.60);不同条件下,菌株N_(13)在所试菌龄内,海藻酸合成最均高于其他菌株,其一天菌龄的浓度高达5.45±0.43 g/L,不同发酸液的海藻酸合成最仅在pH 8.0时低于菌株14~#,尤以pH6.0时,高达8.61g/L.在旋转式摇床或往复式摇床上,亦以菌株N_(13)的海藻酸合成量最高(3.61±0.26 g/L和4.39±0.12 g/L),试验温度范围内,也以菌株N_(13)的海藻酸合成量最高,32℃时达到最大值(6.41 g/L),菌株N_(13)以2～8％(V/V)的接种量试验表明:旋转式摇床为2％,往复式摇床为2～4％。     

秸秆发酵生物腐植酸的制备及其性能测定

[目的]利用秸秆发酵腐植酸,优化最佳提取工艺。[方法]利用高效秸秆降解菌株进行秸秆发酵,提取腐植酸,研究提取温度、提取时间、Na OH浓度及用量对腐植酸提取量的影响,优化最佳提取工艺,并测定提取得到的腐植酸p H、羧基、交换容量(CEC)等理化性质。[结果]在1 g发酵秸秆中加入40 m L 0.020 g/m L Na OH,于65℃下水浴2.0 h,可得到最大腐植酸提取量,为0.176 g。腐植酸中总酸性基为0.001 9 mol/g,总羧基为0.000 1 mol/g,交换容量(CEC)为0.003 9 mol/g;E_(465)=0.175,E_(665)=0.020,E_4/E_6=8.735,凝聚限度为0.006 4 mmol/L。[结论]经过单因素优化,腐植酸提取量增加。腐植酸是一种弱酸性物质,其羧基含量较低,交换容量较小,并具有一定凝聚性。     

健康犬肠道乳酸杆菌某些生物学特性的研究

从健康犬的肠道中分离并鉴定出5株乳酸杆菌，其中嗜酸乳杆菌3株、肠乳杆菌1株、发酵乳杆菌1株。根据其耐胆盐、生长表现等特性选择2株嗜酸乳杆菌（D1-3、D4-3），作进一步的耐酸性、粘附性、抑菌作用等生物学特性试验。结果表明：D1-3和D4-3菌株能耐受高达6．0g／L的胆盐以及pH值低至2．0的酸性环境，对犬肠粘膜上皮细胞有良好的粘附性，其代谢产物对常见致病菌有较好的抑制作用，对小白鼠无毒性。     

γ-聚谷氨酸高产菌株的鉴定及诱变选育

从豆豉中分离筛选出一株产γ-聚谷氨酸（γ-PGA）的菌株,经过形态、生理生化鉴定及16SrRNA基因序列分析,确定为枯草芽孢杆菌。其中Bacillus subtilis HD11γ-PGA产率最高,达6.8g/L。以HD11作为出发菌株,采用紫外线、硫酸二乙酯和亚硝基胍对其进行复合诱变,分离筛选得到一株稳定的高产突变株Bacillus subtilisHD-F9,经摇瓶发酵γ-聚谷氨酸的含量达到10.72g/L,较出发菌株提高56.3%。     

竹醋液及竹醋液复配制剂对木材霉菌的抑菌性

为拓宽竹醋液的用途以及开发高效低毒型竹木材保护剂,进行了竹醋原液以及竹醋液复配制剂对3种常见木材霉菌（黑曲霉Aspergillus niger,绿色木霉Trichoderma viride和橘青霉Penicillium citrinum）的抑菌性研究。结果表明：①竹醋液原液对3种木材霉菌抑菌率为99%,对木材霉菌具有直接灭杀作用,杀菌最高稀释倍数10倍。②滤纸抑菌圈试验证明,复配有效成分制成的PW1,PW2和PW3竹醋液复配制剂对木材霉菌抑菌性能比竹醋液原液明显增强,对黑曲霉、绿色木霉和橘青霉抑菌圈直径（试验第2天）,竹醋原液全为0 mm,PW1为18,29和17 mm;PW2为23,32和20 mm;PW3为19,28和16 mm。PW2对3种木材霉菌抑菌效果最强,其次是PW1,最弱是PW3。③在3种木材霉菌中,竹醋液复配制剂对绿色木霉菌抑制作用最强。表6参9