植物乳杆菌C88对H2O2诱导氧化损伤的 Caco-2细胞的保护作用

【目的】文章旨在研究植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）C88的抗氧化作用。【方法】采用0.1 mmol•L-1 和0.2 mmol•L-1浓度H2O2连续处理Caco-2细胞12—48 h造成氧化损伤,通过测定细胞培养液上清和细胞裂解液的自由基清除能力及抗氧化物酶活性,评价植物乳杆菌C88对Caco-2细胞抗氧化损伤的保护作用。【结果】与氧化损伤模型组相比,植物乳杆菌C88在1011CFU/mL浓度下,能显著提高细胞裂解液的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性(P＜0.05)和总抗氧化（T-AOC）能力(P＜0.05);以及细胞裂解液的羟自由基清除率(P＜0.05)、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）(P＜0.05)和超氧化歧化酶（SOD）活性。细胞裂解液的羟自由基清除率低于氧化应激对照组。【结论】植物乳杆菌（L. plantarum）C88通过提高Caco-2细胞的自由基清除能力和抗氧化酶活性,表现出了较强的抗氧化活性。     

扇贝多肽对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用

[目的]建立H2O2诱导HaCaT细胞氧化应激损伤的体外模型,探讨扇贝多肽(PCF)对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用及其作用机制。[方法]采用不同浓度的H2O2(50、100、200、300、500μmol/L)作用HaCaT细胞12 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率;用不同浓度(1.42、2.84、5.68 mmol/L)的PCF分别处理细胞12 h后,加入H2O2(300μmol/L)继续作用12 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用酶生化法法测定细胞上清液中LDH活性以及细胞质中GSH-Px、T-AOC和CAT水平。[结果]与正常组相比,50~500μmol/L浓度的H2O2依赖性地引起HaCaT细胞氧化损伤,300μmol/L的H2O2使存活率降低到56%(P0.01);与模型组相比,不同浓度的PCF均可保护H2O2诱导的氧化损伤,增加细胞存活率,降低细胞LDH的释放量,提高GSH-Px、T-AOC和CAT含量,增强细胞抗氧化作用。[结论]扇贝多肽能对抗H2O2诱导的氧化应激,对细胞受损具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化酶活力有关。     

鼠李糖乳酸杆菌对Caco-2细胞抗氧化功能的影响

 【目的】研究鼠李糖乳酸杆菌（Lactobacillus rhamnosus）对氧化应激状态下Caco-2细胞抗氧化功能的影响。【方法】将培养的Caco-2细胞分为4组：对照组和氧化应激组（在培养液中加入100 µmol•L-1 H2O2），处理组Ⅰ和处理组Ⅱ在氧化应激条件下分别添加鼠李糖乳酸杆菌（约108 CFU•mL-1）和抗氧化剂特丁基对苯二酚（TBHQ） （2.75 µg•mL-1）各1 mL。Caco-2细胞培养至12和48 h时分别测定其上清液和裂解液的抗氧化活性。【结果】添加鼠李糖乳酸杆菌减轻了Caco-2细胞氧化受损，使细胞培养上清中的总抗氧化力（T-AOC）显著高于氧化应激组：12 h时显著提高了细胞培养上清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）（P＜0.01）、过氧化氢酶（CAT）（P＜0.01）活力以及细胞裂解液中超氧化物酶（SOD）活力（P＜0.01）和还原型谷胱甘肽（GSH）含量（P＜0.05），48 h时显著提高了细胞培养上清液抗O2- (ASAFR) （P＜0.01）、GSH-Px（P＜0.01）、CAT（P＜0.01）、SOD活力（P＜0.01）和细胞裂解液中过氧化物酶（POD）活力（P＜0.01），丙二醛（MDA）含量显著降低（P＜0.01）。添加TBHQ组12 h时细胞上清中T-AOC（P＜0.01）和CAT活性（P＜0.01）及细胞裂解液中GSH含量（P＜0.01）显著高于氧化应激组，而处理48 h后相应指标低于氧化应激组；此时，细胞培养上清液中MDA含量极显著降低（P＜0.01），抗O2-、SOD、GSH-Px、POD活力和细胞裂解液中POD活力显著升高（P＜0.05）。【结论】在体外条件下，鼠李糖乳酸杆菌可以提高氧化应激状态下Caco-2细胞的抗氧化功能。     

地鳖肽对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

【目的】探明地鳖肽对四氯化碳(CCl_4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。【方法】取60只小鼠分溶剂组、模型组(CCl_4)、地鳖肽组、阳性药物组,灌服不同剂量地鳖肽提取液和生理盐水及保肝药,每天1次连续7d,末次给药2h后除溶剂组小鼠外都腹腔注射0.1%CCl_4,制备血清和肝组织匀浆,ELISA和PCR等方法检测血清中ALT和AST活力,肝组织中SOD、GSH-Px、CAT活力和MDA含量,组织中TNF-α、IL-6和iNOS含量及mRNA表达;显微镜观察肝组织结构。【结果】与模型组比较,地鳖肽组小鼠血清中ALT和AST活力极明显降低,肝组织中抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活力显著提高,但其MDA含量明显降低;肝组织中TNF-α、IL-6和iNOS含量极显著降低及mRNA表达量明显下调;模型组小鼠肝组织结构损伤明显,而地鳖肽组小鼠肝组织结构损伤明显缓解。【结论】地鳖肽对CCl_4诱导的小鼠急性肝损伤有保护作用。     

虾青素缓解脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤

【目的】研究虾青素(AST)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝损伤的影响。【方法】健康雄性ICR小鼠40只随机分为4组,包括对照组、AST组、LPS组和虾青素预保护组(AST+LPS组)。记录小鼠体质量并计算肝脏系数;通过ELISA法检测血清中髓过氧化物酶(MPO)含量;生物化学法测定肝组织中丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性;荧光定量PCR法检测抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)的mRNA相对表达量;通过HE染色观察各组肝脏细胞形态和肝损伤程度。【结果】各组小鼠初始体质量均为18 g,末次称量与初始体质量相比增加9～11 g,但各组间体质量增加无显著性差异(P0.05)。与LPS组相比,AST+LPS组小鼠肝脏系数(0.054)、血清MPO质量浓度(10.20 ng·m L~(–1))和肝组织中MDA质量摩尔浓度(2.83μmol·g~(–1))显著降低(P0.05),抗氧化酶SOD(512.14 U·mg~(–1))、GSH-Px(848.91 U·mg~(–1))和CAT(61.53 U·mg~(–1))活性显著提高(P0.05),抗氧化酶mRNA的相对表达量均显著升高(P0.05),同时肝脏损伤程度低,肝细胞形态完整,排列均匀。【结论】虾青素可保护小鼠肝细胞形态,提高肝脏抗氧化水平,调节肝组织中抗氧化酶mRNA的表达,从而缓解LPS引起的肝脏氧化应激,减轻急性肝损伤。     

地鳖肽对C2C12细胞氧化损伤的保护作用

【目的】探讨地鳖肽对过氧化氢诱导的C2C12细胞氧化损伤的保护作用。【方法】体外培养C2C12细胞,H_2O_2处理细胞造成氧化损伤,叔丁基对苯二酚及地鳖肽处理细胞24h;采用MTT、分光光度计、免疫荧光、Western Blot、RT-PCR法分别检测细胞活力、抗氧化酶活力及过氧化物、Nrf2核移位及相关因子基因表达。【结果】与对照组相比,H_2O_2组对C2C12细胞的损伤明显;与H_2O_2组相比,地鳖肽能够显著缓解C2C12细胞活力的降低,提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶活力及其基因表达,抑制脂质过氧化物MDA的产生,地鳖肽促进Nrf2核移位以及Nrf2和HO-1蛋白表达,地鳖肽促进抗氧化通路关键因子Nrf2及其下游抗氧化酶基因表达上调;地鳖肽作用效果与叔丁基对苯二酚一致。【结论】在细胞氧化损伤状态下,地鳖肽可能通过激活Nrf2-ARE信号通路,提高抗氧化酶活力及上调其基因表达实现其抗氧化保护作用。     

核黄素对盐胁迫下杜梨叶片抗氧化系统的影响

为探讨外源核黄素对盐胁迫下杜梨叶片抗氧化系统的影响,以梨砧木杜梨幼苗为供试材料,在水培条件下,研究了外源施加不同浓度核黄素对200 mmol/L Na Cl胁迫下其叶片抗氧化酶活性、活性氧产生、膜质过氧化和抗氧化物质含量的影响。结果显示:Na Cl胁迫3 d后,杜梨叶片中超氧化物歧化酶(SOD)活性减弱,过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性增强,抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)和抗坏血酸(As A)合成下降,活性氧(O2·-、H2O2)和丙二醛(MDA)大量积累。施加外源核黄素能增强Na Cl胁迫下杜梨叶片中SOD、POD、CAT、GR、GSH-Px和APX的活性,提高GSH和As A的含量,减少O2·-和H2O2的产生,降低脂质过氧化程度,有效缓解盐胁迫对杜梨叶片的过氧化伤害,其中以10μmol/L浓度的核黄素处理效果最为显著。     

地鳖肽对H2O2刺激鸡骨骼肌卫星细胞增殖的影响

【目的】探讨地鳖肽对H2O2刺激的肌卫星细胞增殖的影响.【方法】采用两步酶消化法体外分离培养鸡骨骼肌卫星细胞(SCs),培养基中加入不同浓度地鳖肽培养细胞24h后H2O2刺激8h,免疫荧光鉴定SCs细胞,MTT法检测细胞存活情况,荧光实时定量PCR分析增殖调控基因表达水平.【结果】分离培养SCs表达Pax7的阳性细胞率达95%以上,两步酶消化法获得骨骼肌卫星细胞;中浓度H2O2单独处理SCs细胞8h后细胞活力下降为65.16%,而当不同浓度地鳖肽预处理SCs细胞后H2O2致细胞活力下降得到缓解;与正常组相比,H2O2降低了肌卫星细胞中Pax7、Myo D和Myf5基因的相对表达量,不同浓度地鳖肽预处理均能显著缓解H2O2导致的增殖调控基因表达降低.【结论】地鳖肽能显著提高SCs增殖调控因子的转录水平,改善H2O2刺激对SCs增殖的抑制作用.     

地鳖肽对H2O2刺激鸡骨骼肌卫星细胞增殖的影响

【目的】探讨地鳖肽对H2O2刺激的肌卫星细胞增殖的影响.【方法】采用两步酶消化法体外分离培养鸡骨骼肌卫星细胞(SCs),培养基中加入不同浓度地鳖肽培养细胞24h后H2O2刺激8h,免疫荧光鉴定SCs细胞,MTT法检测细胞存活情况,荧光实时定量PCR分析增殖调控基因表达水平.【结果】分离培养SCs表达Pax7的阳性细胞率达95%以上,两步酶消化法获得骨骼肌卫星细胞;中浓度H2O2单独处理SCs细胞8h后细胞活力下降为65.16%,而当不同浓度地鳖肽预处理SCs细胞后H2O2致细胞活力下降得到缓解;与正常组相比,H2O2降低了肌卫星细胞中Pax7、Myo D和Myf5基因的相对表达量,不同浓度地鳖肽预处理均能显著缓解H2O2导致的增殖调控基因表达降低.【结论】地鳖肽能显著提高SCs增殖调控因子的转录水平,改善H2O2刺激对SCs增殖的抑制作用.     

罗汉果皂甙清除自由基及抗脂质过氧化作用的研究

 【目的】研究罗汉果皂甙提取物及罗汉果皂甙V的体外抗氧化活性。【方法】采用D-脱氧核糖法、抗超氧阴离子试剂盒法及比色法分析罗汉果皂甙清除自由基及抗脂质过氧化的效果。【结果】 （1）罗汉果皂甙提取物（MG）均能有效地清除自由基，可抑制大鼠肝组织的脂质过氧化，对Fe2+和H2O2诱导的肝组织过氧化损伤具有保护作用，能减少红细胞溶血的发生。（2）罗汉果皂甙V清除羟基自由基的效果与MG相当，但对O2--的清除作用优于MG。【结论】罗汉果皂甙提取物具有抗氧化活性，罗汉果皂甙V是提取物中主要的抗氧化活性成分。     

CO2和O3浓度升高对春小麦活性氧代谢及抗氧化酶活性的影响

 【目的】揭示CO2和O3浓度升高及其复合作用对植物活性氧（ROS）代谢及抗氧化酶活性的影响机理。【方法】以春小麦（Triticum aestivum L.）为试材，利用开顶式气室（OTCs）研究CO2和O3浓度升高及其复合作用下，春小麦叶片膜脂过氧化程度，活性氧产生速率、含量及抗氧化酶活性的变化。【结果】在整个生育期内，与对照相比，高浓度CO2[（550±20）μmol?mol-1]处理下，春小麦叶片相对电导率、MDA含量减小， 产生速率、H2O2含量下降，SOD、CAT、POD和APX活性增强;而在O3浓度为（80±10）nmol?mol-1的条件下，春小麦叶片相对电导率、MDA含量增大， 产生速率、H2O2含量升高，SOD、CAT、POD和APX活性总体上有所减弱;CO2和O3浓度升高复合[（550±20）μmol?mol-1+（80±10）nmol?mol-1]处理下，春小麦叶片MDA含量、 产生速率和SOD活性总体上低于对照，而相对电导率、H2O2含量以及CAT、POD和APX活性总体上增加。【结论】CO2浓度升高抑制了春小麦叶片活性氧的代谢速率，提高了抗氧化酶的活性，对春小麦表现为保护效应，而O3浓度升高促进了春小麦叶片活性氧的代谢速率，降低了抗氧化酶的活性，对春小麦表现为伤害效应。在CO2和O3浓度升高复合处理下，CO2浓度升高在一定程度上缓解了O3浓度升高对春小麦的伤害效应，而O3浓度升高亦在一定程度上削弱了CO2浓度升高对春小麦的保护效应。     

野生毛葡萄“花溪 4”试管苗对PEG胁迫的形态及生理响应

【目的】研究毛葡萄“花溪-4”试管苗在聚乙二醇（PEG）胁迫下的形态和生理响应,为毛葡萄苗期抗旱性鉴定提供依据。【方法】以毛葡萄单株“花溪-4”试管苗为试材,通过在培养基中加入不同质量浓度（0,30,60,90 g/L）PEG-6000模拟干旱胁迫,研究“花溪-4”外观形态、保护酶系统、过氧化氢（H₂O₂）和丙二醛（MDA）含量的变化。【结果】不同质量浓度PEG胁迫对“花溪-4”试管苗生长的抑制程度不同,其质量浓度越大、胁迫时间越长,旱害越严重,对“花溪-4”试管苗生长的抑制效果越明显。随着PEG质量浓度的升高和胁迫时间的延长,“花溪-4”叶片中的MDA和H₂O₂含量均逐渐上升,超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性则呈先上升后下降的变化趋势,且各生理指标峰值的出现时间与PEG质量浓度的高低相关,其质量浓度越高,峰值出现越早。MDA和H₂O₂含量与旱害指数（DI）呈极显著正相关,POD与DI呈极显著负相关,而SOD、CAT与DI相关性不显著。【结论】PEG胁迫会诱导“花溪-4”试管苗叶片内的H₂O₂含量上升,膜脂过氧化加重,而POD在试管苗活性氧清除中起主要作用;随PEG胁迫程度的加剧和胁迫时间的延长,“花溪-4”试管苗生长所受到的抑制作用增强。     

汞盐诱导烟草悬浮细胞产生细胞编程死亡

 【目的】阐明氯化汞处理烟草悬浮细胞产生的细胞死亡具有细胞编程死亡（programmed cell death,PCD）的特征和分子机制。【方法】采用形态和生物化学方法观察氯化汞处理细胞后的变化,并采用药理学方法,通过添加抑制剂和抗氧化剂阐明氯化汞引发的信号转导途径。【结果】氯化汞诱导产生的细胞死亡具有PCD特征,包括染色质浓缩、细胞核的TUNEL检测呈阳性和DNA ladder的形成。氯化汞诱导烟草悬浮细胞过氧化氢积累,过氧化氢酶和抗坏血酸等抗氧化剂能降低细胞死亡率。蛋白激酶抑制剂、磷脂酶C和磷脂酶D的抑制剂能显著地降低氯化汞引起的细胞死亡和过氧化氢积累。【结论】氯化汞引起的细胞死亡是一种PCD,蛋白激酶和磷脂信号介导的过氧化氢积累参与细胞死亡过程。     

磷脂酰肌醇3-磷酸对UV-B诱导蚕豆保卫细胞中过氧化氢产生和气孔关闭的影响

【目的】研究磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）催化产物磷脂酰肌醇3-磷酸（PI3P）对紫外线B（UV-B）诱导保卫细胞中过氧化氢（H2O2）产生和气孔关闭的影响,为进一步阐明植物细胞转导UV-B辐射信号的机制提供依据。【方法】以蚕豆（Vicia faba L.）表皮条为材料,采用PI3K的抑制剂沃曼青霉素（WM）和LY294002（LY）来抑制PI3P的形成,采用二苯基碘（DPI）和水杨基氧肟酸（SHAM）分别抑制H2O2形成的NADPH氧化酶途径和细胞壁过氧化物酶途径,通过气孔开度分析和激光扫描共聚焦显微镜技术,确定PI3P在0.8 W•m-2 UV-B辐射诱导蚕豆保卫细胞H2O2产生和气孔关闭中的作用。【结果】WM和LY能显著抑制UV-B诱导的保卫细胞H2O2产生和气孔关闭;外源H2O2处理能显著逆转WM和LY对UV-B诱导气孔关闭的抑制效应,但WM和LY不能抑制外源H2O2诱导的气孔关闭;UV-B诱导的保卫细胞H2O2产生和气孔关闭能被活性氧清除剂和SHAM显著抑制,但不能被DPI抑制。【结论】PI3P通过诱导蚕豆保卫细胞中产生于过氧化物酶途径的H2O2形成来介导UV-B辐射诱导的气孔关闭。     

外源乙醛对中熟和晚熟桃果实采后活性氧代谢的影响

 【目的】研究外源乙醛处理对桃果实采后活性氧代谢的影响。【方法】以中熟品种‘久保’和晚熟品种‘绿化9号’桃为试材,用0、0.25、0.50 和 1.00 ml?L-1 乙醛处理果实 12 h ,研究桃果实在（20±1）℃与(0±1)℃贮藏期间活性氧代谢的变化。【结果】在2种贮藏温度下,1.00 ml?L-1乙醛处理提高了桃果实超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）的活性,降低了超氧负离子游离基（ ）生成速率和过氧化氢（H2O2）含量;0.50 ml?L-1处理在室温下降低了 生成速率和H2O2含量,提高了SOD和POD的活性,但对CAT活性的影响不显著,在0℃下,0.50 ml?L-1处理效果不明显;0.25 ml?L-1处理在2种贮藏温度下效果均不明显。在货架期间,不同处理间这些变化的差异不明显。【结论】在2种贮藏温度下,适当浓度的外源乙醛处理可有效延缓桃果实活性氧代谢。     

外源H2O2处理对马铃薯块茎干腐病的控制及其机理

【目的】研究外源过氧化氢（H2O2）处理对采后马铃薯块茎干腐病的控制效果及作用机理。【方法】在离体条件下通过扫描电镜、透射电镜等方法观察分析外源H2O2对马铃薯干腐病菌(Fusarium sulphureum)生长、菌落形态及其超微结构的影响,并以陇薯3号马铃薯为试材,分别在处理前后接种F. sulphureum,研究外源H2O2对病害的治愈和预防作用。【结果】外源H2O2处理强烈抑制了F. sulphureum的菌丝生长和孢子萌发且表现出明显的浓度效应,显著增大了F. sulphureum的细胞膜透性;扫描电镜观察发现H2O2处理过的F. sulphureum菌落分布不均匀,菌丝缠绕、扭曲在一起,部分菌丝出现断裂、塌陷等现象;透射电镜进一步观察到H2O2处理过的菌丝细胞壁加厚且内部出现空腔。体内试验结果表明,外源H2O2处理对处理前后接种F. sulphureum的马铃薯块茎干腐病均具有一定控制作用。【结论】H2O2不仅对病原物具有直接的抑制作用,还能有效提高马铃薯块茎组织的抗病性,因此H2O2可以作为一种具有潜力的天然防腐剂应用于马铃薯采后病害的控制。     

茉莉酸甲酯诱导的采后香蕉果实耐冷性与活性氧信号的关系

 【目的】探讨茉莉酸甲酯（MeJA）对采后香蕉果实耐冷诱导的效果及其对活性氧代谢、Ca2+-ATPase活性的影响。【方法】香蕉果皮用10 µmol•L-1 MeJA处理1 min，在20℃恒温培养1 d（取样作第0天），然后置于7℃下离体培养10 d，测定果皮冷害指数、细胞膜透性、过氧化氢和超氧阴离子含量、过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）、NADPH氧化酶以及Ca2+-ATPase活性的变化。【结果】与对照香蕉果皮相比，10 µmol•L-1 MeJA处理的冷害指数较低、细胞膜透性增加缓慢；MeJA处理诱导了果皮H2O2含量和 产生速率的提高，并维持了前4 d的高水平，而MeJA处理降低了CAT和APX的活性，并在前4 d维持了较低的水平；研究还发现，MeJA处理还诱导了NADPH氧化酶和Ca2+-ATPase活性的升高。【结论】MeJA诱导的活性氧猝发可能作为信号分子参与诱导了香蕉果皮冷害和耐冷诱导，并可能与钙信号相关。     

外源褪黑素对牛卵母细胞体外成熟的影响

 【目的】探索外源褪黑素（melatonin，MT）处理对牛卵母细胞体外成熟的影响从而优化牛体外胚胎生产体系。【方法】在牛卵母细胞成熟过程中添加不同浓度的MT，观察并统计其体外受精后胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数。应用放射免疫分析法检测血清、卵泡液和成熟培养液内MT与孕酮（P）、雌激素（E2)、促卵泡素（FSH）、促黄体生成素（LH）水平的变化并检测卵母细胞的活力和活性氧（ROS）的浓度。【结果】存在于牛卵泡液中的MT浓度与血清中的相近，添加10-11 mol•L-1 MT组的P浓度（2.01±0.33）ng•mL-1显著高于对照组（（0.87±0.10）ng•mL-1，P＜0.05）。与对照组（（67.32±7.30）%）相比，10-9 mol•L-1 MT组卵裂率显著提高（（77.81±7.06）%，P＜0.05），并能提高囊胚率且囊胚细胞数（（29.61±9.55）%，（90.30±28.74）个），显著高于对照组（（19.64±9.22）%，（75.07±25.98）个，P＜0.05）；同时，10-9 mol•L-1 MT组卵母细胞的活力高于对照组，并能降低卵母细胞内的ROS含量但没有显著差异（P＞0.05）。【结论】牛卵泡液中存在MT，适当浓度的外源MT能促进牛卵母细胞体外成熟。