2种微藻间的化感作用

[目的]研究球等鞭金藻和纤细角毛藻间的化感作用。[方法]利用交叉培养和添加胞外滤液萃取物2种方法,确定2种微藻间的化感作用。最后,通过气相色谱测定两种微藻细胞及胞外滤液萃取物中脂肪酸的组成。[结果]球等鞭金藻滤液对纤细角毛藻的生长有显著的促进作用,仅当滤液浓度为100%时表现抑制作用。纤细角毛藻滤液对球等鞭金藻的生长有显著的抑制作用,滤液浓度越高,抑制作用越强。球等鞭金藻(或纤细角毛藻)胞外滤液萃取物对纤细角毛藻(或球等鞭金藻)生长的影响近似于其胞外滤液对纤细角毛藻(或球等鞭金藻)生长的影响,这暗示着2种微藻培养液中的化感物质可以用有机溶剂进行提取。[结论]通过气相色谱分析,笔者认为球等鞭金藻对纤细角毛藻的化感作用主要由饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的混合物共同作用引起;而纤细角毛藻对球等鞭金藻的化感作用主要由饱和脂肪酸引起。     

温度及光照对4种饵料微藻生长的影响

微藻是许多贝类、海参、虾类等经济动物苗种生产、幼体培育的重要饵料生物,其生长速度和营养成分组成对育苗的效率和质量都有重要影响。由于在苗种大规模人工繁育过程中控制水体盐度、生化组成以及病害防治等成本过高,同时为了减少水产兽药使用对苗种产生的不必要影响,本文采用试验与生产相结合的方法,主要研究了温度和光照强度等因素对威氏海链藻9021(Thalassiosira weissflogii)、牟氏角毛藻(Chaetoceros muelleri)、湛江叉鞭金藻(Dicrateria zhanjiangensis)和亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis)4种常用饵料微藻大规模生产培养的影响。温度试验结果表明:牟氏角毛藻和亚心形扁藻的适宜生长温度为26~29 ℃,此温度下比生长率最大,μ_{牟氏角毛藻}为0.565,μ_{亚心形扁藻}为0.358;湛江叉鞭金藻的适宜温度为29~32 ℃,此温度下μ_{湛江叉鞭金藻}为0.533;威氏海链藻9021的适宜温度为23~26 ℃,此温度下μ_{威氏海链藻9021}为0.278。光照强度试验结果表明:晴天条件下牟氏角毛藻、湛江叉鞭金藻和亚心形扁藻的生长均优于阴天,而威氏海链藻9021在阴天条件下的生长要快于晴天。温度和光照强度对湛江叉鞭金藻、威氏海链藻9021的双因子影响分析表明:不同水体温度以及光照强度对湛江叉鞭金藻和威氏海链藻9021的生长有显著性差异,共同影响着微藻的比生长速率和最大生物量,因此,实际生产培养中不能单看比生长率来判断一个藻种的适宜培养条件。本研究确定了4种常用微藻生产性培养的适宜环境条件,为不同季节气候条件下选择适合培养的饵料微藻种类提供参考,有助于水生生物养殖生产过程中幼虫培育存活率、苗种产量的提高。     

利球等鞭金藻生长抑制物的抑藻机理

    通过球等鞭金藻生长抑制物(1-羟基,丙二酸二乙酯-十二烯酸异丙酯)对6种海洋微藻(牟氏角毛藻、纤细角毛藻、三角褐指藻、新月菱形藻、扁藻和盐藻)的生长及细胞内主要生化成分的影响,对该抑藻物质的抑藻机理进行探讨.结果表明,该生长抑制物对6种微藻生长不仅具有明显的抑制作用,而且对微藻细胞内的一些主要生化成分有显著的影响.在该抑制物作用下,6种微藻细胞内的叶绿素含量显著降低,丙二醛含量以及胞外可溶性蛋白质和多糖含量明显提高,硝酸还原酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性也有不同程度的升高或降低.可见,球等鞭金藻生长抑制物是通过对微藻细胞内的某些主要生化成分的合成过程及其活性的调控,实现对微藻藻细胞的生长控制.     

几种生态因子对偏顶蛤浮游幼虫生长和发育的影响

为了解偏顶蛤Modiolus modiolus最适培育条件,采用实验生态学方法研究了海水盐度、 pH和饵料对偏顶蛤浮游幼虫生长和发育的影响。结果表明：3种生态因子对偏顶蛤浮游幼虫的生长发育均有显著影响(P<0·05);幼虫生长发育的适宜盐度为25~35,最适盐度为30,但幼虫对高盐度的耐受力比对低盐度的耐受力强;幼虫生长发育的适宜pH为6~9,最适pH为8;饵料试验中,湛江等鞭金藻Isochrysis zhan：jiangensis、新月菱形藻Nitzschia closterium和牟氏角毛藻Chaetoceros muelleri Lemmerman 3种饵料混合投喂的效果最好,牟氏角毛藻单独投喂以及牟氏角毛藻与新月菱形藻混合投喂的效果最差,湛江等鞭金藻基本上能够满足偏顶蛤早期浮游幼虫生长发育的营养需求,单一投喂湛江等鞭金藻和新月菱形藻组与投喂含金藻的混合饵料组对幼虫的饲喂效果无显著性差异(P>0·05)。     

7种试剂对3种饵料微藻絮凝效应的研究

[目的]探讨絮凝剂对牟氏角毛藻、微绿球藻、湛江等鞭金藻3种海洋饵料微藻的絮凝效应。[方法]采用5种无机试剂和2种有机试剂分别以6种不同的浓度处理藻液,连续4h跟踪测定藻细胞的沉淀情况。[结果]5种无机试剂对3种海洋饵料微藻均有一定的絮凝作用,而2种有机试剂的絮凝效果均不明显。硫酸锌和硫酸铝对牟氏角毛藻的絮凝效果明显;明矾、硫酸锌和聚合氯化铝对微绿球藻的絮凝效果明显;硫酸铝对湛江等鞭金藻的絮凝效果较明显。[结论]为生产性海洋饵料微藻的采收提供理论依据。     

海水养殖废水混合培养牟氏角毛藻和盐藻研究

以f/2培养基为对照,探讨海水养殖废水对牟氏角毛藻和盐藻纯种培养和混合培养的可行性,研究培养过程中3种处理下藻生长和叶绿素累积情况,测定培养后水样中总氮、总磷含量的变化以及藻体中累积的蛋白质和多糖含量。结果表明,牟氏角毛藻和盐藻纯种培养和混合培养3种处理在f/2和海水养殖废水中能正常生长,说明利用海水养殖废水培养纯种和混合藻是可行的,培养过程中混合培养藻的生长情况均低于纯种培养,纯种培养和混合培养中牟氏角毛藻的生长情况均优于盐藻生长,叶绿素累积情况同生长情况一致,培养后各处理水体中总氮和总磷显著下降,混合培养更有利于蛋白质和多糖的累积。     

2种抗生素对球等鞭金藻的毒理学研究

利用恩诺沙星和盐酸环丙沙星2种抗生素在不同浓度下对球等鞭金藻进行毒理研究。分别对球等鞭金藻的96EC50、叶绿素和过氧化酶活性进行分析。结果表明,2种抗生素对球等鞭金藻的毒理危害等级分别为高毒和中毒。恩诺沙星浓度对叶绿素和过氧化氢酶活性的抑制影响不大,而盐酸环丙沙星浓度在0～10 mg.L-1范围内对叶绿素和过氧化氢酶活性抑制效果明显,当浓度>10 mg.L-1后抑制效果稳定。     

织锦巴非蛤幼虫对不同种类单胞藻的摄食和消化效果

【目的】明确织锦巴非蛤幼虫在不同发育时期饲喂单胞藻饵料的合适种类,为织锦巴非蛤的苗种规模化人工繁育提供饵料投喂策略及参考依据。【方法】以从广西北海市铁山港区自然海域捕捞的织锦巴非蛤2龄贝为亲本,人工培育D形幼虫,在幼虫培育期间分别投喂小球藻、微绿球藻、杜氏盐藻、亚心形扁藻、湛江等鞭金藻、球等鞭金藻、绿色巴夫藻、牟氏角毛藻和三角褐指藻,显微镜下观察幼虫在不同时期对不同种类单胞藻的摄食情况和消化效果。【结果】织锦巴非蛤初孵幼虫（D形幼虫）大小（壳长×壳高）为（82.49±3.02）μm×（63.98±2.16）μm,于4 dph（孵化后第4 d）发育至壳顶前期（115.89±3.86）μm×（101.62±3.80）μm,13 dph进入变态期（205.61±15.84）μm×（182.61±13.53）μm,于15 dph变态至稚贝（225.63±8.99）μm×（198.65±8.25）μm。织锦巴非蛤幼虫在运动过程中也伴随着摄食,通过纤毛的摆动形成水流,单胞藻则随着水流方向进入幼虫口沟,在口沟纤毛摆动下进入胃内,胃内的单胞藻在微绒毛摆动下快速旋转并消化。织锦巴非蛤幼虫在1 dph时能摄食小球藻、微绿球藻、绿色巴夫藻、湛江等鞭金藻和球等鞭金藻,在4 dph时有少量幼虫开始摄食杜氏盐藻,至10 dph时幼虫开始摄食亚心形扁藻和牟氏角毛藻,整个浮游幼虫期均不摄食三角褐指藻。在9种单胞藻饵料中,小球藻和微绿球藻较其他种类更难消化。【结论】在织锦巴非蛤幼虫培育过程中,幼虫开口饵料宜选择湛江等鞭金藻、球等鞭金藻和绿色巴夫藻,在10 dph时适宜投喂杜氏盐藻,至13 dph时可投喂牟氏角毛藻和亚心形扁藻;在其他易被摄食和消化单胞藻种类充足的情况下,一般不选取小球藻和微绿球藻作为幼虫培育的首选饵料。     

假微型海链藻的培养及应用效果研究

介绍了宁波大学微藻研究室将假微型海链藻9005、9006这2种微藻在育苗室和土池培养的情况,阴雨天海链藻培养要比等鞭金藻、角毛藻、亚心型扁藻更快,在稚贝培养中海链藻的投喂效果与角毛藻相近。     

浒苔与球等鞭金藻相互抑制的实验验证

研究了实验室条件下漂浮绿潮海藻浒苔(Ulva prolifera)与微藻球等鞭金藻(Isochrysis galbana)之间的相互抑制作用,并对作用机制进行了初步探讨。结果表明,在浒苔和球等鞭金藻初接种量分别为1 gFW/L和1×104 cells/mL的共培养系统中,实验初始阶段(前3 d)NO3-、PO43-浓度显著高于浒苔和球等鞭金藻各单培养组,说明共培养系统中浒苔和球等鞭金藻彼此之间产生了显著抑制作用,其中浒苔对球等鞭金藻抑制率为96.62%,球等鞭金藻对浒苔的抑制率为19.67%,从而导致对NO3-、PO43-吸收速率的降低;从第4天到实验结束,共培养体系中NO3-、PO43-浓度逐渐升高,镜检也显示浒苔和球等鞭金藻细胞发生了断裂、肿胀和死亡现象,而单培养组中NO3-、PO43-浓度持续下降,说明共培养系统中由于浒苔和球等鞭金藻的死亡而向培养液中释放了营养盐。本研究表明在营养盐浓度和浒苔生物量相对较低的情况下,浒苔和球等鞭金藻彼此之间存在化感作用。     

植物生长调节物质对饵料微藻蛋白质和氨基酸的影响

在三角褐指藻、牟氏角毛藻、湛江等鞭藻的f／2培养液中分别添加植物生长调节物质三十烷醇(TA)、6-糠基腺嘌呤(6-FA)和生长素(2，4-D)，在指数生长后期采收微藻，测定三种微藻的蛋白质和氨基酸含量。结果表明，分别添加0．1μg/LTA、0．05μg/L6-FA、0．05μg/L2，4-D能够极显著提高三角褐指藻的蛋白质及必需氨基酸的含量，分别添加0．1μg/LTA、0．25μg／L6-FA、0．05μg/L2，4-D能够显著或极显著提高牟氏角毛藻的蛋白质及必需氨基酸的含量，而三种植物生长调节物质使湛江等鞭藻的蛋白质及必需氨基酸的含量显著减少。     

植物生长调节物质对饵料微藻蛋白质和氨基酸的影响

在三角褐指藻、牟氏角毛藻、湛江等鞭藻的f／2培养液中分别添加植物生长调节物质三十烷醇(TA)、6-糠基腺嘌呤(6-FA)和生长素(2，4-D)，在指数生长后期采收微藻，测定三种微藻的蛋白质和氨基酸含量。结果表明，分别添加0．1μg/LTA、0．05μg/L6-FA、0．05μg/L2，4-D能够极显著提高三角褐指藻的蛋白质及必需氨基酸的含量，分别添加0．1μg/LTA、0．25μg／L6-FA、0．05μg/L2，4-D能够显著或极显著提高牟氏角毛藻的蛋白质及必需氨基酸的含量，而三种植物生长调节物质使湛江等鞭藻的蛋白质及必需氨基酸的含量显著减少。     

不同碳源对球等鞭金藻生长和细胞组成的影响

本文研究了批次培养模式下培养基中分别添加0.018 mol/L不同碳源(Na HCO_3,C6H12O6,CH_3COONa和CH_3CH_2COONa)对球等鞭金藻(Isochrysis galbana)生长、色素含量、蛋白质含量和脂肪酸组成的影响。结果表明:在盐度26,温度25℃,光照3000 lux条件下,f/2培养液中添加不同碳源对球等鞭金藻的生长和细胞组成有显著影响。不同碳源对球等鞭金藻促生长效果依次为:葡萄糖碳酸氢钠空白对照丙酸钠乙酸钠。培养液中添加各种碳源均不同程度上降低了球等鞭金藻细胞蛋白质含量。添加碳酸氢钠、乙酸钠和丙酸钠组藻叶绿素a和类胡萝卜素含量均显著降低,而添加葡萄糖组藻细胞中两种色素含量显著增加。添加碳源改变了球等鞭金藻细胞脂肪酸组成,单不饱和脂肪酸(MUFA)含量均显著增加,而多不饱和脂肪酸(PUFA)均显著降低。上述研究表明葡萄糖是促进球等鞭金藻生长的高效碳源,培养液中添加葡萄糖是球等鞭金藻高密度培养的有效策略。     

聚六亚甲基双胍对凡纳滨对虾不同生长阶段及饵料藻类的安全性研究

采用药浴方式,研究了一种新型消毒剂--聚六亚甲基双胍对凡纳滨对虾受精卵、无节幼体、幼虾、成虾的毒性及饵料藻类的影响.结果表明,聚六亚甲基双胍对凡纳滨对虾幼虾24、48 h的LC50为64.1 mg·L-1和31.13 mg·L-1,安全浓度Sc为2.20 mg·L-1:聚六亚甲基双胍对凡纳滨对虾成虾24、48 h的LC50为66.17 nag·L-1和32.16 mg·L-1安全浓度sc为2.28 mg·L-1,为了保证凡纳滨对虾的安全性,聚六亚甲基双胍的用量应控制在0.5 mg·L-1之内;聚六亚甲基双胍在125 mg·L-1浓度内对受精卵的孵化率无明显影响,0.5 mg·L-1浓度以内对无节幼体的变态率无明显影响.聚六亚甲基双胍对球等鞭金藻和亚心形扁藻表现出了明显的剂量-效应关系,其对球等鞭金藻和亚心形扁藻的生长不产生抑制的最高浓度为5 mg·L-1;聚六亚甲基双胍对球等鞭金藻48、96、144 h的ECho为27.01、34.95 mg·L-1和33.14mg·L-1亚心形扁藻为34.65、28.73 mg·L-1和20.57 mg·L-1,聚六亚甲基双胍对两种藻类的安全浓度分别3.5 mg·L-1和2.9 mg·L-1,表明聚六亚甲基双胍对亚心形扁藻的影响更明显.     

海胆人工养殖技术（一）

二、海胆的苗种生产 在我国开发规模化海胆人工育苗与养殖只有十几年的历史，因此，国内很少建有专门的海胆育苗室。由于海胆浮游幼体阶段所使用的设备及其培育方法与海参基本相同，而匍匐变态之后稚海胆阶段所使用的设施与培育方法则与稚鲍有很多相似之处，所以可利用现有的海参或贝类的育苗系统进行苗种生产。海胆幼体的饵料培育包括浮游单胞藻和底栖硅藻，海胆浮游幼体阶段的饵料有牟氏角毛藻、纤细角毛藻、角刺藻等。     

植物源丙氨酸对球等鞭金藻生长的影响研究

本文研究主要探索植物中的丙氨酸对球等鞭金藻生长的影响实验,为了对比实验研究成果,本文拟对卤地菊中两种氨基酸对球等鞭金藻生成的影响进行对比分析,从而确定陆地植物浸提液对球等鞭金藻生长的权重影响。研究结果表明,卤地菊水浸提液对球等鞭金藻的生长具有显著的促进作用;卤地菊中丙氨酸对球等鞭金藻具有显著的促进作用。通过进一步计算可知,在本文实验条件下,丙氨酸对球等鞭金藻促进的最佳浓度为0.20g/L,其在卤地菊水浸提液中的最大权重系数为15.17%;甘氨酸低浓度时具有促进作用,高浓度呈现出抑制作用,较高浓度时在1~5d有促进作用,从第5天开始甘氨酸对球等鞭金藻的生长具有不同程度的抑制作用,呈现"低促高抑"的特点。本研究结果可以为控制水域污染和海产品养殖提供实验基础。     

不同饵料搭配对凡纳滨对虾幼体与仔虾的影响

采用牟氏角毛藻(CM)、绿色巴夫藻(PV)、湛江叉鞭金藻(DG)、云微藻(Cs)及其营养强化的轮虫(BP)和蒙古裸腹溞(MM),与配合饲料(FD)、卤虫无节幼体(AS)搭配饲养凡纳滨对虾幼体,测定饵料脂肪酸含量,比较幼体存活率(r)与发育速率,研究了不同饵料搭配对幼体与仔虾发育的影响。结果表明:Z1→Z2,投喂CM、DG、PV的r最高,约90%;Z2→Z3,投喂FD、CM+FD、CM+BPCM的r最高,PV+BPPV的r最低,变态延缓1 d;Z3→P,CM+BPCM、PV+BPPV、CM+FD为饵料的r好于其它组;仔虾阶段,FD+AS为饵料的r最低,为45.3%,其余组均大于90%。结合饵料脂肪酸含量可知,强化MM体内脂肪酸组成和含量与藻类趋于一致,受食物的影响大于BP;可用CM、PV、DG为开口饵料(延续至P),并与BPCM或BPCs、AS、MMPV搭配用于凡纳滨对虾虾苗生产。     

浒苔与球等鞭金藻相互抑制的实验验证

研究了实验室条件下漂浮绿潮海藻浒苔（Ulva prolifera ）与微藻球等鞭金藻（Isochrysis galbana）之间的相互抑制作用,并对作用机制进行了初步探讨。结果表明,在浒苔和球等鞭金藻初接种量分别为1 gFW/L和1×10⁴ cells/mL的共培养系统中,实验初始阶段（前3 d）NO₃^-、PO₄^3-浓度显著高于浒苔和球等鞭金藻各单培养组,说明共培养系统中浒苔和球等鞭金藻彼此之间产生了显著抑制作用,其中浒苔对球等鞭金藻抑制率为96.62%,球等鞭金藻对浒苔的抑制率为19.67%,从而导致对NO₃^-、PO₄^3-吸收速率的降低;从第4天到实验结束,共培养体系中NO₃^-、PO₄^3-浓度逐渐升高,镜检也显示浒苔和球等鞭金藻细胞发生了断裂、肿胀和死亡现象,而单培养组中NO₃^-、PO₄^3-浓度持续下降,说明共培养系统中由于浒苔和球等鞭金藻的死亡而向培养液中释放了营养盐。本研究表明在营养盐浓度和浒苔生物量相对较低的情况下,浒苔和球等鞭金藻彼此之间存在化感作用。     

球等鞭金藻OA-3011积累脂肪酸的条件研究

以球等鞭金藻OA-3011培养液的细胞密度和脂肪酸含量为评价指标,利用均匀设计确定了硝酸钠和磷酸二氢钾的用量;选择影响球等鞭金藻积累脂肪酸的4个因素进行3水平的正交试验,确定其积累脂肪酸的最优条件。结果表明,海水培养基中硝酸钠的适宜浓度为75 mg/L,磷酸二氢钾的适宜浓度为8 mg/L;球等鞭金藻OA-3011的最佳培养条件为：盐度30‰,pH值7.5,接种量90×104个/ml,培养温度25℃,此条件下培养液中脂肪酸含量可达48 mg/L。     

两种等鞭金藻外部形态与超微结构的观察比较

用扫描电镜和透射电镜观察了湛江等鞭金藻Isochrysis zhanjiangensis sp．nov和球等鞭金藻I.galbana的外部形态和内部结构,并对两者的形态构造进行了比较。电镜观察结果表明：湛江等鞭金藻个体比球等鞭金藻个体略大,两者均有两条几乎等长的鞭毛,光滑且无附着物和鞭毛膨胀体,但湛江等鞭金藻的鞭毛与藻体长比大于球等鞭金藻;湛江等鞭金藻藻体表面覆盖2～4层鳞片,鳞片有两种类型,而球等鞭金藻藻体表面仅有一些小的圆形颗粒状突起,无鳞片覆盖;湛江等鞭金藻有1个色素体,位于细胞中后部,纵切面可见色素体呈“杯形”,球等鞭金藻有2个色素体,位于细胞两侧,少数色素体中有数个中等电子密度的嗜锇颗粒。两者色素体中有蛋白核,常被1至多条类囊体穿过;细胞核位于细胞中部;白糖素核1～2个,位于细胞中前部;细胞内都有线粒体和高尔基体。在两种金藻的高尔基复合体层叠状潴泡末端附近,均可以观察到有许多球形类似被膜泡囊的结构。