高山红景天RAPD反应体系的优化研究

[目的]筛选适合高山红景天的RAPD-PCR反应体系。[方法]以药用植物高山红景天雌株的叶片为材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA,并对影响RAPD扩增反应的各因素进行优化。[结果]结果表明,适合高山红景天的RAPD反应体系为:25μl总体积中含DNA模板20 ng,Mg2+1.5 mmol/L,引物10 pmol,dNTP 100μmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U。[结论]CTAB法在高山红景天可获得质量较好的基因组DNA。     

甘草RAPD-PCR反应体系正交优化研究

[目的]建立一套适合甘草分子学研究的RAPD-PCR反应体系。[方法]以甘草种质为试材,采用正交试验法设计,对影响RAPD-PCR扩增的主要因素dNTPs、引物、Taq酶和DNA模板进行优化筛选。[结果]总体积25μl的甘草RAPD-PCR最佳反应体系为：10×PCR缓冲液（含MgCl2）2.5μl,10 mmol/L dNTPs 2.5μl,50 ng DNA 2.0μl,10μmol/L引物2.0μl,5 U/μl Taq酶0.4μl。对引物的退火温度进行了梯度筛选,34℃时扩增效果较好。[结论]进行甘草RAPD-PCR反应体系的正交优化非常有效。     

栝楼的RAPD-PCR体系建立与优化

[目的]建立栝楼的RAPD-PCR体系并对该体系进行优化。[方法]以栝楼叶片为材料,采用CTAB法提取栝楼叶片基因组DNA,利用正交设计对RAPD-PCR体系进行优化。[结果]各因素水平变化对PCR反应影响大小依次为：Mg2＋、TaqDNA聚合酶、引物和dNTPs。通过试验分析,优化的栝楼RAPD反应体系为：在25μl反应体系中,含10×buffer2.5μl,Mg2＋2.0mmol/L,Taq酶1U,引物0.8μmol/L,dNTPs0.1mmol/L。反应程序为94℃预变性2mim;94℃变性30s,37℃退火温度40s,72℃延伸1.5mim,36次循环;72℃延伸10mim,4℃保存。[结论]该研究建立的栝楼RAPD反应体系稳定可靠,为栝楼性别鉴定、遗传多样性分析、亲缘关系分析等方面的研究提供了有效的方法。     

亚洲百合DNA的提取及RAPD-PCR反应体系的优化

为了促进亚洲百合分子水平的研究,以亚洲百合幼嫩叶片为材料,采用改良CTAB法提取亚洲百合基因组DNA,得到的DNA质量较高,适合于RAPD-PCR分析。通过单因素优化得到在25μl反应体系中,亚洲百合RAPD分析的最佳反应体系:160μmol/LdNTPs,0.3μmol/L随机引物,TaqDNA聚合酶1.5U,Mg2 浓度2.0mmol/L。     

卷丹百合RAPD-PCR反应体系的单因素逐项优化研究

[目的]探索建立卷丹百合RAPD-PCR反应的最适体系。[方法]用CTAB法提取卷丹百合的基因组DNA,通过采用单因素逐项优化的方法,对影响卷丹百合RAPD-PCR扩增的反应组分浓度进行优化。[结果]反应结果显示RAPD对模板的适应性很大;体系中Mg2+在1.5~3.0μl都能产生较清晰的RAPD带;dNTP较适合的浓度范围为0.4~1.6μl;引物较适合的浓度范围为1.5~3.0μl;体系中TaqDNA聚合酶在0.1~0.8μl的浓度范围内均有良好的扩增效果。根据上述结果,卷丹百合RAPD-PCR反应最适的反应体系为:20μl的反应体系中含基因组DNA 2.0μl,Mg2+2.0μl,dNTP 1.2μl,引物2.0μl,TaqDNA聚合酶0.2μl。[结论]该研究为在分子水平研究百合种质资源的分类及亲缘关系奠定了基础。     

荷包猪RAPD-PCR反应条件研究

[目的]建立适合荷包猪RAPD-PCR反应的最佳反应体系。[方法]以荷包猪为试验材料,以MgCl2浓度、引物浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量及退火温度为影响因子,在保持其他影响因子一致的条件下,变化单一因子,筛选最优参数,研究各影响因子对RAPD-PCR反应的影响。[结果]最佳反应体系的总体积为20.0μl,MgCl2浓度为2.5μmol/L、引物浓度2.0μmol/L、dNTP浓度400.0μmol/L、模板DNA为100 ng/μl、TaqDNA聚合酶为1.0 U。PCR反应程序:94℃预变性2 min(94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min,循环40次),72℃延伸5 min。此反应体系所扩增出来的结果比较稳定,带型清晰且亮度适中。[结论]该研究为应用RAPD技术对荷包猪作进一步的遗传分析奠定了基础。     

辣椒RAPD扩增体系的建立

[目的]为辣椒的品种资源鉴定与遗传多样性分析奠定基础。[方法]采用改良的CTAB法对辣椒叶片基因组DNA进行提取,并采用正交试验设计法对辣椒RAPD-PCR反应进行优化筛选。[结果]采用改良的CTAB法获得了高质量的辣椒基因组DNA,用Tris-平衡酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1,V∶V∶V）进行抽提,最后再用氯仿抽提以除去其中含有的酚,避免了对后续PCR扩增的影响。基于一般的RAPD反应程序和调整试验,优化了PCR反应体系。结果表明,在模板20 ng 1.5μl、引物（20μmol/L）1.5μl、dNTPs（2.5 mmol/L）2.2μl、10×Buffer缓冲液（含Mg2＋）2.5μl、Taq（5 U/μl）0.35μl条件下扩增效果较好。[结论]建立了最适的辣椒RAPD扩增体系。     

油茶DNA提取及RAPD分析最佳反应体系的建立

[目的]为建立油茶RAPD分析的最佳反应体系。[方法]分别用改良SDS法和CTAB法从12个油茶品种的新鲜幼叶中提取基因组DNA。通过测定OD260和OD280来比较两种方法提取DNA的纯度。建立油茶的RAPD反应程序,通过优化反应条件获得油茶RAPD分析的最佳反应体系。[结果]CTAB法提取的油茶基因组DNA纯度高于SDS法。油茶RAPD分析的最佳反应体系为:1.0 UTaq DNA聚合酶、1.5 mmol/L MgCl22、00μmol/L dNTP1、0 pmol/L随机引物2、0 ng DNA模板2、μl 10×PCR buffer,加重蒸水至20μl。油茶的RAPD反应程序为:95℃预变性3 min;94℃变性1 min,40℃退火1 min,72℃延伸2 min,40循环;72℃延伸7 min。[结论]该研究所用DNA纯度较高,反应条件控制严格,试验中扩增稳定性较好,是适合油茶RAPD分析的最佳反应体系。     

东北红豆杉RAPD反应体系的优化

[目的]研究东北红豆杉RAPD反应体系的优化条件。[方法]以东北红豆杉叶片为材料,用改进CTAB法提取DNA,分别从模板DNA浓度、引物浓度、dNTP浓度,Taq DNA聚合酶量及镁离子浓度5个方面对东北红豆杉RAPD扩增效果的影响进行分析。[结果]通过各因子的比较分析,建立了东北红豆杉RAPD优化体系：20μl PCR反应总体积中含模板DNA 10 ng,Mg^2＋2.0 mmol/L,引物15pmolμ/l,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U,10×buffer缓冲液2μl,以双蒸水补充至20μl。[结论]为进一步探索与东北红豆杉性别鉴定相关的研究提供技术支持。     

东北红豆杉RAPD反应体系的优化（摘要）（英文）

[目的]研究东北红豆杉RAPD反应体系的优化条件。[方法]以东北红豆杉叶片为材料,用改进CTAB法提取DNA,分别从模板DNA浓度（10、20、30、40、50 ng）、引物浓度（5、10、15、20、25 pmol/μl）、dNTP浓度（0.1、0.15、0.2、0.25、0.3 mmol/L）,TaqDNA聚合酶量（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 U）及镁离子浓度（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmol/L）5个方面对东北红豆杉RAPD扩增效果的影响进行分析。[结果]用改良的CTAB法提取红豆杉基因组DNA,所得DNA质量较好,无杂质存在,条带整齐一致,而且能够取得比较理想的RAPD扩增效果。通过各因子的比较分析,建立了东北红豆杉RAPD优化体系：20μl PCR反应总体积中含模板DNA10 ng,Mg2 ＋2.0 mmol/L,引物15pmol/μl,dNTP0.2 mmol/L,TaqDNA聚合酶1.0 U,10×buffer缓冲液2μl,以双蒸水补充至20μl。[结论]为进一步探索与东北红豆杉性别鉴定相关的研究提供技术支持。     

木豆随机扩增多态性DNA的反应体系研究

[目的]分析影响木豆RAPD-PCR反应中的主要因素,优化反应条件。[方法]以木豆品种ICPL87091为试材,以木豆基因组DNA为模板,通过对PCR反应体系中各种参数的优化设置,分析比较各种因素对RAPD扩增结果的影响,建立适宜的反应体系。[结果]试验得到了较为理想的适宜木豆的反应体系。优化的木豆RAPD反应条件为:模板DNA浓度30 ng,随机引物1.6μmol/L,dNTPs(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)各0.2 mmol/L,Mg2+浓度2.0 mmol/L,Taq酶1.0 U,反应体积为25μl。循环体系为:先94℃1 min,35℃2 min,72℃2 min,5个循环;然后94℃30 s,37℃1 min,72℃1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min。[结论]利用这一反应体系可有效地进行木豆随机扩增多态性DNA分析,极大地提高了实验结果的可重复性。     

辣木RAPD最佳反应体系的构建

[目的]研究辣木（Moringa oleifera Lamarch．）PAPD最佳反应体系，为辣木RAPD扩增提供研究基础。[方法]以辣木为研究材料，通过正交设计建立辣木RAPD最佳反应体系。[结果]辣木最佳RAPD反应体系为：10×PCR Buffer 2．5μl，Taq酶0．5μl（2．0U／μl），dNTPs4．0μl（2．0mmol／L），primer 4．0μl（2．0μmol／L），DNA2．0μl（30．0ng／μl），ddH2O 12．0μl；反应总体积为25．0μl。[结论]RAPD可以应用于辣木研究。     

温郁金ISSR-PCR反应体系的建立及条件优化

[目的]寻找一个可用于温郁金ISSR-PCR的最适宜反应体系。[方法]利用CTAB法提取基因组DNA,同时利用PCR扩增技术和方法,对引物、模板DNA、Mg2+d、NTP、Taq聚合酶等反应条件进行优化。[结果]反应体系的最佳条件是总体积为25μl,其中Mg2+浓度(25mmol/L)2.2μl,Taq聚合酶(5 U/μl)0.4μl,引物浓度(20μmol/L)1.5μl,模板DNA(5 ng/μl)1.5μl,dNTP(2.5 mmol/L)2.2μl,10×PCRbuffer2.5μl;PCR扩增程序为:1个循环的94℃预变性5 min;94℃变性35 s,相对应的引物退火温度退火1 min,72℃复性1.5 min,共36个循环;最后72℃延伸10 min。[结论]该体系是适合温郁金ISSR-PCR反应的最适宜体系,具有省时、经济、简便以及扩增条带清晰而稳定等特点,为今后温郁金遗传多样性的研究奠定了基础。     

甘草RAPD-PCR反应体系正交优化研究(英文)

[目的]建立一套适合甘草分子学研究的RAPD-PCR反应体系。[方法]以甘草种质为试材,采用正交试验法设计,对影响RAPD-PCR扩增的主要因素dNTPs、引物、Taq酶和DNA模板进行优化筛选。[结果]总体积25μl的甘草RAPD-PCR最佳反应体系为:10×PCR缓冲液(含MgCl2)2.5μl,10mmol/LdNTPs2.5μl,50ng DNA2μl,10μmol/L引物2μl,5UTaq酶0.4μl。对引物的退火温度进行了梯度筛选,34℃时扩增效果较好。[结论]进行甘草RAPD-PCR反应体系的正交优化非常有效。     

火棘基因组DNA的提取和RAPD稳定的反应体系的建立

[目的]研究提取火棘基因组DNA的最佳方法，并研究适合火棘的稳定的RAPD反应体系，为以后开展火棘的遗传多样性研究、物种资源研究和亲缘关系鉴定等提供重要的参考。[方法]采用改进的CTAB法，成功地提取了火棘基因组DNA，并对RAPD反应体系中的Taxi酶、MgCl2、dNTPs和引物4个因素进行4因素4水平的正交试验设计，从中筛选出最佳的优化条件。[结果]电泳结果显示，DNA无降解，杂质少。DNA浓度较高约为500ng／μl。并以此DNA为模板，成功地建立了RAPD稳定的反应体系：总体积25山，包括25ng的DNA，1×buffer，2．3mmol／LMgCl2，1．0μmol／L引物，O．15mmol／LdNTPs和2．0U的TaqDNA聚合酶。RAPD扩增程序为：先在94℃下变性4min，然后在94℃下变性40s，36．8℃下复性50s，72℃下延伸70s，反应40个循环，最后72℃延伸4min。[结论]改进的CTAB法能成功地提取火棘基因组DNA，利用正交试验设计所建立的RAPD反应体系，可以获得较为稳定、可靠的扩增产物。该体系可应用于火棘遗传多样性、亲缘关系等方面的研究中，为进一步开展火棘分子生物学研究奠定了基础。