猪水肿病致病性大肠杆菌的分离与血清型鉴定

为确定四川某猪场流行的大肠杆菌病血清型,以便为研制大肠杆菌灭活疫苗提供相对应的菌株,从本场25～40日龄病死仔猪和腹泻仔猪的肝、脾、小肠及粪便与直肠拭子中,分离出48株致病性大肠杆菌,根据血清型鉴定结果,共有9个血清型,其中O138、O139、O141最常见,致病力较强,O139分离率最高,为41.46%,并且自猪源分离到具有致病性的E.coliO157,说明猪体内携带有该菌,可通过食物链传染给人类,这在公共卫生学上具有重要意义,应引起高度重视. 药敏结果表明,所分离大肠杆菌对丁胺卡那霉素、氧氟沙星、培氟沙星、环丙沙星的抑菌作用最强,高敏菌株达75%～96%;氯霉素、新霉素、庆大霉素、恩诺沙星敏感度居中,敏感菌株在50%～60%之间;青霉素、痢特灵、强力霉素、磺胺-5-甲氧嘧啶抑菌作用较低,敏感菌株低于20%.     

奶牛乳腺炎源大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛相关基因的检测及序列分析

【目的】研究奶牛乳腺炎源大肠杆菌中耶尔森菌HPI携带情况及其与O血清型的关系,并对部分菌株的相关基因序列进行分析。【方法】从中国北京、内蒙古、甘肃、四川、重庆、云南、贵州等7个省市部分地区1 260份临床型和隐性奶牛乳腺炎奶样中分离得到190株大肠杆菌,对分离菌株进行耶尔森菌强毒力岛核心区irp2基因、fyuA基因及HPI毒力岛在大肠杆菌染色体中插入位置的鉴定,分析HPI毒力岛的携带情况及其与分离菌株O血清型之间的关系。【结果】190株大肠杆菌分离株中,irp2基因阳性率为26.31%（50/190）,fyuA基因阳性率为18.94%（36/190）。50株HPI+分离株中检出asn_tRNA_intB 基因32株,阳性率为64%（32/50）。本试验克隆的irp2基因(273 bp）、fyuA基因(1 071 bp）、asn_tRNA_intB基因(1 512 bp）均与已发表序列高度同源,同源性分别在97.1%、98.2%、97.2%以上,且其HPI毒力岛大多位于大肠杆菌染色体的asn_tRNA位点上。【结论】耶尔森菌HPI在奶牛乳腺炎源大肠杆菌中广泛流行分布,但也存在差异,而不同血清型菌株携带HPI的倾向性可能只与特定的血清型有一定的关系。     

犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测

采用多重PCR方法检测南京部分地区分离的110株犊牛腹泻大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI).对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因.同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定.在分离的110株犊牛腹泻大肠杆菌中,具有LEE和/或HPI毒力岛的菌株33株,占30%(33/110).LEE毒力岛基因检测结果为9.1%(10/110)的菌株ler和eaeA基因的扩增阳性.HPI毒力岛基因检测结果为25.5%(28/110)的菌株irp2和fyuA基因扩增阳性.0.9%(1/110)的菌株irp2阳性.5.5%(6/110)的菌株irp2、fyuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性.在33个LEE和/或HPI毒力岛阳性分离株中,O78和O36血清型菌株分别占定型菌株的34.6%(9/26)和27%(7/26).9.1%的犊牛腹泻大肠杆菌携带LEE,25.5%的菌株携带耶尔森菌HPI,O78和O36为牛源携带LEE和/或HPI毒力岛大肠杆菌常见血清型.     

四川省猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药基因和毒力基因检测分析

【目的】为了解四川省猪源呼吸道疾病支气管败血波氏杆菌的流行情况及菌株生物特性。【方法】采集56份病料进行支气管败血杆菌的分离纯化、药敏及相关耐药基因和毒力基因的筛选。【结果】分离到10株支气管败血波氏杆菌，分离率为17.86%。分离菌对青霉素、氨苄西林、羧苄西林、林可霉素、复方新诺明和头孢氨苄的耐药率为100%，对新霉素、氯霉素、氧氟沙星和左氧氟沙星高度敏感。共检出耐药基因9种，其中gyrA、sul1和tetC的检出率超过50%；共检出毒力基因6种，其中fla、dnt、prn和fhaB的检出率高达100%。小鼠致病试验结果显示大部分菌株具有较强的致病性。【结论】四川省主要流行的支气管败血波氏杆菌多重耐药情况严重，耐药机制复杂，耐药基因和耐药表型符合率较低，毒力基因检出率较高，且对小鼠呈现较强的致病性。研究结果可为四川省支气管败血波氏杆菌的防控和治疗提供参考。     

河南地区猪源性大肠杆菌血清型鉴定与耐药性调查

为了解河南省规模化猪场大肠杆菌的流行概况,无菌采集疑似大肠杆菌感染的病死猪病料185份,经常规细菌培养、生化试验及致病性试验,分离到86株大肠杆菌;对分离菌株进行血清型鉴定,确定了67株大肠杆菌血清型,分属15个血清型,主要以 O8、O9、O161、O107为主。测定了已鉴定血清型的67株大肠杆菌对15种常用抗菌药物的耐药性,结果显示,对阿米卡星、黏菌素、头孢曲松钠、头孢噻呋敏感率高的菌株较多;对环丙沙星、多西环素、阿莫西林、四环素、磺胺甲恶唑耐药的菌株达80％以上,对四环素和磺胺甲恶唑耐药的菌株比例最高,分别为88.1％、89.6％;67株菌株均表现不同程度的多重耐药,每种菌株至少对3种受试药物耐药,53.7％的菌株对9种以上药物耐药。表明河南地区的猪源大肠杆菌耐药现象严重,耐药谱广。     

规模化养猪场仔猪黄痢病原菌血清型检测及其药敏试验

【目的】从山东临沂市规模化养猪场仔猪黄痢病例中,分离病原菌并分析其血清型,以探讨分离菌的耐药情况,为临床选用疫苗与防治用药提供参考。【方法】对临沂市不同区域23个规模化养猪场的112份疑似仔猪黄痢病例进行了细菌分离,对分离到的致病性大肠杆菌进行生化试验、毒力试验、致病性试验和血清学鉴定;用15种抗生素对分离菌株进行了60次药敏试验。【结果】从112份病料中分离出了101株致病性大肠杆菌,分离率为90.2%;不同区域猪场流行的血清型有较大差异,在101个分离株中,7株未能定型,4株自凝,其余90株能定O型血清型,这些定型菌株分布在11个血清型中。每种抗菌药物均出现过耐药现象,但各药物的耐药率不同,15种抗菌药物的耐药率最高为100%,最低为10.0%;试验菌株均表现出不同程度的多重耐药性,多为耐4~6种药物的菌株。【结论】目前临沂市规模化养猪场仔猪黄痢病原菌的O型血清型分布在11个血清型中,其中优势血清型为O8、O54、O115和O149,这4种血清型共占定型菌株的56.7%;对仔猪黄痢病原菌敏感率较高的药物是环丙沙星、卡那霉素和呋喃妥因,高敏率分别为81.7%,73.3%和70.0%。     

山东省鸡鼻气管鸟杆菌的分离与鉴定

【目的】对山东省鸡鼻气管鸟杆菌进行分离鉴定。【方法】采集山东省不同地区有呼吸道症状的病(死)鸡,进行鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale,ORT)的分离,根据培养特性及生化试验和玻片凝集试验结果对分离的菌株进行鉴定;应用PCR方法对分离菌株16SrRNA基因的一段保守序列进行扩增,应用琼脂扩散沉淀试验(AGP)对分离菌株的血清型进行鉴定,并对分离株进行药敏试验。【结果】试验共分离到5株ORT,所有分离菌株均能扩增到1条长671bp的特异性片段,而阴性对照菌株的扩增结果为阴性;5株ORT分离菌株可分为3个血清型,其中血清A型3株、血清B型1株、血清D型1株;分离ORT菌株对羟氨苄青霉素、头孢曲松、丁胺卡那、氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星高度敏感。【结论】从山东省病死肉鸡中分离鉴定到5株ORT。     

齐齐哈尔地区仔猪腹泻大肠杆菌血清型与毒力基因分析

为了解黑龙江省齐齐哈尔地区仔猪腹泻大肠杆菌的优势血清型和毒力基因流行情况,从齐齐哈尔地区40个养猪场的腹泻仔猪体内分离到100株致病性大肠杆菌,通过凝集试验和分子生物学检测方法进行血清型及毒力基因检测。血清型检测结果表明,100株大肠杆菌有49个分离株鉴定出血清型,其中O8、O9、O101、O147、O157、O64为优势血清型,占定型菌株的77.55%。毒力基因PCR测定结果表明,黏附素基因987P(50/71,70.42%)、肠毒素基因LT(65/71,91.54%)、强毒力岛FyuA(43/71,60.56%)为主要流行的毒力基因。研究揭示了齐齐哈尔地区仔猪腹泻大肠杆菌的优势血清型和主要携带的毒力基因,为临床防治大肠杆菌性仔猪腹泻提供了科学依据。     

鸡大肠杆菌分离鉴定及药敏试验

采集河南某地养鸡场临床疑似患大肠杆菌病的死鸡的肝脏、脾脏和淋巴结,对分离的细菌进行显微镜检查、细菌生化试验、大肠杆菌O抗原血清型鉴定和PCR检测,分离鉴定结果为大肠杆菌感染.药敏试验结果表明,分离菌株对氟苯尼考、头孢拉定和环丙沙星高度敏感;对头孢唑啉、恩诺沙星、呋喃妥因、阿米卡星、磺胺嘧啶、和林可霉素中度敏感;对氨苄青霉素、庆大霉素、红霉素、氟哌酸、氯霉素、四环素、链霉素、痢特灵、卡那霉索、麦迪霉素等均有耐药性,说明大肠杆菌耐药性普遍存在,建议临床上治疗鸡大肠杆菌病时应先做药敏试验,以筛选出对相应大肠杆菌菌株敏感的药物.     

海安县鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定及药敏试验

从海安县兽医站门诊及12个大型养殖场剖检具有疑似大肠杆菌病的252羽病死鸡中,分离鉴定出大肠杆菌226株,定型198株,共测出23个血清型,其中O78(32株)、O18(26株)、O2(21株)、O88(17株)、O1(13株)、O11(10株)6种血清型占定型菌株的60.1%,为海安县优势血清型.药敏试验结果表明,所分离的大肠杆菌对头孢噻呋、头孢噻肟、阿米卡星、氧氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星高度敏感,对诺氟沙星、多黏菌素B、氟苯尼考、强力霉素、恩诺沙星、阿莫西林、林可霉素中度敏感,对四环素、庆大霉素、链霉素、复方新诺明、头孢氨苄不敏感.     

健康鸡猪体内大肠杆菌对四环素的耐药性及耐药基因分布

【目的】四环素作为人类和动物临床上广泛使用的广谱抗生素,其耐药性问题一直为全球所关注。健康动物体内的共生性大肠杆菌作为耐药指示菌和耐药基因的贮存库,了解其对四环素的耐药性及耐药机制对于疾病的防控具有重要意义。【方法】从健康鸡、猪体内分离大肠杆菌,用微量肉汤法检测其对四环素的耐药性,并用PCR方法对耐药菌株中8种四环素耐药基因的携带情况进行调查,运用统计学方法分析鸡、猪体内大肠杆菌分离株的耐药性和耐药基因分布情况的差异。【结果】总共分离鉴定出大肠杆菌269株,其中86.2%的菌株对四环素产生了耐药性,健康猪体内大肠杆菌分离株的耐药性明显高于健康鸡体内分离株(P0.05)。tet(A)、tet(B)和tet(M)3种四环素耐药基因广泛存在于健康鸡、猪体内的共生大肠杆菌中,所携带比例分别为87.9%、28.4%和15.5%;所有对四环素耐药的大肠杆菌均携带tet(A)或tet(B)基因,其中25.0%和2.6%的耐药菌株分别携带有2种和3种耐药基因,tet(M)基因与tet(A)或tet(A)+tet(B)基因共存于对四环素耐药的大肠杆菌中;健康鸡、猪体内耐药性大肠杆菌在tet(A)+tet(M)基因携带率方面的差异具有统计学意义(P0.01)。【结论】健康鸡、猪体内的大肠杆菌分离株普遍对四环素耐药,四环素耐药基因广泛分布于大肠杆菌分离株中,大肠杆菌对四环素的耐药机制以主动外排作用为主,核糖体保护基因在大肠杆菌对四环素耐药机制方面的作用尚待进一步的研究。     

豫西地区禽源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解豫西地区禽源大肠杆菌的耐药情况,从豫西地区养鸡场采集130份疑似大肠杆菌病料样品,按常规方法分离细菌,对分离菌株进行生化试验、PCR鉴定、血清型鉴定及药敏试验。结果显示,共分离鉴定出98株鸡源大肠杆菌,确定86株细菌分属14个血清型,其中以O14、O141、O78、O88血清型为主,分别占分离菌株的20.93%、16.28%、13.95%、9.30%。利用K-B法药敏试验检测大肠杆菌对20种抗生素的耐药性,结果表明,分离菌对复方新诺明的耐药性最高(95.92%),其次为四环素(83.67%)、氨苄西林(81.63%)、萘啶酸(77.55%)、恩诺沙星(69.39%),对亚胺培南和多黏菌素B敏感。大部分菌株具有多重耐药性,耐药种类最多的菌株对18种抗生素耐药,9~14重耐药菌株有76株,占77.55%。可见,豫西地区禽源大肠杆菌耐药现象十分严重,严重影响了禽类大肠杆菌病的防治。     

中药水提物对猪源耐四环素大肠杆菌的抑制活性

【目的】了解中药水提物对猪源耐四环素大肠杆菌的抑制活性,为其在养猪生产中的应用提供依据。【方法】纸片法测定10个猪源大肠杆菌分离株对四环素的敏感性,PCR方法测定其对四环素耐药基因的携带情 况;琼脂扩散法和微量倍比稀释法测定中药水提物及其与四环素的混合物对10个猪源大肠杆菌分离株的抑制活性。【结果】10个受试菌株对四环素的耐药率达100%,部分或全部菌株携带tetA（10/10）、tetB（2/10）和tetC（9/10）等四环素耐药基因;山楂、五味子、连翘和金银花的水提物均有较强的抑菌活性,但与四环素混合后,其抑菌圈直径减小,最小抑菌浓度增大。【结论】受试菌株对四环素的耐药性可能由tetA、tetB和tetC等四环素耐药基因引起,测定的4种中药水提物对受试菌株均有抑制活性,但不宜与四环素联用。     

2006—2008年中国部分地区马铃薯晚疫病菌生理小种的分布

【目的】对中国部分地区马铃薯晚疫病菌Phytophthora infestans生理小种的毒力基因进行测定与评价,为抗晚疫病育种策略制定以及抗病品种的合理布局提供指导。【方法】利用11个含有单显抗病基因的一套鉴别寄主,采用离体叶片法测定马铃薯晚疫病菌的生理小种。【结果】在采自2006—2008年中国6个省份的57个马铃薯晚疫病菌株中,共测定出30个生理小种。所测的30个生理小种均为含多个毒力基因的复合小种,其中含有5个以上的毒力基因的小种有25个,约占83%。还发现3个菌株可以克服所有已知的R1—R11等11个抗病基因的"超级毒力小种"。【结论】中国马铃薯晚疫病菌生理小种数目不断增多,其组成日趋复杂。垂直抗病基因R1—R11在中国部分省份完全丧失抗病性,迫切需要发掘新的抗源和加紧培育水平抗性品种。     

新疆多源喹诺酮类耐药大肠杆菌耐药基因检测及分析

【目的】了解新疆不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌携带质粒介导的喹诺酮耐药因子（plasmid mediated quinolone resistance,PMQR）的流行现状,及其与主要的β-内酰胺酶基因和 16S rRNA 甲基化酶基因的共存情况。【方法】通过 PCR 方法对猪源（79 株）、牛源（8株）和羊源（96株）喹诺酮类（环丙沙星,诺氟沙星和恩诺沙星）耐药大肠杆菌进行 PMQR（qnrA, qnrB, qnrC, qnrD, qnrS, qepA, oqxA, oqxB, aac(6’)-Ib-cr）、β-内酰胺酶基因（bla_TEM, bla_CTX-M, bla_SHV, bla_KPC, bla_CMY-2, bla_LAP-1）及16S rRNA（armA, rmtB）等基因检测,对目的条带进行DNA测序,确定阳性菌株,对检出携带 β-内酰胺酶基因和16S rRNA 甲基化酶基因的大肠杆菌进行β-内酰胺类及氨基糖苷类药敏试验,分析其携带的基因型与耐药表型之间的关系。【结果】猪源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS（5/79,6.33%）,oqxA（35/79,44.30%）,oqxB（40/79,50.60%）和aac(6’)-Ib-cr（4/79,5.06%）,检出的β-内酰胺酶基因为bla_TEM（79/79,100%）,检出的16S rRNA 基因为rmtB（3/79,3.80%）;牛源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS（1/8,12.50%）,oqxA（1/8,12.50%）,oqxB（1/8,12.50%）和aac(6’)-Ib-cr（1/8,12.50%）和qepA（1/8,12.50%）,检出的β-内酰胺酶基因为bla_TEM（8/8,100%）和bla_SHV（1/8,12.50%）;羊源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS（6/96,6.25%）,oqxA（32/96,33.3%）,oqxB（37/96,38.5%）和aac(6’)-Ib-cr（22/96,22.91%）,检出的β-内酰胺酶基因为bla_TEM（96/96,100%）和bla_CTX-M（2/96,2.08%）,检出的16S rRNA 基因为rmtB（2/96,2.08%）;未检出qnrA,qnrB,qnrC,qnrD,bla_KPC,bla_CMY-2和bla_LAP-1被检基因。不同动物源大肠杆菌中存在基因共存现象,携带β-内酰胺酶基因和16S rRNA 甲基化酶基因的喹诺酮类耐药大肠杆菌对β-内酰胺类和氨基糖苷类药物耐药呈一定的相关性。【结论】不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌中存在PMQR因子,可与主要的 β-内酰胺酶和/或16S rRNA 甲基化酶基因共存。此外,首次在羊源大肠杆菌中检出PMQR 因子、β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因。     

养殖场分离的耐氟喹诺酮类药物的大肠杆菌基因突变研究

【目的】探讨从养殖场动物、环境和饲养员分离的大肠杆菌的gyrA 和parC 基因突变特征。【方法】用琼脂稀释法测定环丙沙星和恩诺沙星对菌株的最小抑菌浓度。PCR扩增gyrA 和parC 基因的喹诺酮耐药决定区，扩增的片段长度分别为525 bp和487 bp，PCR产物直接测序。【结果】在63株突变株中，在GyrA 亚基发生的氨基酸替代有Ser83→Leu（62株）和Asp87→Asn（52株）、Asp87→Tyr（2株）、Asp87→His（2株）；ParC 亚基的氨基酸替代有Ser80→Ile（47株）、Ser80→Arg（2株）和Glu84→Val（3株）、Glu84→Lys（4株）、Glu84→Gly（5株）、Glu84→Ala（1株）。环丙沙星对菌株的MIC小于0.125μg·ml-1时，GyrA和ParC亚基均没有任何变异；环丙沙星的MIC为0.125～0.25 μg·ml-1时，GyrA亚基出现单一氨基酸替代；环丙沙星的MIC为0.5～32μg·ml-1时，出现GyrA 83位和87位双替代或者GyrA83和ParC80位双替代；环丙沙星的MIC为4～128μg·ml-1，发生GyrA 双替代和ParC单替代；环丙沙星的MIC在16～128μg·ml-1，发生GyrA双替代和ParC 双替代。【结论】不同来源的耐氟喹诺酮类药物的大肠杆菌GyrA和ParC具有多种氨基酸替代类型，而且GyrA和ParC突变位点的数量与菌株对氟喹诺酮类耐药水平呈正相关。     

羔羊STEC的耐药性、毒力基因和血清型分析

【目的】 研究新疆羊源STEC的耐药性和毒力情况,评价羊源STEC在羊产业链饲养阶段的风险。【方法】 从某规模化羊场随机采取2月龄羊的肛拭子样本,EC肉汤增菌后用MAC平板结合双重PCR(stx1,stx2)法分离鉴定STEC,用SMAC平板结合双重PCR(rfbE和fliC)法分离鉴定E. coli O157:H7;用K-B法做9类18种药的敏感试验,并用PCR检测相应的耐药基因;用PCR检测STEC的毒力基因(eae,ehxA,hlyA,stx1a,stx1c,stx1d,stx2a等),并检测是否“Top Six”和E. coli O157:H7血清型。【结果】 被检的21只羊中,9只携带STEC(42.86%),其中1只羊还携带E. coli O157:H7;药敏试验显示仅有2株菌对头孢吡肟具有耐药性,对其他药均敏感;所有分离菌均携带stx1毒力基因,其毒力基因亚型以stx1a(60%)与stx1c(80%)为主,9株STEC不属于“Top Six”或O157血清型。【结论】 该场羊源STEC的携带率较高,主要携带致病力较弱的stx1,有E. coli O157:H7,但是没有“Top Six”血清群;该场羊源STEC对目前的抗菌素普遍敏感,反映了其良好的养殖环境和较少的抗生素使用。     

猪源大肠杆菌耐药性及相关耐药基因检测

【目的】 研究新疆阿克苏地区某规模化猪场猪源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况及相关耐药基因携带情况,分析耐药表型与耐药基因之间的关系。【方法】 采用琼脂稀释法,对分离鉴定的443株猪源大肠杆菌进行猪场常用6大类13种抗菌药物最小抑菌浓度的测定。采用PCR方法,检测13种抗菌药物相应的4大类10种耐药基因。【结果】 该猪场猪源大肠杆菌对被检的8种抗菌药物耐药率超过70.0%,其中对恩诺沙星、链霉素、大观霉素、金霉素、土霉素的耐药率高达90.0%以上,对阿米卡星、安普霉素、头孢噻呋、多黏菌素E具有较好的敏感性,耐药率未超过25.0%;多药耐药结果以7~9耐为主,占63.6%。除tetK外,对被检的其他9种耐药基因均有检出,以携带floR(66.4%)和ant(3″)-Ia(66.4%)耐药基因为主。【结论】 新疆阿克苏地区某规模化猪场猪源大肠杆菌至少对被检的1种抗菌药物表现为耐药,且多药耐药情况严重,耐药谱广,耐药基因携带率高,应从基因水平对耐药大肠杆菌进行传播机制的监测。     

闽江流域福州过境段大肠杆菌毒素基因的定性定量分析与季节性变化

分别于不同季节在闽江流域福州过境段的洪山桥和解放大桥断面采集水样,进行大肠杆菌的分离、鉴定,用多元PCR方法对不同季节分离的大肠杆菌毒素基因的时空分布进行定性与定量分析。从分离的2 015株粪大肠杆菌中发现840株潜在的致病性大肠杆菌,分别属于肠出血性大肠杆菌（EHEC）、肠聚集性大肠杆菌（EAEC）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）和肠产毒性大肠杆菌（ETEC）;检出的10种毒素基因中,以扩散性黏附素基因（aidA-1）、热稳定性肠毒素基因（astA）和耐药性因子（sepA）为最多;细菌总量、大肠杆菌总数和致病性大肠杆菌总数在冬季较少,春季较多,夏秋季节达到全年数量的高峰;潜在的致病性大肠杆菌毒素基因的种类和数量也是在冬季最少,春夏季上升,秋季最多。