肝细胞胰岛素抵抗模型中PRKCZ的表达及其与胰岛素抵抗的相关性

目的检测肝细胞胰岛素抵抗模型中肝癌HepG2细胞中PRKCZ的表达,并分析其与胰岛素抵抗的关系。方法通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PRKCZ在胰岛素抵抗和正常情况下的表达,生物信息学方法分析PRKCZ与胰岛素信号通路蛋白的相互作用。结果与正常对照组相比,肝细胞胰岛素抵抗模型组中PRKCZ表达量明显下降。蛋白相互作用网络表明PRKCZ与PIK3CA和Akt有直接的相互作用。结论 PRKCZ蛋白可能通过与PDPK1、PIK3CA、Akt1、GSK3B的相互作用,影响胰岛素信号通路PI3K/Akt的正常转导,引起胰岛素抵抗。     

PI3K/Akt及MAPK/Erk1/2信号通路在病毒感染中的作用

Phosphatidylinositol 3-kinases/Akt（PI3K/Akt）信号通路是执行多种生物学功能的信号调控系统,即在PI3K的调节下Akt通过调节多种蛋白分子的活性来执行PI3K调控的多种生理学反应,如细胞存活和细胞增殖,血管生成,代谢调控和细胞迁移等。近年来越来越多的研究发现PI3K/Akt信号通路还参与了多种病原微生物的感染和致病过程,深入研究PI3K/Akt信号通路在病原微生物感染中的作用,对于揭示病原微生物致病机理具有重要意义。     

下丘脑胰岛素抵抗在多囊卵巢综合征排卵障碍中的作用

目的:探究下丘脑胰岛素抵抗在多囊卵巢综合征排卵障碍中的作用机制。方法:以SD雌性大鼠为研究对象,颈背部皮下注射硫酸普拉睾酮钠溶液建立多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型。并分为4组:正常对照组、抑制组(Wortmannin和Perifosine阻滞PI3K/AKT通路)、模型对照组、模型激活组(皮下注射1.10μg/kg胰岛素样生长因子)。实验开始后每2周给大鼠进行称重,测定空腹血胰岛素。采用相应试剂盒分别检测血清中游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)和总胆固醇水平(TC)。摘取大鼠下丘脑中IRS-2含量、Western Blot测定下丘脑中PI3K和p-PI3K蛋白表达、采用定量PCR测定AKT_2基因的表达情况。摘取卵巢,采用显微镜观察并计算各组大鼠排卵率、平均排卵数和囊性扩张卵泡率。结果:模型对照组即多囊卵巢综合征大鼠,体重、空腹胰岛素水平、囊性扩张卵泡率、血清中FFA、TG和TC均显著性大于其他各组大鼠(P0.05);抑制组即PI3K/AKT通路抑制组大鼠,相同培养时间时其体重、空腹胰岛素水平、囊性扩张卵泡率、血清中FFA、TG和TC均显著性高于正常对照组(P0.05);模型激活组的体重、空腹胰岛素水平、囊性扩张卵泡率、血清中FFA、TG和TC均显著性低于模型对照组和抑制组(P0.05),但是高于正常对照组(P0.05);模型对照组即多囊卵巢综合征大鼠,下丘脑中IRS-2、PI3K/β-actin、p-PI3K/β-actin、AKT_2mRNA表达水平、平均排卵数和排卵率均显著低于其他各组大鼠(P0.05);抑制组,即PI3K/AKT通路抑制组大鼠,相同培养时间时下丘脑中IRS-2、PI3K/β-actin、p-PI3K/β-actin、AKT_2mRNA表达水平、平均排卵数和排卵率均显著性低于正常对照组(P0.05);模型激活组的下丘脑中IRS-2、PI3K/β-actin、p-PI3K/β-actin、AKT_2mRNA表达水平、平均排卵数和排卵率均显著性高于模型对照组和抑制组(P0.05),但是显著性低于正常对照组(P0.05)。结论:下丘脑胰岛素受体后IRS2/PI3K/AKT信号障碍是导致PCOS胰岛素水平升高与排卵减少的重要机制。     

卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关性

细胞自噬是哺乳动物细胞物质代谢的一个重要机制，与细胞凋亡共同参与卵巢卵泡的发育和闭锁，并发挥重要的作用。近年研究发现，磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B，PI3K/AKT）信号通路参与卵巢疾病的发生。PI3K和AKT的过度激活可使原始卵泡过早发育以及卵泡过快凋亡，卵巢颗粒细胞作为卵泡发育重要的支持细胞，其功能的减退或凋亡很可能引发一系列女性内分泌方面的疾病。FOXO3a转录因子是PI3K/AKT信号通路下游的重要靶蛋白之一，参与抗增殖和凋亡。本文就关于卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关进展加以综述。     

PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡基因表达的影响

[目的]研究阻断PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡的影响。[方法]用抑制剂LY294002(LY)作用于细胞1 h,然后将布鲁氏菌16 M侵染细胞,应用实时定量PCR检测16 M对巨噬细胞内凋亡相关基因Caspase-3活性和Bax mRNA表达的影响。[结果]阻断PI3K/Akt信号通路可显著提高16 M介导的caspase-3活性和Bax mRNA水平。[结论]PI3K/Akt信号通路可调控布鲁氏菌介导的细胞凋亡。     

肝细胞胰岛素抵抗模型中RhoA的表达及其与胰岛素抵抗的相关性

目的检测RhoA在肝细胞胰岛素抵抗状态下表达量的变化,并对RhoA与胰岛素抵抗的相关性进行分析。方法采用蛋白印迹技术检测RhoA在正常对照组和肝细胞胰岛素抵抗组的表达差异,采用生物信息学方法对RhoA与胰岛素信号通路相关蛋白的相互作用进行分析。结果肝细胞胰岛素抵抗组中RhoA表达显著高于正常对照组(P0.05)。蛋白质相互作用分析表明RhoA直接与PIK3CA、ROCK1和PTEN相互作用。结论 RhoA可能通过与PIK3CA、ROCK1和PTEN的相互作用,影响胰岛素信号通路PI3K/AKT的正常转导,引发胰岛素抵抗。     

PI-3K转导通路在Ⅱ型糖尿病发病机制中作用的研究进展

胰岛素是通过胰岛素信号的转导通路来发挥其调节血糖并且促进其代谢合成的,其中磷脂酰肌醇-3激酶（PI-3K）在胰岛素信号转导中起关键性作用,而胰岛素信号转导通路障碍所引起的胰岛素抵抗在Ⅱ型糖尿病治疗中有着至关重要的作用．从胰岛素抵抗的发病机制、影响PI-3K的因素等几个方面综述了PI-3K在Ⅱ型糖尿病发病机制中的作用．     

~(60)Coγ射线对大鼠性激素水平以及PI3K/Akt信号通路蛋白表达的影响

【目的】探讨~(60)Coγ射线对大鼠血清性激素水平及PI3K/Akt/Foxo3a信号通路蛋白表达的影响,明确辐射对卵巢组织损伤的分子机制.【方法】通过一次6.0 Gy~(60)Coγ射线对大鼠进行照射后,分别在第3、7、14、21天,通过TUNEL法观察卵巢组织细胞凋亡情况、血清LH、FSH和雌激素(E2)水平及免疫组化法观察卵巢组织Akt、磷酸化Akt、Foxo3a、磷酸化Foxo3a蛋白水平的表达.【结果】辐射损伤造成卵巢颗粒细胞明显凋亡(P0.01);而且随着辐射时间的延长细胞凋亡数量逐渐增加,在辐射第21天达到高峰(P0.01);大鼠血清FSH、LH和E2水平随着辐射对卵巢功能的损伤而逐渐降低(P0.01);卵巢组织蛋白测定总Akt, p-Akt、Foxo3a蛋白的表达呈现逐渐增加趋势(P0.01),尤以总Akt和Foxo3a蛋白的表达在辐射第21天最显著(P0.01);而p-Foxo3a蛋白表达逐渐下降(P0.01),尤以辐射第21天最显著(P0.01).【结论】辐射导致大鼠POF的原因,一方面激活PI3K/Akt/Foxo3a信号通路,导致颗粒细胞以及卵母细胞凋亡,另一方面垂体腺细胞凋亡影响促性腺激素分泌.     

PI3K/Akt信号通路在胞内布鲁氏菌存活中的作用

为了检测对PI3K/Akt信号通路在巨噬细胞内布鲁氏菌存活的影响,将布鲁氏菌粗糙型菌株RB51和光滑型菌株S2308分别侵染细胞,应用Western blot技术检测RB51和S2308和对巨噬细胞内p-Akt(S473)和p-Akt(T308)表达的影响;用MTT法检测抑制剂LY294002(LY)对细胞活性的影响;通过菌落计算法,检测抑制剂LY对胞内菌RB51和S2308存活的影响。结果表明,粗糙型菌株RB51和光滑型菌株S2308都可激活PI3K/Akt信号通路,但粗糙型菌株RB51的激活程度显著弱于光滑型菌株S2308(P0.01);抑制剂LY在小于或等于20μmol/L浓度时不影响细胞活性;抑制剂LY(20μmol/L)可显著抑制光滑型菌株S2308的存活,但不影响粗糙型菌株RB51的存活。本研究表明,PI3K/Akt信号通路在光滑型菌株存活中发挥重要作用。     

PI3K/Akt信号转导通路在ALV-J感染中作用的初步研究

 【目的】探讨ALV-J在宿主细胞中复制与PI3K/Akt信号转导通路的关系。【方法】将血管瘤病变型ALV-J毒株HN06和骨髓瘤病变型ALV-J毒株NX0101分别感染DF-1细胞，通过Western blot、Real-time PCR、IFA和ELISA等方法，观察细胞Akt蛋白磷酸化水平、病毒RNA表达水平和病毒蛋白表达水平等指标。【结果】HN06株和NX0101株在体外细胞中复制水平有差异。HN06株的早期感染可引起Akt转导通路的活化，病毒引起的Akt磷酸化具有病毒滴度依赖性，而且能被PI3K特异性抑制剂LY294002所抑制，表明HN06株诱导的Akt活化是PI3K途径依赖的。LY294002可在病毒感染早期呈剂量依赖性地显著降低受染细胞中HN06 RNA水平、囊膜蛋白水平和细胞培养物上清中的病毒粒子含量。【结论】PI3K/Akt信号转导通路活化对HN06株在细胞感染早期具有重要的作用，该结果与已报道的有关细胞PI3K/Akt信号转导通路参与NX0101株的早期感染的结论一致。本研究为进一步阐明ALV-J入侵宿主细胞和复制的精确机制等研究奠定了基础。     

Differentiation stage-specific inhibition of the Raf-MEK-ERK pathway by Akt

Extracellular signals often result in simultaneous activation of both the Raf-MEK-ERK and PI3K-Akt pathways (where ERK is extracellular-regulated kinase, MEK is mitogen-activated protein kinase or ERK kinase, and PI3K is phosphatidylinositol 3-kinase). However, these two signaling pathways were shown to exert opposing effects on muscle cell hypertrophy. Furthermore, the PI3K-Akt pathway was shown to inhibit the Raf-MEK-ERK pathway; this cross-regulation depended on the differentiation state of the cell: Akt activation inhibited the Raf-MEK-ERK pathway in differentiated myotubes, but not in their myoblast precursors. The stage-specific inhibitory action of Akt correlated with its stage-specific ability to form a complex with Raf, suggesting the existence of differentially expressed mediators of an inhibitory Akt-Raf complex.     

杨正望教授治疗PCOS性不孕验案举隅

多囊卵巢综合征（Polycystic ovary syndrome,PCOS）是目前青春期、育龄期女性最常见的内分泌及代谢性疾病之一。由于排卵功能障碍使PCOS患者受孕率降低,且流产率增高,PCOS成为生育期妇女不孕的重要原因。杨正望教授对PCOS性不孕的病因病机及其中西医治疗均有其独到的见解,认为本病基本病机为“肾、脾、肝三脏功能失调为本,痰湿、瘀血形成为标”,数种病因病机常相互错杂,同时并存,导致多种症状同时出现,治疗上三因制宜,擅长运用中药、西药、针灸、耳穴压豆等多种方法综合治疗,临床疗效显著。     

细胞自噬与多囊卵巢综合征研究进展

多囊卵巢综合征（Polycystic ovary syndrome，PCOS）是导致女性月经不调、排卵障碍性不孕的主要原因，确切发病机制尚未阐明。自噬可以发生在卵泡发育的各个阶段，卵泡颗粒细胞自噬相对活跃，具有促性腺激素依赖性和细胞特异性。卵泡颗粒细胞自噬稳态平衡以维持卵巢功能，调控卵泡发育，影响胚胎质量和妊娠结局。PCOS卵泡颗粒细胞自噬活性过高，自噬相关基因表达过强，与PCOS卵泡发育异常、内分泌代谢紊乱、临床自然流产率高和辅助生殖中发生卵巢过度刺激综合征风险增高密切相关，可能是PCOS发病的重要机制。补肾中药通过下调PCOS卵泡颗粒细胞过度自噬，改善卵巢功能，维持机体阴阳平衡，但具体作用机制亟待进一步阐明，为PCOS、不孕症等妇科疑难病症临床诊疗提供新思路。     

印楝素对小菜蛾胚胎细胞增殖和凋亡的影响

【目的】探讨印楝素对小菜蛾Plutella xyllostella胚胎细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。【方法】将体外培养的小菜蛾胚胎细胞分为印楝素处理组和未处理组,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖的抑制率,激光共聚焦镜检PI染色后的细胞死亡和DAPI染色后的凋亡小体,通过Western-blotting检测各组细胞Caspase-3的表达情况以及通路蛋白Akt的磷酸化水平。【结果】印楝素对小菜蛾胚胎细胞有明显的增殖抑制作用,且呈现浓度依赖性,24 h的IC_(50)为4.4μg·mL~(-1)。印楝素处理后的细胞经PI染色后能明显观察到死亡细胞,DAPI染色后可见凋亡小体;Caspase-3蛋白发生剪切,并且抑制Akt的磷酸化水平。【结论】印楝素对小菜蛾胚胎细胞的增殖有明显的抑制作用,并通过抑制Akt信号通路的活化,诱导细胞产生依赖于Caspase-3的Ⅰ型凋亡。     

Phosphorylation and regulation of Raf by Akt (protein kinase B)

Activation of the protein kinase Raf can lead to opposing cellular responses such as proliferation, growth arrest, apoptosis, or differentiation. Akt (protein kinase B), a member of a different signaling pathway that also regulates these responses, interacted with Raf and phosphorylated this protein at a highly conserved serine residue in its regulatory domain in vivo. This phosphorylation of Raf by Akt inhibited activation of the Raf-MEK-ERK signaling pathway and shifted the cellular response in a human breast cancer cell line from cell cycle arrest to proliferation. These observations provide a molecular basis for cross talk between two signaling pathways at the level of Raf and Akt.     

王若光教授对于PCOS不孕症的认识与优化管理

由于多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）临床表现多样，PCOS的诊断标准一直存在较大争议,其诊断方面的争议影响了治疗的规范化。笔者从PCOS不孕症的病机核心、3阶段-12灰阶诊断、一元化分型、中医证候、治疗核心等方面介绍王若光教授对PCOS不孕症优化管理的思路与见解。     

Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta)

Glucose homeostasis depends on insulin responsiveness in target tissues, most importantly, muscle and liver. The critical initial steps in insulin action include phosphorylation of scaffolding proteins and activation of phosphatidylinositol 3-kinase. These early events lead to activation of the serine-threonine protein kinase Akt, also known as protein kinase B. We show that mice deficient in Akt2 are impaired in the ability of insulin to lower blood glucose because of defects in the action of the hormone on liver and skeletal muscle. These data establish Akt2 as an essential gene in the maintenance of normal glucose homeostasis.     

Phosphorylation by p38 MAPK as an alternative pathway for GSK3beta inactivation

Glycogen synthase kinase 3beta (GSK3beta) is involved in metabolism, neurodegeneration, and cancer. Inhibition of GSK3beta activity is the primary mechanism that regulates this widely expressed active kinase. Although the protein kinase Akt inhibits GSK3beta by phosphorylation at the N terminus, preventing Akt-mediated phosphorylation does not affect the cell-survival pathway activated through the GSK3beta substrate beta-catenin. Here, we show that p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) also inactivates GSK3beta by direct phosphorylation at its C terminus, and this inactivation can lead to an accumulation of beta-catenin. p38 MAPK-mediated phosphorylation of GSK3beta occurs primarily in the brain and thymocytes. Activation of beta-catenin-mediated signaling through GSK3beta inhibition provides a potential mechanism for p38 MAPK-mediated survival in specific tissues.