04种提取法对富硒灵芝主要功效成分的提取效果

对富硒灵芝子实体采用水提、碱提、醇提和酶提进行的主要功效成分提取和分析试验表明，4种提取法对总糖、硒及蛋白质的提取率依次为碱提法〉酶提法〉水提法〉醇提法，差异显著（P〈0．05），但4种提取法均不影响灵芝蛋白氨基酸的分布（t〉t0.01）。相比而言，酶提法是较理想的提取富硒灵芝主要功效成分的方法。     

富硒大米硒蛋白提取方法研究

【目的】优选富硒大米,研究提取分离硒蛋白的最佳生产工艺条件,为提高硒蛋白资源的开发利用提供参考。【方法】采用碱提法提取硒蛋白,正交试验法优化大米硒蛋白的提取条件,采用考马斯亮蓝G-250试剂结合法测定蛋白含量,原子荧光法测定硒含量。以含硒蛋白质及硒得率为指标,研究影响富硒大米中含硒蛋白质提取的因素。【结果】影响富硒大米含硒蛋白提取率的主次因素为:Na OH浓度料液比温度时间。富硒大米含硒蛋白提取的最佳工艺条件为提取温度50℃,碱液浓度0.14mol/L,提取时间5 h,料液比1∶30,此条件下硒蛋白提取率为57.11%。【结论】采用正交试验法优化的碱提工艺可有效提高硒蛋白提取率,优化的工艺参数可在实际生产中推广应用。     

《中国农业大学学报》第11卷（2006年）总目次

综述近年来生态足迹研究进展…………………………………………………………………吴隆杰杨林苏昕徐建明(3):1中国蚯蚓资源研究:Ⅰ.名录及分布………………………………………………黄健徐芹孙振钧王冲郑东海(3):9博士后论坛4种提取法对富硒灵芝主要功效成分的提取效果…………     

富硒黑木耳硒多糖超声–微波提取工艺优化及其抗氧化活性

以富硒黑木耳中的硒多糖为考察指标,采用超声–微波提取法,分别设超声时间、微波时间、超声功率、微波功率、料液比5个单因素试验,再选择对富硒黑木耳中硒多糖提取率有显著影响的4个因素(超声时间、微波时间、微波功率和料液比)进行响应面分析,优化富硒黑木耳硒多糖的提取工艺条件。结果表明:采用超声–微波提取富硒黑木耳中硒多糖,在超声时间26 min、微波时间22 min、微波功率350 W以及料液比1∶58(g/m L)时,硒多糖提取率最高,为11.79%,与传统水提法相比,提高了4.1%,提取时间缩短了56.67%。以传统水提法提取的富硒黑木耳中硒多糖为对照,进一步研究超声–微波提取富硒黑木耳中硒多糖的总还原力以及对羟基自由基和DPPH自由基的清除率,结果表明,超声–微波提取的富硒黑木耳硒多糖和传统水提法提取的硒多糖的还原力吸光值分别为0.431和0.410,对羟基自由基清除的半抑制浓度(IC50)值分别为3.81、4.91 mg/m L,对DPPH自由基清除的IC50值分别为4.59、5.70 mg/m L,说明超声–微波提取的富硒黑木耳硒多糖抗氧化活性优于传统水提法提取的硒多糖。     

富硒土壤中硒生物有效性的提取方法研究

为建立适用于酸性富硒土壤有效硒提取的方法，从湖北省恩施土家族苗族自治州建始县天然富硒区采集了40份土壤样品进行水稻盆栽试验，采用连续浸提法和10种常用的单步浸提法对土壤硒形态和有效硒进行了提取、测定，并分析了不同浸提方法提取的有效硒含量与植物硒的相关性。结果显示：建始县酸性富硒土壤中水溶态和交换态硒的含量较低，分别为0.12～46.0、0.58～197.35μg/kg；硒主要以有机结合态和残渣态等难以被植物利用的形态存在，铁锰氧化物结合态、有机结合态及残渣态硒含量分别为0.01～0.34、0.05～0.88、0.04～2.72 mg/kg；在10种单一浸提剂中，0.5 mol/L NaHCO₃和0.1 mol/L KH₂PO₄溶液对土壤有效硒的提取效率较高；在不同土壤硒形态中，交换态硒与植物硒的相关性最高(r=0.80,P<0.01)，其余形态硒与植物硒含量的相关性均低于交换态硒。在单一浸提法中，0.1 mol/L KH₂PO₄溶液和0.5 mol/L NaHCO3溶液提...     

灵芝主要有效成分超声提取工艺的优化

目的研究灵芝三萜和灵芝多糖的超声提取工艺．方法采用超声波辅助法,探讨了提取剂的pH（碱醇）、提取剂用量、提取温度、超声时间4个因素对灵芝三萜提取效果的影响,并用无水乙醇做对照实验．探讨超声时间、提取温度、提取剂用量3个因素对灵芝多糖提取效果的影响．结果醇的pH和超声时间对灵芝三萜的提取效果有明显影响,其他两因素影响效果不大;提取时间和提取温度两个因素对灵芝多糖提取效果达到极显著水平．结论灵芝三萜最佳提取条件为：乙醇用量30倍＋提取温度60℃＋提取时间60min＋碱醇pH8．5,对无水乙醇调pH可以明显提高乙醇提取灵芝三萜的能力;灵芝多糖提取最佳条件为：超声提取时间55min＋提取温度55℃＋提取剂用量50倍．     

麦冬多糖提取工艺的比较

采用碱水、醇碱两种不同提取溶剂提取麦冬(Ophiopogon japonicus)多糖。通过单因素试验分别考察不同提取溶剂下提取时间、超声功率、料液比对麦冬多糖提取率的影响。结果表明,醇碱法多糖提取率高于碱水法,且均高于文献报道的水提法。醇碱提取的最佳工艺为时间15 min、功率700 W、料液比1∶60(g∶m L),麦冬多糖提取率为89%。     

玉米须多糖和黄酮的半仿生提取及抗氧化活性

通过正交试验设计,采用半仿生法水浸提、醇提玉米须2种方法,并与传统水提、传统醇提方法作比较,以多糖、黄酮的提取量和抗氧化活性为考察指标,确定最佳提取条件。结果表明,半仿生水提多糖提取量为35．29 mg／g,比传统水提法提高了14．39％,半仿生水提黄酮提取量为5．16 mg／g,比传统水提低36．6％。2种水提取物均有抗氧化活性且半仿生法更弱。半仿生醇提多糖提取量为49．53 mg／g,比传统醇提提高了19．75％,醇提黄酮提取量为15．59 mg／g,比传统醇提高了59．4％。2种醇提取物均有抗氧化活性且半仿生法较强。半仿生水提有利于玉米须多糖的提取;半仿生醇提玉米须黄酮、多糖均提高,且有较高的生物活性,是提取分离玉米须活性成分的有效方法。     

白芨中天然化合物的酶解法提取

对白芨中的天然化合物进行酶解法提取,为其开发利用提供技术参考。以纯水、70%乙醇提取为对照,采用酸性蛋白酶、果胶酶、纤维素酶对白芨块茎进行相继酶解,并对各提取物中的成分进行HPLC分析。酶解法与水提法、醇提法提取的白芨块茎中物质种类及含量存在明显差异。酶解法是比水提法和醇提法更为有效的白芨天然产物提取方法,所得提取的化学成分种类多,提取效率高。     

提取剂和酶处理对龙眼可溶性糖提取的影响

[目的]探究不同提取剂和酶处理对龙眼果实可溶性糖提取的影响。[方法]以‘四季龙眼’成熟果实为试材,采用杀酶—乙醇法、不杀酶—乙醇法、杀酶—水提法和不杀酶—水提法4种提取方法,用高效液相色谱法(HPLC)测定蔗糖、葡萄糖、果糖及总糖含量。[结果]4种方法提取的3种糖和总糖含量由高至低均为:杀酶—乙醇法不杀酶—乙醇法杀酶—水提法不杀酶—水提法,其可溶性总糖含量分别为181.92、169.17、141.30、128.17 mg·g~(-1)。杀酶—乙醇法提取率最高,不杀酶—水提法提取率最低,两者在蔗糖、葡萄糖和果糖提取量上分别相差40.70、7.56、5.49 mg·g~(-1)。乙醇法提取率显著比水提法高,对果肉进行杀酶能更充分提取可溶性糖。[结论]杀酶—乙醇法是提取龙眼果实可溶性糖的优选方法,但耗时较长;杀酶—水提法是提取龙眼果实可溶性糖的简便方法。     

富硒灵芝的优化培养

[目的]筛选富硒灵芝菌丝体的最佳培养方法。[方法]采用单因素试验和正交试验研究发酵培养基的碳源、氮源以及发酵条件对富硒灵芝菌丝体干重、总硒含量及有机硒含量的影响。[结果]在亚硒酸钠含量为0.01%的条件下,优化培养的条件为:葡萄糖含量4.0%,马铃薯浸出液含量20%,蛋白胨含量1%,KH2PO4含量0.3%,MgSO4含量0.15%,在pH7.0、接种量为10%、培养温度为28℃和摇床转速为180 r/min的条件下培养,富硒灵芝的菌丝干重为15.28 mg/ml,有机硒的含量为4 115.36μg/g。[结论]试验确定了富硒灵芝发酵培养的最佳方法,为富硒灵芝的开发利用提供了依据。     

7种不同来源灵芝热水提物体外抗氧化活性研究

[目的]比较不同地区灵芝热水提物的体外抗氧化活性。[方法]分别从总还原力、清除羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O_2~-·)和DPPH自由基4个方面对7种灵芝子实体热水提物的体外抗氧化活性进行了初步研究。[结果]在相同浓度下,猫儿山野生灵芝热水提物的总还原力最强,吸光度高达2.48;·OH清除能力最高,清除率99.46%;清除DPPH自由基能力最强,清除率为96.62%;清除O_2~-·能力排第三。[结论]猫儿山野生灵芝热水提取物在总还原力、清除·OH、DPPH自由基3个方面的抗氧化能力表现出最强,说明猫儿山野生灵芝具有非常好的开发潜力。     

生长期和品种对灵芝萃取物三萜含量的影响

利用HPLC指纹图谱技术,分析同一菌株的不同生长期、不同品种灵芝的有机溶剂萃取物中的三萜指纹的情况,并比较不同生长期和不同品种之间的差异。结果显示,灵芝生长期间,萃取物的HPLC图谱相似度较高,均0.93;且子实体从开始分化形成时到子实体成熟期间,三萜类化合物的种类基本稳定;然而灵芝三萜萃取物的HPLC指纹图谱的总峰面积,则是第二生长阶段最大,第一生长阶段最小。这说明应生长发育之需求,灵芝三萜的各组分和总量在不断变化。另外,研究中的6个灵芝品种,三萜萃取物的HPLC指纹图谱相似度均0.90;比较灵芝三萜萃取物的HPLC指纹图谱总峰面积发现,美芝(MZ)最大,其次是G4、G9、京大(JD)、南韩(NH),最小是G18。     

不同灵芝主要活性成分差异性分析

[目的]为灵芝分类鉴定及其药用成分的合理利用提供科学依据。[方法]比较不同灵芝菌株（德昌1号、德昌3号、德昌4号、黑芝、血芝、灵芝）的多糖及三萜化合物含量,并采用HPLC法分析不同灵芝菌丝体和子实体中三萜化合物的组分。[结果]子实体多糖含量由高到低依次为：灵芝、德昌3号、黑芝、血芝、德昌1号,三萜含量由高到低依次为：血芝、德昌1号、德昌3号、黑芝、灵芝;不同灵芝菌丝体所含三萜化合物的种类存在差异,同一灵芝菌丝体和子实体所含三萜化合物的种类存在一定的相似性。[结论]灵芝多糖含量与三萜化合物含量之间不存在必然联系。     

富硒灵芝菌株的选育及发酵性能研究

[目的]选育富硒灵芝高产菌株并研究其液体发酵性能。[方法]应用添加Na2SeO3的培养基筛选富硒能力较强、菌体生物量及菌体多糖产量均较高的菌株,并研究其发酵性能。[结果]筛选到菌株Ganoderma lucidumZ-4-25,在液体培养基中添加浓度0.08%的Na2SeO3即能有效促进菌体生长,在浓度0.16%的Na2SeO3液体培养基中培养192 h,灵芝菌粉有机硒含量达到13 000μg/g菌体。在添加浓度0.08%的Na2SeO3条件下,10 L发酵罐发酵216 h,菌体生物量干重达到26.82 g/L,灵芝菌粉有机硒含量达到9 800μg/g菌体。[结论]该研究为富硒灵芝的液体发酵生产奠定了基础。     

不同产地仿野生态栽培灵芝主要活性成分比较

以广西田林、西林、融水等5个产地的仿野生栽培灵芝子实体为材料,采用紫外分光光度法测定灵芝样品中的总多糖、总三萜、总蛋白质含量。结果表明:供试灵芝子实体的多糖含量在0.1%~0.57%之间,其中融水、西林所产灵芝多糖含量较高;灵芝子实体总三萜含量在0.16%~0.37%之间,其中融水所产灵芝总三萜含量最高;灵芝子实体总蛋白含量11.5%~16.17%之间,其中融水所产灵芝总蛋白含量最高。供试的5个灵芝菌株中,融水和西林两地出产的灵芝营养价值较高,在精深加工开发上具有较大潜力。     

几种中草药提取液的抑菌作用研究

[目的]为中草药在防腐保鲜方面的应用提供依据。[方法]制备蒲公英、野菊花、牡蛎、艾蒿、大青叶、百部、麦冬、莪术、良姜、虎杖、女贞、皂角和桔皮等13种中草药的提取液,研究它们的自然感菌情况及其对苹果霉菌的抑菌作用。[结果]蒲公英、大青叶、百部、麦冬、虎杖、女贞、皂角和桔皮的提取率较高,大于20%。抑菌作用最好的是牡蛎和良姜的提取液,第9天出现感菌现象。百部、虎杖提取液对苹果霉菌的抑制作用最大,且提取液的浓度越大,抑制能力越强,5%虎杖提取液、10%百部和麦冬的提取液几乎抑制了苹果霉菌生长。[结论]13种中草药提取液对苹果霉菌的抑制作用较为明显,在自然暴露条件下也具有一定的抗菌能力,百部、虎杖和麦冬的提取液对苹果青霉的抑制效果最好,牡蛎和良姜的提取液抗菌能力最强。     

灵芝属菌株遗传多样性的初步研究

利用RAPD和酯酶同工酶技术对来自国内外的10个灵芝属代表菌株进行了遗传多样性分析。RAPD分析结果表明，在0．560的相似性水平上分成3个组：第1组包括密纹薄芝(1号)、两个灵芝(3号和4号)和两个无柄灵芝菌株(7号和8号)；第2组包括灵芝(2号)、近拟鹿角灵芝(5号和6号)和紫芝(10号)；第3组是树舌(9号)。这一结论与传统分类学结论基本一致。当相似性水平达到0．800时，上述10个菌株聚成8组，这与传统分类学中种的分类几乎一致。酯酶同工酶的分析结果表明，在0．560的相似性水平上，所有菌株分为两组：第一组是树舌(9号)；其他菌株构成一组。这一结论与传统分类学结论也一致。当相似性水平达到0．800时，上述菌株分为7组：其中3号、4号、7号和8号构成一组，其余的同RAPD结果。比较两种方法所得结果发现，在较高的相似性水平(0．840)上，它们的结论是一致的。这表明，RAPD和酯酶同工酶技术在灵芝种间鉴定时是有效的，甚至RAPD在种内鉴定时都是有效的。     

紫杉二烯合酶基因在灵芝中的表达

【目的】论文旨在研究紫杉二烯合酶基因（ts）在灵芝中的表达情况,为利用灵芝作为生物反应器表达紫杉醇及其中间产物提供科学理论依据。【方法】制备灵芝菌株的原生质体：把培养好的灵芝菌丝用0.6 mol•L-1的甘露醇溶液洗涤两次后,加入1%溶壁酶溶液,30℃水浴酶解3 h,离心去上清液得到纯的灵芝原生质体,用0.6 mol•L-1的甘露醇溶液把原生质体的浓度调整到108个/mL备用;外源基因（ts）的转化：在含有灵芝原生质体的缓冲液各加入含有ts基因和潮霉素抗性基因hph的真核表达载体pgGIgpd-TS和pBgGI-hph 1.0 μg,冰浴30 min;加入0.5 mL PEG buffer,在室温下放置20 min;将离心收集的原生质体涂布在不含有潮霉素的再生平板上,25℃培养5-7 d后,待长出白色菌落后,往平板表层覆盖一层含有潮霉素的PDA半固体培养基,于25℃培养;转化子的鉴定：以灵芝的菌丝基因组DNA和RNA为模板,进行PCR和RT-PCR扩增,鉴定ts基因在灵芝中的表达情况;目标产物的检测：对提取的产物采用不分流进样的方式进行气相质谱联用（GC-MS）检测,进样温度250℃,初始温度100℃,保留1 min,每分钟升高8℃,加热到300℃,保留2 min。【结果】经潮霉素初步筛选后,在含有潮霉素抗性的平板上长出白色的菌落,灵芝原种作为阴性对照的平板上没有长出菌落,说明潮霉素基因被成功转入了灵芝并得到了初步的表达;PCR鉴定结果表明20个拟转化子中有4个转化子同时整合了ts基因和hph基因,两个基因的共转化率为20％;RT-PCR鉴定结果表明,4个灵芝转化子实现了外源ts基因的转录;提取转ts基因灵芝的菌丝产物;经过GC-MS测定分析表明,与原种相比,含有ts基因的灵芝工程菌株有一个明显的差异峰,对该峰进行离子碎片分析表明,该物质为紫衫二烯,说明在含有ts基因的灵芝菌丝体中含有目标产物紫衫二烯。【结论】灵芝作为大型真菌,首次被证实可以通过代谢工程生产合成紫杉醇过程中的中间产物紫杉二烯,为以后紫杉醇的生产提供一个潜在的可能,对今后开展灵芝的分子生物学研究具有重要意义。