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相似文献
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1.
葡萄无核基因的SCAR标记及Southern blot分析   总被引:4,自引:0,他引:4  
根据无核基因特异RAPD标记的序列进行分析,合成1对特异引物P1+P3(序列分别是P1:5′CTCATCTTCTTGATGGTGAT3′;P3:5′AAGTGAAGAACATCATTAAGAAC3′),对30个葡萄材料进行PCR扩增,成功地将RAPD标记转换成SCAR标记。并对含有该标记序列的重组质粒进行Hind 和Spe 双酶切,获得的310bp片段回收后制成探测葡萄无核基因存在与否的杂交探针,成功地对7个葡萄品种进行Southernblot分析,实现了分子标记检测葡萄无核基因的目的。  相似文献   

2.
【目的】克隆SCAR标记的核桃早实性相关基因片段[1](AFLP早实分子标记转化成的SCAR标记)的末端序列,为验证其功能和早实核桃分子育种奠定基础。【方法】采用RACE技术对SCARE标记的核桃早实性相关基因片段设计特异性PCR引物,并扩增其末端序列。【结果】分别获得了长度为453 bp和463 bp的片段,通过与NCBI核酸数据库中已经发表的序列进行比对分析,发现该基因3′末端含有358个核苷酸非编码序列。其核酸序列与葡萄假定蛋白相应部位同源性为55.26%,与葡萄重叠群相应部位同源性为38.38%,与线虫粘粒Y38F2AR基因全序列相应部位相似性为40.86%,和野猪免疫球蛋白超家族成员相应部位的相似性为39.75%,具有poly(A)尾。5′末端含有248个核苷酸非编码序列,其核酸序列与葡萄重叠群基因组鸟枪全序列相应部位同源性为39.07%,与拟南芥基因组DNA 3号染色体相应部位的同源性为42.22%,与嗜热四膜虫假定蛋白基因序列相应部位相似性为44.53%,和斑马鱼DNA序列DKEY-120E17克隆2号连锁群全序列相应部位相似性为42.30%。【结论】试验采用的3′和5′末端快速扩增技术(3′RACE和5′RACE技术)能很好地扩增核桃早实性相关基因的末端序列。  相似文献   

3.
葡萄无核基因RAPD标记的序列分析   总被引:9,自引:1,他引:8  
报道了用Qiagen Kit纯化RAPD遗传标记,用细菌质粒m13克隆RAPD标记的DNA片段,采用自动荧光DNA测序仪(型号373A)测定了该DNA片段的核苷酸组成及其排列顺序。无核白RAPD标记由519对核苷酸及其特定序列组成。因为无核白是无核基因的原始供体,作者认主所获无核白RAPD标记的DNA序列,可以作为合成探针的基础,用于检测无核葡萄育种和无核品种的无核性。  相似文献   

4.
以鸭源鸡杆菌临床分离株G7的基因组为模板,采用PCR技术,扩增得到5′-甲硫腺苷/S-腺苷高半胱氨酸核苷酶基因(pfs)的全序列,对其核苷酸序列及其编码的氨基酸序列进行了同源性分析,构建了该基因的原核表达载体并诱导表达。G7的pfs基因全长693 bp,与其他3个参考鸭源鸡杆菌核苷酸序列的同源性均在93%以上。诱导表达获得的蛋白大小为28 kD,与根据pfs编码基因所推导的蛋白大小一致。  相似文献   

5.
葡萄无核基因RAPD标记的序列分析   总被引:8,自引:0,他引:8  
报道了用QiagenKit纯化RAPD遗传标记,用细菌质粒M13克隆RAPD标记的DNA片段,采用自动荧光DNA测序仪(型号373A)测定了该DNA片段的核苷酸组成及其排列顺序。无核白RAPD标记由519对核苷酸及其特定序列组成。因为无核白是无核基因的原始供体,作者认为所获无核白RAPD标记的DNA序列,可以作为合成探针的基础,用于检测无核葡萄育种和无核品种的无核性。  相似文献   

6.
以海南山蛭(Hoemadipsa hainana)基因组DNA为模板,以合成的2段30个寡聚核苷酸的序列为引物,经过PCR扩增,分离海南山蛭中的蛭素基因,获得了1条大小约237bp的DNA片段。将其克隆到pGEM-Teasy载体中,经筛选与检测,并进行序列分析。结果显示,所克隆的海南山蛭蛭素基因的大小为231bp,与Dr.Burkhard报道的印度山蛭蛭素cDNA序列相比,其核苷酸的同源性为99.9%。  相似文献   

7.
非洲猪瘟病毒p72基因的纳米金探针研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物索标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针.PCR扩增出的p72基因中的651 bp保守核酸序列,变性后与上述生物素探针及标记纳米金探针进...  相似文献   

8.
【目的】克隆山葡萄(Vitis amurensis)CBF1转录因子基因(VaCBF1),为其功能的深入研究及其在植物抗寒基因工程中的应用奠定基础。【方法】根据植物CBF基因AP2/EREBP保守区设计1对简并引物,利用PCR法从山葡萄cDNA中扩增VaCBF1基因的中间片段。再根据中间片段区域设计2对特异引物,采用反向PCR法扩增VaCBF1基因的5′端和3′端序列。将中间片段与5′端和3′端序列拼接后得到山葡萄VaCBF1基因的cDNA全长序列,据此设计1对特异引物,PCR扩增VaCBF1基因编码区的全长序列,并对其进行生物信息学分析。同时,利用荧光定量PCR分析山葡萄VaCBF1基因在不同逆境胁迫(干旱、低温、盐胁迫)下的表达情况。【结果】成功地从山葡萄中克隆得到VaCBF1基因cDNA全长序列,其长度为762bp,编码253个氨基酸,在GenBank注册号为DQ517296。同源性分析证实,VaCBF1属于CBF转录因子家族。荧光定量PCR分析发现,低温胁迫可以诱导山葡萄VaCBF1基因高表达,而该基因的表达不受盐及干旱处理诱导。【结论】首次从山葡萄中克隆了VaCBF1基因,并证实该基因参与了植物对低温胁迫的应答。  相似文献   

9.
【目的】克隆葡萄VviSEP2基因的完整开放阅读框(ORF)序列,明确其与胚珠败育型无核葡萄胚珠败育的关系。【方法】通过RT-PCR技术在‘无核白’葡萄中克隆葡萄VviSEP2基因的完整ORF序列,并对该序列及其编码产物进行生物信息学分析,采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR技术分析VviSEP2的表达模式。【结果】克隆得到一个无核葡萄胚珠发育相关基因,该基因cDNA序列长度为1 132bp,ORF为741bp,编码246个氨基酸。氨基酸多序列比对和进化树分析确认,该基因是E类MADS-box基因家族成员,命名为VviSEP2。表达分析结果表明,VviSEP2只在花蕾、花和胚珠中有表达,而在根、茎、叶中无表达,并且该基因在有核葡萄‘黑比诺’花与花蕾中的相对表达水平明显高于无核葡萄‘无核白’,同时VviSEP2基因在‘黑比诺’胚珠发育各时期的相对表达水平均高于‘无核白’,为后者的3~5倍。【结论】VviSEP2基因与无核葡萄的胚败育可能存在一定关系。  相似文献   

10.
牦牛乳球蛋白基因5'调控区的分离、克隆及序列分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
根据文献设计1对PCR引物,寡聚核苷酸序列上游引物为5′-gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3′,下游引物5′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′.经68℃退火及30轮循环的PCR程序后扩增出长度为1447 bp的DNA片段,将该片段从琼脂糖凝胶中回收,克隆到pMD18-T Vector后进行序列测定.序列分析结果表明,牦牛乳球蛋白基因5′调控区与文献报道的奶牛该基因同源性为97.65%,突出的碱基差异为牦牛乳球蛋白基因5′调控区发生了1个位点连续3个碱基的缺失突变和另一位点1个碱基的插入突变.该研究也为开展以牦牛乳球蛋白基因5′调控区为启动子的乳腺生物反应器研究准备了条件.  相似文献   

11.
把引起豌豆枯萎病的丁香假单胞菌丁香致病变种 Pseudomonas syringae pv.syringae 菌株3319和丁香假单胞菌豌豆致病变种 P.syringae pv.pisi 的模式菌株2452的染色体 DNA 分别用限制性核酸内切酶 HindⅢ完全消化,再用 T_4DNA 连接酶把消化好的 DNA 片段连接到用HindⅢ内切酶消化的质粒载体 pUC19上,然后把重组的质粒载体转化到大肠杆菌(E.coli RR1)中去克隆.把菌株3319和2452的 DNA 用 p~(32)标记做成探针,分别与克隆菌落杂交,筛选出只对菌株3319的 DNA 有特异性的1个重组 DNA 的克隆和对菌株2452的 DNA 有特异性的2个重组 DNA 克隆.再把这3个重组质粒 DNA 分别用 P~(32)标记做成探针,与菌株3319和2452的 DNA 杂交,也显示只对各自 DNA 来源的菌株具有特异性.这3个重组质粒中,有2个携带有菌株2452的 DNA 片段,1个为0.82 kb。另1个略小于0.58 kb,还有1个质粒携带有菌株3319的 DNA 片段,为0.85 kb.  相似文献   

12.
 水稻叶绿体和线粒体基因组较小,且均被测序清楚,可以作为研究细胞质遗传的良好材料,而如何快速有效地分离纯化获得高产量和高质量的细胞质基因组是从DNA水平上研究细胞质遗传变异的前提条件。本研究结合了蔗糖密度梯度离心法-全基因组DNA扩增法(whole genome amplification,WGA),对细胞质基因组的制备进行了改良。改良后的方法仅使用20g的水稻叶片,即可在2d时间内得到浓度达300ng/μL以上,总量达40μg以上的高纯度(OD260/280值为18~20)、完整的叶绿体DNA (chloroplast DNA,cpDNA)和线粒体DNA (mitochondrial DNA,mtDNA)。该法制备的细胞质基因组可以满足多种细胞质基因组实验的要求,包括Solexa全基因组测序技术的要求。  相似文献   

13.
四倍体菘蓝基因组DNA提取方法的比较   总被引:1,自引:0,他引:1  
[目的]探讨四倍体菘蓝组培苗高质量DNA的提取方法。[方法]分别采用CTAB法1、CTAB法2、SDS法1、SDS法2和碱裂解法对四倍体菘蓝组培苗DNA进行提取试验,通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳,比较了5种DNA提取方法对四倍体菘蓝组培苗的提取效果。[结果]CTAB法2提取DNA的OD260/OD230值为2.311,OD260/OD280值为1.774,DNA纯度最大,浓度最大,提取率最高,PCR扩增条带清晰,重复性好,所得DNA的质量最好。[结论]CTAB法2是提取四倍体菘蓝组培苗基因组DNA最有效的方法。  相似文献   

14.
标记技术在食用菌遗传多样性中的研究进展   总被引:1,自引:0,他引:1  
生物多样性是人类社会赖以生存和发展的基础,而遗传多样性则是生物多样性的根本。从形态学、细胞学、蛋白质和DNA分子4个方面介绍了食用菌遗传多样性的研究进展,其中对DNA分子标记即RFLP、RAPD、SCAR、SSR、AFLP分析方法的原理、特点和其在食用菌遗传多样性鉴定方面的研究进展进行了重点阐述。  相似文献   

15.
依据最新NDB数据库中蛋白质-DNA复合物晶体结构数据,基于修正的DNA结构统计力学模型,利用蒙特卡洛多重积分计算DNA动力学结构的有关参数,并对计算得到的结果进行时间复杂度和精确度分析. Abstract: Based on protein-DNA complex crystal structural data in up-to-date Nucleic Acid Database,the related parameters of DNA Kinetic Structure were investigated by Monte-Carlo Multiple Integrals on the base of modified DNA structure statistical mechanical model,and time complexity and precision were analyzed on the calculated results.  相似文献   

16.
中华蜜蜂(Apis cerana cerana)抗中囊病选育研究好   总被引:3,自引:1,他引:2  
以江西省高安、上饶、靖安、遂川、南昌定地饲养的中蜂为素材,人工饲喂感染中蜂囊状幼虫病毒.从受试蜂群中选择抗病力强的蜂群,培育蜂王和雄蜂,作为中蜂子1代.然后用同样方法进行人工饲喂感染,培育中蜂子2代和子3代.再用中蜂与意蜂营养杂交方法来培育中蜂子4代、子5代和子6代,并测定了其感染发病率、产育力及7个工蜂形态指标;利用14条随机引物检测了其DNA多态性,并计算了遗传距离和进行聚类分析.结果表明:选育的中蜂子3代感染发病率显著低于普通中蜂,中蜂子6代感染发病率显著低于中蜂子3代;中蜂子6代蜂群的产育力比子3代和普通中蜂分别提高6.56%和10.22%,都达到显著差异;子4代、子5代、子6代工蜂的吻长、右前翅长度、右前翅宽度、第3腹节背板长度、初生重与亲本工蜂、子1代、子2代、子3代工蜂之间差异显著;所有子代工蜂的肘脉指数和右后翅的翅钩数与亲本工蜂之间差异不显著;RAPD标记显示中蜂子6代与亲本中蜂之间的遗传距离有较大差异.  相似文献   

17.
栎属植物DNA提取方法的研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
为了获取高质量的栎属植物基因组DNA,采用经过改良的SDS法和CTAB法对几种常见栎属植物进行基因组DNA的提取.结果表明:改进的SDS法和CTAB法都较常规的方法好.所提出的DNA较纯净.改进的CTAB法与改进的SDS法比较.改进的CTAB效果较好,所获得的DNA经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,纯度较高,OD260/OD280为1.75~1.80,运用SSR和RAPD进行分析时,可以获得较好的扩增片段,说明蛋白质、多糖、RNA等去除较干净.  相似文献   

18.
在综合前人方法的基础上,改良了一种简捷、灵敏、廉价、效果可靠的Southern印迹杂交方案,使用0.4mol/L NaOH溶液将琼脂糖凝胶上的DNA在变性的同时转移到尼龙膜上,紫外交联固定后用于杂交。预杂交液和杂交液选用Church缓冲系统,该缓冲系统中仅需10 g/L BSA作为封闭剂即可。整个洗膜过程可简化为一种溶液、2~3次洗涤。碱变性及转移后的尼龙膜,也可以用于地高辛(DIG)等非放射性检测系统,并可耐多轮杂交和洗膜。方法可适用于包括高等植物基因组在内的多种生物材料的DNA检测。  相似文献   

19.
玉米抗病相关候选基因DNA片段克隆   总被引:2,自引:0,他引:2  
根据已克隆的植物抗病基因的保守序列设计引物,对玉米DNA进行扩增、克隆并对部分克隆进行了测序.测序结果与Genebank进行序列同源性比较分析.其中pGEM2-23号克隆与玉米中乙醇脱氢酶基因(adh1)在15047~15272 bp处具有85%同源性;pGEM2-25号克隆与水稻BAC库中10号染色体的OSJNBa0055P24克隆片段在67005-67151bp处具有82%同源性.推测pGEM2-23克隆为一与乙醇脱氢酶有类似作用的抗病相关候选基因的片断.  相似文献   

20.
比较了质粒DNA小量和大量制备方法,分析了质粒纯度、酶的种类、单酶切和双酶切方法对酶切效果的影响。结果显示,质粒DNA小量制备法效果好,提取的质粒量大,质量高;GalUR/TEM-T质粒双酶切时需先经过纯化才能酶切完全;BamHI单酶切FRO2/PCB302质粒效果比较好,而XbaI单酶切FRO2/PCB302质粒效率比较低,需要纯化和降低酶切反应中质粒的浓度。  相似文献   

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