木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的工艺条件优化及水解物抗氧化活性研究

[目的]研究采用木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的工艺条件及水解物的抗氧化活性。[方法]采用正交试验法确定木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的最适工艺条件,采用Sephadex G-25凝胶色谱分离酶水解物,通过测定羟自由基（OH·）和超氧阴离子自由基清除能力研究了酶水解物的抗氧化活性。[结果]核桃蛋白木瓜蛋白酶水解的最优奈件是温度55℃,底物浓度4％,酶浓度60000U／g,pH值8．0;在水解度达到38．4％时,其酶解产物对羟自由基（OH·）和超氧阴离子自由基（O2·）的清除率分别为22．5％和46．4％。采用Sephadex G-25凝胶柱层析对水解度38．4％的酶水解物进行分离得到了A、B、C和D4个肽片段,其中肽片段c的自由基清除能力最大。[结论]核桃蛋白木瓜蛋白酶水解物具有一定抗氧化活性。     

碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白及其抗氧化活性的研究

将Plackett-Burman因素水平设计应用于碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白,以研究大豆分离蛋白酶水解物的抗氧化活性.通过测定水解产物的亚铁还原能力来确定其抗氧化活性的强弱,以此确定最佳水解工艺条件 为:反应温度72℃,底物浓度9％,酶用量(E/S) 1％,pH 7.0,水解时间5h.采用最适水解工艺条件得到水解...     

中性蛋白酶酶解绿豆蛋白制备寡肽的研究

[目的]利用中性蛋白酶将绿豆蛋白质水解成肽和氨基酸,通过优化酶解条件得到水解度较高的绿豆肽。[方法]选用中性蛋白酶对绿豆分离蛋白进行酶法水解以制备寡肽。在单因素考察的基础上,采用四因素三水平的正交试验设计优化酶解条件。[结果]试验得出,最适的反应条件为温度50℃、pH值6.5、底物浓度7%、酶浓度6000 U/g、水解时间240 min。[结论]绿豆分离蛋白在此条件下酶解,水解度的平均值可达28.82%。     

3种蛋白酶制备的鱼粉水解物的生根抑制活性的研究

以碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶为水解酶制备出鱼粉多肽,用培养皿生物分析法检测不同鱼粉水解物在0,0.5~1、1.5~22、.5 mg/ml)浓度下对多年生黑麦草种子种子萌发根系生长抑制活性.所有的数据分析均采用SPSS 13.0 for Windows分析处理.结果表明:3种鱼粉水解物对多年生黑麦草种子萌发根系生长均有抑制活性,且随着水解物浓度增加根系生长的抑制活性增强;碱性蛋白酶和复合蛋白酶制备的鱼粉水解物的根系抑制活性要明显高于风味蛋白酶制备的鱼粉水解物。     

中性蛋白酶酶解谷朊粉制备抗氧化多肽研究

以谷朊粉为原料,采用中性蛋白酶制备抗氧化多肽,并对其酶解工艺进行优化。结果表明,对中性蛋白酶酶解谷朊粉制备抗氧化多肽的影响顺序依次为酶解温度>加酶量>酶解时间;通过响应面分析优化酶解条件为底物浓度8%,加酶量2 800 U/g,温度52℃,时间280 min,此时酶解液羟自由基清除率达到65.3%,多肽含量为60.4 mg/mL。     

中性蛋白酶酶解蛋清制备活性肽的研究

研究了AS1398中性蛋白酶酶解鸡蛋蛋清制备小分子活性肽,确定了酶解的最佳工艺:pH值8.0,酶解温度60℃,底物浓度4%,酶加入量为底物浓度的7%,水解时间4h.在此条件下,水解度达到26.1%.用SephadexG-15测定了水解物分子量分布,结果表明:水解产物中的主要成分是分子量集中在1 300Da的寡肽.     

核桃青皮的强抗氧化活性成分及其抗氧化稳定性

【目的】以大孔树脂纯化的核桃青皮抗氧化成分为对象,对其组分进行鉴定,并研究其抗氧化稳定性,为核桃青皮的开发和有效利用提供理论依据。【方法】以DPPH自由基清除能力为指标,采用D101型的大孔树脂纯化核桃青皮粗提取物,浓缩冷冻干燥后,采用超高压液相色谱-高分辨质谱联用仪（UPLC-MS）对具有较强抗氧化活性部分的核桃青皮纯化物进行成分分析,并通过分析pH、温度、光照、金属离子、氧化剂H2O2、还原剂Na2SO3和防腐剂山梨酸钾7种因素对核桃青皮抗氧化物质清除DPPH自由基的影响,研究其抗氧化性能的稳定性。【结果】UPLC-MS结果表明,核桃青皮中具有强抗氧化活性的主要成分为绿原酸、短叶苏木酚羧酸、花靛-葡萄糖/半乳糖、鞣花、槲皮素-阿拉伯糖、表儿茶素或儿茶素、槲皮素-3-O-葡萄糖苷等7种成分。抗氧化成分稳定性研究结果表明：随着pH的增大,核桃青皮抗氧化物质对DPPH自由基清除率逐渐减小,当pH为12时,抗氧化物质对DPPH自由基的消除率几乎为0;抗氧化物质对DPPH自由基清除率能力随着放置时间的延长而下降;在室内、光照和避光3种处理下,核桃青皮抗氧化物质溶液的DPPH自由基消除率在0-2 h内逐渐下降,且三者之间无显著性差异（P＞0.05）。在放置2-5 h内,光照处理的消除率均低于同期的室内和避光处理;在4、37、70和90℃ 4种处理下,核桃青皮抗氧化物质溶液对DPPH自由基的消除率总体呈下降的趋势,而在50℃处理下则呈先下降后上升再下降的趋势;Fe3+能使抗氧化物质维持较高的抗氧化活性,而Cu2+ 、Mg2+、K+、Al3+则使核桃青皮抗氧化物质的抗氧化能力降低。亚硫酸钠使核桃青皮抗氧化物质的抗氧化能力维持较低水平;浓度为0.10%和0.05%的H2O2能提高核桃青皮抗氧化物质的抗氧化能力,此后抗氧化能力随着其浓度的增加而下降;防腐剂山梨酸钾溶液能显著降低（P<0.05）核桃青皮抗氧化物质的抗氧化能力,二者呈负相关关系。【结论】核桃青皮提取物具有较强的抗氧化活性,其抗氧化组分主要为7种多酚类活性物质。环境因子对核桃青皮活性物质的抗氧化稳定性具有一定的影响。     

长萼堇菜叶蛋白水解物的制备及其活性分析

以长萼堇菜(Viola inconspicua Blume)为材料,优选碱提酸沉法参数,提取其叶蛋白;采用酶法制备叶蛋白水解物;利用超滤法分离叶蛋白水解物组分,分析叶蛋白水解物的抗氧化活性,并对叶蛋白水解物组分进行固相萃取脱盐、HPLC分析及其对肿瘤细胞的抑制活性和对线虫寿命影响的测试。结果表明：采用料液比、碱提pH和酸沉pH分别为1∶9、10.0和4.5的参数组合可稳定提取长萼堇菜叶蛋白;优选的3种蛋白酶(木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶)均能有效将水解物主要酶解为相对分子质量小于3.3×103的组分,并通过超滤可有效分离出相对分子质量分别为<1×103(PH1)、1×103~<3×103(PH2)和≥3×103(PH3)的3个组分;长萼堇菜蛋白水解物中PH1组分的抗氧化活性和抑肿瘤细胞活性优于其他组分;PH1和PH2延长线虫寿命的效果相近,都优于PH3。可见,长萼堇菜叶蛋白水解物组分PH1更具应用开发价值。     

鲤鱼鱼鳞蛋白的酶解制备工艺及其抗氧化活性

[目的]确定鲤鱼鱼磷蛋白的酶解制备工艺,并分析所得的鱼磷抗氧化肽的抗氧化性能。[方法]以鲤鱼鱼鳞为原料,选用胰蛋白酶考察其加酶量、反应温度、酶解时间、pH、底物浓度等因素对鱼鳞蛋白水解程度的影响,用单因素及正交试验的方法优选出鱼鳞蛋白酶解的最佳条件并测定其抗氧化活性。[结果]试验得到鲤鱼鱼磷抗氧化肽酶法制备的最佳工艺条件为pH 8.4、酶解温度45℃、加酶量4000 U/g、酶解时间3 h、底物浓度15%,此条件下得到的鱼磷抗氧化肽水解度较佳(29.97%),抗氧化能力较好。[结论]胰蛋白酶有溶解鲤鱼鱼鳞蛋白的能力,并且酶解产物的抗氧化活性与水解度有关。     

核桃壳提取物体外抗氧化活性研究

为明确核桃壳提取物体外抗氧化活性,测定核桃壳乙醇提取物及其氯仿相对DPPH·、·OH、H2O2和O2-·的清除率及总抗氧化能力。核桃壳乙醇提取物及其氯仿相具有清除DPPH·、·OH、H2O2、O2-·的能力,且具有一定的还原能力;当样品浓度为2mg·mL-1时,核桃壳乙醇提取物对DPPH·、·OH、H2O2、O2-·的清除能力分别为84.91%、22.98%、33.54%、80.36%,还原力为1.971;其氯仿相对DPPH·、·OH、H2O2、O2-·的清除能力分别为93.42%、49.89%、47.58%、90.64%,还原力为0.998。在试验浓度范围内抗氧化能力与提取物浓度呈正相关,核桃壳乙醇提取物及其氯仿相具有体外抗氧化活性。     

长牡蛎蛋白双酶水解工艺及其产物的抗氧化活性

使用中性蛋白酶和胰蛋白酶双酶水解长牡蛎(Crasostrea gigas)蛋白,采用单因素试验分析了水解时间、pH和酶用量比对水解度的影响,并在此基础上设计正交试验优化酶解的工艺条件,并测定了酶解产物的还原能力和对DPPH自由基的清除能力.结果表明,中性蛋白酶和胰蛋白酶双酶水解牡蛎蛋白的最佳工艺条件为酶解时间3h、pH 7、U中性蛋白酶∶U 胰蛋白酶=1∶3,此时水解度为27.09％;酶解产物具一定的还原能力并对DPPH自由基有较强的清除作用.     

碱性蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化特性研究

采用碱性蛋白酶对核桃粕蛋白进行酶解,测定了不同酶解时间下的酶解液抗氧化性;用葡聚糖凝胶分离活性肽段并测定其抗氧化性。结果表明,酶解条件为酶用量3 000 U/g底物、底物质量浓度为40mg/mL、pH为8.5、温度为50℃下酶解210 min,酶解液的抗氧化活性较高,OH.清除率为72.3%,氧自由基清除率为83.1%,DPPH.清除率为102.6%,总抗氧化能力为162.986 U/mL;通过葡聚糖凝胶分离并与已知标准品对照表明碱性蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性多肽的分子量主要集中在1 321~607 u,该多肽片段对OH.清除率为70.23%,氧自由基清除率为62.57%,DPPH.清除率为99.56%,总抗氧化能力为118.987 U/mL。     

四氢嘧啶提高中性蛋白酶热稳定性的研究

[目的]提高中性蛋白酶的热稳定性。[方法]在中性蛋白酶酶液中添加四氢嘧啶,考察四氢嘧啶对中性蛋白酶热稳定性的影响。[结果]四氢嘧啶对经热处理的中性蛋白酶有明显的保护作用。添加浓度3 mmol/L的四氢嘧啶可以使经过50℃处理的中性蛋白酶剩余的相对酶活提高12.7%;添加浓度5 mmol/L的四氢嘧啶可以使经过60℃处理的中性蛋白酶剩余的相对酶活提高51.8%。[结论]四氢嘧啶是一种有效的中性蛋白酶热保护剂。