木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的工艺条件优化及水解物抗氧化活性研究

[目的]研究采用木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的工艺条件及水解物的抗氧化活性。[方法]采用正交试验法确定木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的最适工艺条件,采用Sephadex G-25凝胶色谱分离酶水解物,通过测定羟自由基（OH·）和超氧阴离子自由基清除能力研究了酶水解物的抗氧化活性。[结果]核桃蛋白木瓜蛋白酶水解的最优奈件是温度55℃,底物浓度4％,酶浓度60000U／g,pH值8．0;在水解度达到38．4％时,其酶解产物对羟自由基（OH·）和超氧阴离子自由基（O2·）的清除率分别为22．5％和46．4％。采用Sephadex G-25凝胶柱层析对水解度38．4％的酶水解物进行分离得到了A、B、C和D4个肽片段,其中肽片段c的自由基清除能力最大。[结论]核桃蛋白木瓜蛋白酶水解物具有一定抗氧化活性。     

淡水小龙虾下脚料酶解制备抗氧化肽的工艺研究

[目的]研究以淡水小龙虾下脚料为原料酶解制备龙虾抗氧化肽的工艺。[方法]以酶水解产物清除羟自由基能力为指标,采用单因素和响应面试验考察了制备淡水小龙虾抗氧化肽的最佳蛋白酶种类及其酶解工艺。[结果]碱性蛋白酶是制备淡水小龙虾抗氧化肽的优选蛋白酶;最佳酶解工艺条件为：料液比1.0∶1.0（g∶ml）、酶解温度59℃、pH 8.9、加酶量2 000 U/g,水解时间3 h。[结论]此工艺所得酶解液对羟自由基的清除效果最好,清除率为74.66%。     

响应面试验设计优化鲢鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽的制备条件

采用酶解法制备抗氧化活性肽,研究了鲢鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽制备的优化条件。以水解度(DH)、DPPH·、超氧阴离子(O-2·)和羟基(·OH)自由基清除率为指标,比较碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对鲢鱼鳞胶原蛋白的酶解效果及酶解产物的抗氧化活性。结果表明:碱性蛋白酶酶解产物的抗氧化活性最强,对DPPH·、O-2·和·OH自由基的清除率分别为76.9%、43.1%和58.2%;采用响应面试验设计优化碱性蛋白酶制备鲢鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽的条件,得到最优的制备条件为底物浓度5.47%,酶解时间4.24 h,酶添加量4 200 U/g,在此条件下,所得抗氧化肽对DPPH·、O-2·和·OH的清除率分别为79.6%、46.3%和63.5%。     

木瓜蛋白酶水解鸡骨泥制备短肽工艺优化

为了探究酶解鸡骨泥制备抗氧化肽的最佳工艺,研究了以木瓜蛋白酶酶解鸡骨泥时各因素对短肽得率的影响,以及制备的抗氧化肽对羟自由基、超氧阴离子自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除能力。试验探究了酶解过程中不同底物质量分数、加酶量、反应温度和反应时间对短肽得率的影响。采用响应曲面优化得到了以短肽得率为目标的木瓜蛋白酶酶解鸡骨泥的最优工艺,反应条件为:底物质量分数11.44%,加酶量211.11 mg·g~(-1),反应温度57℃,反应时间3 h,在该条件下酶解液短肽得率预期为59.20%,实测为58.87%±0.51%。采用优化工艺制备的抗氧化肽,在达到32 g·L~(-1)时与维生素C清除羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基的能力相近,说明鸡骨泥肽具有一定的抗氧化活性。     

藏鸡蛋卵白蛋白酶解制备抗氧化肽及其体外抗氧化活性

采用碱性蛋白酶水解藏鸡蛋卵白蛋白,制备抗氧化活性肽,以水解度和超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率为指标,通过单因素试验和正交试验确定最佳酶解参数,并对酶解多肽的体外抗氧化活性进行测定。结果表明:碱性蛋白酶酶解的最适条件为底物质量分数2%、酶解时间5 h、酶添加量7 000 U/g;在最适条件下,碱性蛋白酶酶解所得抗氧化肽的O_2~-·、DPPH自由基、羟基自由基(·OH)清除率分别为71.75%、56.47%、84.46%;还原力、抗脂质过氧化能力分别为0.87、82.83%。     

豇豆籽肽的制备及抗氧化活性研究

[目的]采用酶法制备豇豆籽蛋白肽,并探讨其抗氧化活性。[方法]先用碱提酸沉法制备豇豆籽蛋白,然后分别用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解制备豇豆籽肽,后者脱盐后进行DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子清除活性分析。[结果]碱性蛋白酶水解能力强于木瓜蛋白酶,2种酶水解后的豇豆籽肽对3种自由基均具有较好的清除活性。在相应浓度范围内,对DPPH自由基最大清除率分别为63.92%(碱性蛋白酶)和63.06%(木瓜蛋白酶),半数抑制浓度IC50分别为3.20和3.28 mg/ml;对羟基自由基最大清除率分别为87.66%(碱性蛋白酶)和85.88%(木瓜蛋白酶),相应IC50分别为4.21和4.89 mg/ml;对超氧阴离子自由基的最大清除率64.06%(碱性蛋白酶)和47.92%(木瓜蛋白酶)。[结论]研究可为豇豆籽蛋白肽的深度开发和综合利用提供一定的理论基础。     

双酶水解麦胚制备抗氧化肽的工艺优化

以麦胚为原料,制备具有抗氧化活性的麦胚肽。对碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L与胰蛋白酶双酶组合酶解麦胚的工艺进行优化。以水解度和1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除率为考察指标,探讨酶与底物浓度的比值([E]/[S])、酶降温度和酶解时间对制备麦胚抗氧化肽工艺的影响,采用Box-Behnken中心组合设计和响应面法(RSM)优化了麦胚双酶水解的工艺条件。结果表明:双酶水解麦胚制备抗氧化肽的工艺条件为底物浓度10.0%、碱性蛋白酶与胰蛋白酶酶活比1∶1、[E]/[S]为0.041 3、酶解温度50.3℃、酶解时间2.03 h、pH8.0。验证试验表明,在此条件下,麦胚水解度和抗氧化肽对DPPH自由基清除率分别为16.65%和50.16%;其抗氧化活性小于10 mg/ml VC。     

草鱼鱼鳞抗氧化肽的酶法制备及其抗氧化稳定性研究

【目的】采用碱性蛋白酶水解草鱼鱼鳞制备抗氧化肽,并探讨其稳定性。【方法】运用单因素及正交试验对酶解条件进行优化,并进行体外抗氧化活性的测定,对酶解得到的抗氧化肽进行体外模拟胃肠消化实验。【结果】在优化工艺条件下,鱼鳞酶解液中羟自由基清除率为88.71%;其体外抗氧化能力随肽质量浓度增大而增大,在浓度为0.5 mg/m L时,鱼鳞抗氧化肽清除DPPH自由基能力达到Vc的81.1%;对超氧阴离子自由基清除率为98.97%。在胃肠消化前4 h内抗氧化活性较稳定,之后随时间延长抗氧化稳定性显著下降。【结论】在酶解草鱼鱼鳞的较佳工艺条件:温度60℃、料液比1∶15、加酶量800 U/g、时间3 h下,碱性蛋白酶水解草鱼鱼鳞制备的抗氧化肽具有良好的抗氧化活性及稳定性。     

象拔蚌酶解制备抗氧化肽的工艺研究

[目的]探讨酶解象拔蚌蛤肉制备抗氧化肽的最佳工艺条件。[方法]采用复合蛋白酶对象拔蚌蛤肉进行酶解获得抗氧化肽,以羟自由基清除率及蛋白水解度为指标,通过单因素试验与响应面分析法对酶解工艺条件进行优化。[结果]象拔蚌蛤肉的最佳酶解工艺条件为料水比1∶11.11,加酶量3 000 U/g,酶解时间1.2 h,酶解温度55℃,pH 7.52;在该条件下,酶解液获得较高的蛋白水解度,同时对羟基自由基和DPPH自由基显示出很好的清除效果,其EC50值分别为11.26和37.75 mg/ml。[结论]该研究为象拔蚌保健食品的开发提供了依据。     

大黄鱼鱼肉蛋白水解制备抗氧化肽的工艺

以大黄鱼为原料,采用不同蛋白酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和复合蛋白酶)分别水解鱼肉,制备抗氧化肽;研究不同酶的水解效果,筛选出最佳的水解用酶;采用单因素试验,以蛋白水解度及水解液的还原力和超氧阴离子自由基(O-·2)清除力为指标,研究不同水解p H、酶添加量、水解温度、底物浓度和水解时间对水解效果的影响;在此基础上,采用Box-Behnken响应面设计法,以水解液的还原力为评价指标,对水解工艺参数进行优化.结果表明,中性蛋白酶为水解大黄鱼的最适用酶,其最佳工艺条件为:底物浓度26.55%、水解温度46℃、水解时间7.2 h、p H 7.0、酶添加量2400 U·g-1,在此条件下,水解液的还原力达到最大(0.967),此时,O-·2清除力为87.46%,蛋白水解度为36.51%.     

马氏珠母贝肉酶解条件优化及其产物活性分析

[目的]优化超声波辅助酶解马氏珠母贝肉工艺条件,并对酶解产物进行自由基清除活性分析,为马氏珠母贝肉的高值化利用提供参考依据.[方法]以马氏珠母贝肉为原料,采用单因素及响应面试验分析酶解温度、加酶量、超声功率和酶解时间对珠母贝肉蛋白质水解度的影响,确定最佳工艺参数,并测定酶解产物对羟基自由基(·OH)、超氧自由基(O2)及DPPH自由基(DPPH·)的清除能力.[结果]影响马氏珠母贝肉酶解效果的4个因素主次顺序为:超声波功率>加酶量>酶解温度>酶解时间,其中酶解温度、加酶量和超声波功率影响极显著(P<0.0 1),酶解时间及加酶量与超声波功率的交互作用影响显著(P<0.05).马氏珠母贝肉最佳超声波辅助酶解条件为:酶解温度48℃、加酶量2200 U/g'超声波功率13%(总输出功率900W)、酶解时间12 min,在此条件下的蛋白质水解度为21.937%,与预测值(22.140%)的相对误差为0.92%.酶解产物对·OH、O2-和DPPH·的清除能力随酶解产物质量浓度的增加而增强,当质量浓度为2.0 mg/mL时,清除率分别为68.85%、83.62%和82.36%.[结论]优化得到的超声波辅助酶解马氏珠母贝肉工艺参数准确可靠,酶解时间显著缩短,酶解产物具有明显的清除自由基活性,可作为具有抗氧化作用的保健食品、保健酒等产品的优质原料.     

不同月份厚朴叶多糖体外清除羟自由基作用

[目的]研究不同月份厚朴叶多糖体外对羟自由基（·OH）的清除作用。[方法]以不同月份厚朴叶为原料,通过提取及分离纯化得到厚朴叶多糖,采用分光光度法测定不同月份厚朴叶多糖对Fenton反应产生的羟自由基（·OH）的清除能力,并与抗坏血酸（Vc）的抗氧化性进行了比较。[结果]不同月份厚朴叶多糖对羟自由基的清除率随多糖浓度的增加而增强;与抗坏血酸（Vc）比较,厚朴叶多糖具有更强的清除羟自由基能力,8月份厚朴叶多糖的半抑制率圮,。为0．08g／L,相当于O．12g／Lvc对羟自由基的清除率;同等浓度条件下,10月份厚朴叶多糖在较高浓度时比抗坏血酸（Vc）的抗氧化活性更高。[结论]不同月份厚朴叶多糖在受适浓度范围内对羟自由基有明显的抑制作用     

朝鲜蓟提取物抗氧化性能研究

[目的]为朝鲜蓟的综合开发提供依据。[方法]以芦丁为对照,从对不同体系产生的超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH自由基的清除能力及脂质过氧化的抑制活性等方面研究了朝鲜蓟提取物的抗氧化活性。[结果]朝鲜蓟提取物质量浓度为0.8 mg/ml时,对超氧阴离子的清除率达92.92%,超过同浓度的芦丁;质量浓度为0.5 mg/ml时,对羟自由基的清除率达85.65%,略低于相应对照。朝鲜蓟提取物对脂质过氧化的抑制率随浓度的增加而增大,浓度为0.5 mg/ml时,抑制率达51.21%,稍低于相应对照。朝鲜蓟提取物质量浓度为1 mg/ml时,其清除DPPH自由基的能力超过同浓度的芦丁。[结论]朝鲜蓟提取物具有较强的抗氧化能力和清除自由基能力,是一种较好的天然抗氧化剂和自由基清除剂。     

几种天然抗氧化剂清除自由基能力的比较研究

[目的]寻求比较几种天然抗氧化剂清除体外自由基能力的新方法。[方法]以TB、HQ为对照,用DPPH法、邻二氮菲-Fe2+分光光度法和邻苯三酚自氧化法比较天然抗氧化剂Vc、VE、TP和迷迭香提取物对有机DPPH.、OH.及超氧自由基O2-.的清除能力。[结果]试验条件下TP对DPPH.和OH.的清除能力强于Vc、VE和迷迭香提取物,而Vc对超氧自由基O2-.的清除效果较好。DPPH法较其他两种方法更适于比较这几种天然抗氧化剂清除自由基的能力。[结论]DPPH法可用于比较Vc、VE、TP、迷迭香提取物和TBHQ清除DPPH.的能力。     

沿海滩涂甘紫菜Porphyra tenera Kjellm.色素的抗氧化性研究

[目的]为沿海滩涂甘紫菜的进一步研究与开发应用提供科学依据。[方法]采用乙醇浸提法提取沿海滩涂甘紫菜干燥藻体色素,分别用Fenton反应法和DPPH法测定该色素对羟自由基、DPPH.的清除率,研究其抗氧化性。[结果]当沿海滩涂甘紫菜藻体色素、BHT的浓度为0.10 g/L时,其对羟自由基的清除率分别为57.2%和67.8%。沿海滩涂甘紫菜干燥藻体色素对DPPH.有较明显的清除作用,且其清除作用在0.05~0.80 g/L范围内随浓度的增加而增强。0.10 g/L的BHT对DPPH.的清除率为75.8%。当沿海滩涂甘紫菜干燥藻体色素、BHT的浓度均为0.10 g/L时,色素对羟自由基、DPPH.的清除率分别是BHT的84.4%和86.0%。[结论]沿海滩涂甘紫菜干燥藻体色素具有较强的抗氧化活性。     

平车前多糖抗氧化作用研究

[目的]探寻平车前多糖对羟自由基（.OH）和超氧阴离子自由基（O2-.）的清除作用。[方法]在热水浸提、分离纯化获取平车前多糖的基础上,构建＂邻二氮菲-Fe2＋氧化法产生羟自由基＂和＂邻苯三酚自氧化反应产生超氧阴离子自由基＂的反应体系,通过紫外可见分光光度法研究平车前多糖对体系中产生的羟自由基（.OH）和超氧阴离子自由基（O2-.）的清除作用。[结果]平车前多糖对羟自由基和超氧阴离子自由基均具有一定的清除作用,并在不同浓度范围内对自由基的清除作用呈上升趋势。[结论]平车前多糖具有一定的抗氧化作用。     

大吉岭红茶酯提取物的分离及活性分析

[目的]筛选高活性的红茶提取物。[方法]以印度大吉岭红茶为原料,采用沸蒸馏水抽取后乙酸乙酯萃取,然后将提取物进行柱层析分离;以EGCG、TP、TF、TFMG、TFDG作为对照,对红茶酯提取物进行总抗氧化、清除OH.、O2-.及DPPH.的活性实验;采用LSD法对红茶提取物与对照进行生物活性显著性比较分析。[结果]采用Sephadex LH-20,95%乙醇及不同浓度的丙酮可初步有效地分离红茶酯提取物。提取物中许多峰组分的抗氧化活性极显著地高于EGCG及茶黄素类对照;不同峰组分的总抗氧化和清除自由基能力存在差异;相同峰组分总抗氧化和清除不同自由基能力也不尽一致。[结论]对于活性优于对照的红茶提取物,需要通过LC/MS、NMR等进一步明确其结构和其他性质。