超级稻沈农9741的组织培养体系的构建

以超级稻沈农9741的成熟胚为外植体,通过筛选基本培养基、优化激素组合和调节培养基渗透压,构建了适合水稻特定品种的高效再生体系.试验结果表明:愈伤组织诱导培养采用13(NBB 2.0mg·L-12,4-D)培养基可获得95%的愈伤诱导率;愈伤组织继代培养采用S3(NBB 1.5 mg·L-12,4-D 0.2 mg·L-16-BA 500 mg·L-1脯氨酸)的培养基能使愈伤快速增殖,并且保持良好的胚性;愈伤组织分化培养采用D2(NBB 3.0 mg·L-16-BA 0.5 mg·L-1NAA 500 mg·L-1脯氨酸)的培养基可获得85%的幼苗分化率.该体系可用于超级稻沈农9741的遗传转化和基因工程育种研究中.     

籼稻高效再生体系建立及其影响因子的研究

以籼稻成熟胚为材料,研究了不同因子对水稻愈伤组织诱导和分化的影响,建立了籼稻高效再生体系。结果表明,2,4-D可诱导愈伤组织产生,但博B在仅含2,4-D的诱导培养基中,愈伤组织诱导率极低;6-BA和2,4-D共同作用显著提高出愈率,在2mg.L-12,4-D+0.5mg.L-16-BA的条件下,253的出愈率最高可达到92.9%,博B出愈率可达到84.8%,2,4-D的最适浓度是1.0-2.0=mg.L-1,6-BA的最适浓度0.5-1.0mg.L-1。不同比例的KT、6-BA、NAA和IAA配合使用有利愈伤组织分化,分化率均达到100%,成苗率最高达63.3%。在诱导培养基中添加6-BA不仅对愈伤组织形成和质量有较好促进作用,而且有利于愈伤组织的分化。     

半夏愈伤组织诱导优化研究

为快速诱导形成适合悬浮培养的半夏愈伤组织,对半夏愈伤诱导培养基采取了优化组合。在MS+1.0mg·L-16-BA+2.0mg·L-1NAA培养基上能诱导形成浓绿、致密的愈伤组织;在MS+0.5mg·L-16-BA+2.0mg·L-12,4-D的培养基上,可诱导形成疏松的黄白色愈伤组织,但生长缓慢。将前者后期继代培养基配方调整为MS+0.5mg·L-16-BA+2.0mg·L-12,4-D,可较快诱导出疏松的黄白色愈伤组织,适合做悬浮培养。     

金山绣线菊(Spiraea×bumalda ‘Gold Mound’)再生体系的建立

以金山绣线菊为研究试材,以茎段为外植体,通过使用不同的生长调节剂、不同质量浓度配比对外植体腋芽萌发和增殖影响进行了研究,建立了金山绣线菊无菌培养系;同时,探讨了叶片作为外植体的再生体系的建立.研究结果表明:金山绣线菊的茎段在添加2.0mg·L-16-BA、0.2mg·L-1NAA的MS培养基上腋芽能迅速萌发且长势良好,萌发率为93.3%;叶片在添加2.0mg·L-12,4-D、0.4 mg·L-16-BA、0.04 mg·L-1IBA的MS培养基上培养20d后产生的愈伤组织,转接到去除2,4-D,添加0.8 mg·L-16-BA、0.04 mg·L-1NAA的MS培养基上继续培养50d后,不定芽分化率为90%,每个外植体平均再生不定芽数为3.5个;再生植株在添加0.5 mg·L-1NAA、0.1% AC(活性炭)的1/2MS培养基上,生根率达到100%,生根苗移植于混合基质中,成活率为86.7%.     

毛稔叶片离体培养及植株再生研究

以毛稔叶片作为外植体, MS为基本培养基,研究不同种类激素的浓度配比对毛稔叶片离体再生的影响。结果表明,黑暗条件与光照12 h·d-1有利于毛稔愈伤组织形成,毛稔叶片愈伤组织最佳诱导培养基为MS+0.5 mg·L-16-BA+2.0 mg·L-12,4-D+0.1 mg·L-1 NAA,光照12 h·d-1诱导40 d,愈伤诱导率为96%；叶片形成的愈伤组织分化率极低,分化率随6-BA浓度升高而升高,愈伤组织分化最适培养基为MS+0.1 mg·L-1 NAA+2.0 mg·L-16-BA,分化率为10%；最适生根培养基为1/2 MS+0.1 mg·L-1 NAA,生根率为88.89%。     

不同激素配比对南非叶茎愈伤组织诱导的影响

以南非叶(Vernonia amygdalina Del)的嫩茎为外植体,1/2 MS为基本培养基,每个培养皿中加入50.0g·L-1蔗糖+1.0 g·L-1花宝,以不同激素(NAA,6-BA,2,4-D)不同浓度配比诱导产生愈伤组织,筛选出最佳浓度配比。结果表明:在NAA和6-BA组合中,2.0 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-16-BA诱导率最高,达97.8%。在NAA和2,4-D组合中,1.5 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-12,4-D诱导率最高,达97.7%。     

分蘖洋葱再生体系的建立与优化

采用鳞茎盘、花蕾、试管苗叶片和假茎为外植体材料,以MS为基本培养基,建立分蘖洋葱再生体系。结果表明,MS+0.5 mg·L-1KT+2.0 mg·L-12,4-D最适合愈伤组织诱导,4种外植体材料中鳞茎盘外植体诱导出的愈伤组织状态最优,出愈率最高达86.4%;愈伤分化丛生芽的最优培养基为MS+0.2 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA,分化率为27.58%;在MS+1.5 mg·L-1IBA+0.01 mg·L-1NAA培养基上可诱导出白色健壮根,生根率可达100%。     

西北粳稻成熟胚高频再生体系研究

【目的】研究基因型、培养基、激素、碳源的种类和质量浓度对西北粳稻成熟胚培养特性的影响,建立西北粳稻成熟胚离体再生体系。【方法】以4个西北粳稻品种宁粳16、宁粳34、宁粳35和宁粳38的成熟胚为材料,利用组织培养法,对水稻成熟胚进行脱分化和再分化,获得再生植株,研究培养基、基因型及激素、碳源质量浓度和种类对西北粳稻成熟胚愈伤组织诱导和分化的影响。【结果】基因型对西北粳稻成熟胚培养的影响较大,参试材料中宁粳34的培养特性最好;N6和NB 2种培养基对西北粳稻培养效果的影响随粳稻品种基因型的不同而不同;诱导培养基中添加2,4-D的质量浓度以2 mg/L为好,添加0.2~0.5 mg/L的6-BA可提高西北粳稻成熟胚的愈伤组织诱导率和绿苗分化率。以麦芽糖和蔗糖为碳源时,西北粳稻愈伤组织诱导率和绿苗分化率均较高,蔗糖质量浓度为30~40g/L时培养效果最佳。【结论】基本明确了基因型、培养基、激素、碳源对西北粳稻成熟胚离体培养特性的影响效果,初步建立了西北粳稻成熟胚高频再生体系。     

稻瘟病抗性品种云引籼粳交花药培养体系的建立

【目的】花药培养在不同培养基成分构成的条件下,诱导率和成苗率等都存在显著差异。通过优化培养基成分以及其他培养条件,提高云引籼粳杂交后代花药培养效率,为稻瘟病抗性品种云引的挖掘和利用奠定基础。【方法】以稻瘟病抗性粳稻品种云引作为母本,与常规籼稻品种粤晶丝苗进行杂交,F1代幼穗经过消毒后接种。根据不同基础培养基,碳源以及2,4-D质量设置了12种诱导培养基,经过比较出愈率、绿苗率、得苗率和花药培养力,进而确定最佳的培养条件。【结果】NB培养基的最高培养力仅为0.52%,而M8培养基的培养力0.90%～1.92%;以蔗糖为碳源的M8培养基早期出愈率可达到11.32%,添加1.0 mg·L-1 2,4-D和2.0 mg·L-1 2,4-D花药培养力相当,分别为1.89%和1.92%;而0.2 cm大小的愈伤组织进行分化时绿苗率最高,达到18.3%。【结论】云引籼粳交材料的最佳花药培养条件为:M8基础培养基,添加50 g·L-1蔗糖作为碳源和1.0～2.0 mg·L-1 2,4-D,当花药愈伤组织长至0.2 cm时转移至分化培养基分化。     

特色马铃薯品种红宝石再生系统的筛选

采用3因素3水平L9(34)正交试验设计,以特色马铃薯品种红宝石试管苗茎段为试材,分别选用3种植物激素(诱导愈伤用NAA,2,4-D,6-BA;诱导分化用NAA,GA3,6-BA)的3个水平对其茎段的离体再生进行研究,筛选适合红宝石的愈伤和芽分化诱导培养基。结果表明,不同培养基表现出不同的诱导效果,愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+NAA 0.5 mg·L-1+2,4-D 1.0mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1,愈伤率达100%;植株再生最佳培养基是MS+NAA 0.5 mg·L-1+GA31.0 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1,再生率为80.3%,分化后再生苗健壮。     

The Comparison in Tissue Culture Ability of Mature Embryo in Different Cultivars of Rice

In order to study the regeneration technology of mature embryos in different rice varieties,nine japonica,nine indica and eleven hybrid rice varieties of two line or three line or superiority combinations were selected as explants to study the callus induction,differentiation and regeneration rates on different media.The higher callus induction （61.7-89.2%） was observed in japonica rice,when cytokinin was added at lower concentration （0.3 mg L-1 6-BA） in M8 basal medium,supplemented with 30 g L-1 sucrose,8 g L-1 agar and 2 mg L-1 2,4-D.Further,the addition of two cytokinins （2 mg L-1 6-BA,0.5 mg L-1 KT） and 1 mg L-1 NAA in the M8 basal supplemented medium resulted in 9.1-100% of the callus induction in indica rice.The percent callus induction in hybrid rice varieties was 40-86.3% when addition of 1 mg L-1 6-BA and 1 mg L-1 KT was added,and the cytokinins was required by the japonica and indica rice varieties in the M8 basal supplemented medium.It was observed that when the 0.5 mg L-1 2,4-D and 1 mg L-1 6-BA were added in japonica rice,and 0.2 mg L-1 2,4-D and 0.5 mg L-1 6-BA were added in indica and hybrid rice in the MS different media,the regeneration rates were 9.2-59.5%,3.6-87.5% and 17.2-43.2% for japonica,indica and hybrid rice,respectively.Thus,the regeneration technology with higher output is established in the mature embryos of similar rice varieties.     

玉米骨干自交系幼胚再生体系的建立

以玉米骨干自交系‘87-1’、‘综3’、‘137’和‘K12’的幼胚为外植体,研究了影响玉米幼胚再生体系建立的相关因素.结果表明:87-1幼胚在附加500 mg.L-1L-Pro5、00 mg.L-1L-Asn和2.5 mg.L-12,4-D的N6B5基本培养基上愈伤组织诱导率最高,平均可高达98.1%;初级愈伤组织在附加500 mg.L-1L-Pro5、00 mg.L-1L-Asn和1.25 mg.L-12,4-D的N6B5继代培养基上胚性愈伤组织诱导率最高,平均可高达65.6%.在相同诱导、继代培养基和相同培养条件下,4个不同基因型玉米骨干自交系的愈伤组织诱导率无显著性差异,而其胚性愈伤组织诱导率具有显著性差异.继代培养次数对绿苗分化率也产生重要影响,具有显著性差异,其中,1次继代分化率最高;1/2MS培养基附加0.2 mg.L-1KT更有利于分化苗生根.     

空间诱变水稻H4成熟胚再生体系的建立

以空间诱变水稻H4成熟胚为外植体,通过调节2,4-D浓度、激素组合和分化途径,建立适宜的再生体系.结果表明:诱导培养基以NMB为基本培养基,添加2.5 mg/L 2,4-D、1.0 mg/L NAA和0.5 mg/L 6-BA,26℃暗培养30 d,愈伤诱导率达91.63％;继代培养基中添加2 mg/L ABA,对胚性愈伤组织的形成及后续分化率有一定的促进作用;两步分化法可提高愈伤组织的分化效率,分化率达84.76％,植株再生率为77.67％.初步建立了H4成熟胚愈伤组织的再生体系,为后续的遗传转化研究奠定基础.     

空间诱变水稻H4成熟胚再生体系的建立

通过室内盆栽模拟方法,研究不同基因型水稻品种(天优428、天优998)对酞酸酯胁迫的响应,为酞酸酯污染农田的水稻栽培提供依据。结果表明,酞酸酯对两种水稻生长前期的株高有增效作用,在开花期和成熟期对两个水稻品种株高的影响略有不同,天优998的株高随着PAEs浓度的增高有所增加;酞酸酯处理后水稻的分蘖数、有效穗数减少,产量显著降低。同时酞酸酯处理对水稻的光合速率、蒸腾速率、MDA含量和可溶性糖含量等有一定的影响。综合所得结果,天优998较适于在酞酸酯污染农田中种植。     

结缕草成熟胚愈伤组织的诱导及再生体系的研究

以结缕草的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。结果表明在MS+2,4-D(2.0mg/L)+VB1(4mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为43.20%,但愈伤组织质量较差。将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA,ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤。筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(2.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)中,分化率45.6%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体结缕草组织培养再生体系。     

不同基本培养基和激素对籼稻成熟胚愈伤组织诱导的影响

以川香29B、中9B、金23B和Ⅱ-32B 4种籼稻的成熟胚为外植体,研究MS、N6、NB和NMB 4种基本培养基,2,4-D与KT或6-BA联合使用对籼稻愈伤组织诱导的影响.结果表明,4种籼稻在NMB基本培养基中愈伤组织的诱导率最高,平均诱导率为77.00％～96.00％,其中在NMB中的诱导效果最好,在4种不同基本培养基中愈伤组织总平均诱导率的高低顺序依次为川香29B、中9B、Ⅱ-32B、金23B.当3.0mg/L 2,4-D与不同浓度的KT或6-BA联合使用对,KT浓度为0.1 mg/L对,川香29B和中9B愈伤组织诱导率高;对于Ⅱ-32B,KT浓度为0.6 mg/L愈伤组织诱导率较高;6-BA浓度为0.4 mg/L时,川香29B愈伤组织诱导率最高;对于中9B和Ⅱ-32B,添加0.1 mg/L的6-BA最有利于愈伤组织的诱导;而对于金23B,无论是添加KT或6-BA都会抑制愈伤组织的诱导.     

不同穗型籼粳杂交稻F1代花药培养条件的优化

以直立穗型沈农265粳稻与泸恢99籼稻杂交F1为材料,通过筛选与优化基本培养基种类、低温处理时间及激素成分等培养条件来建立高效花药培养体系。结果表明:经过7~11d的10℃低温处理的花药组织愈伤诱导显著高于未低温处理或其他处理时间的材料;以SK3或M8为基本培养基都可以获得较好的诱导率;以SK3为基本培养基,采用复合激素水平为2 mg.L-1 2,4-D+1 mg.L-1 NAA+0.2 mg.L-1 6-BA的愈伤组织诱导培养基获得最高23.22%的诱导率;以MS为基本培养基,复合激素水平为4 mg.L-1 KT+1 mg.L-1 NAA+0.5 mg.L-1 6-BA的分化培养基上获得最高70.66%的分化率。     

基于均匀设计优化绶草体细胞胚胎发生发育体系及扫描电镜观察

以绶草Spiranthes sinensis茎尖为外植体,应用均匀设计法对各步骤各主要因子和水平的作用进行了试验探讨.结果表明,绶草茎尖胚性愈伤组织诱导的适宜培养基为:LS+6-BA0.78 mg.L-1+NAA2.0 mg.L-1,诱导率为98.7%;体胚发育及植株再生的适宜培养基为:LS+6-BA1.00 mg.L-1+IAA0.08 mg.L-1.在合适的培养条件下,体胚萌发率达到99%,萌发的体胚成苗率达到100%.扫描电镜的观察证实了绶草体细胞胚胎再生的实质.     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生体系的研究

以小麦的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生.研究结果表明,在MS+2,4-D(3.0 mg/L)+VB1(1.0 mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为72.3%,但愈伤组织质量较差;在低浓度2,4-D和添加了ABA的继代培养基中,愈伤组织质量明显改善,胚性愈伤组织增加.筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(4.0 mg/L)+NAA(0.3 mg/L)中,分化率达73.18%.该研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体的小麦组织培养再生体系.     

牡丹花药诱导愈伤组织

以牡丹品种‘凤丹’的带花丝的花药为外植体,诱导其产生愈伤组织,利用不同发育时期的花药诱导愈伤组织,确定了最佳的花药发育时期为单核中期,利用单核中期的花药,在确定合适激素配比的基础上,从不同的蔗糖质量浓度、4℃条件下不同处理时间等方面对花药愈伤组织诱导的影响进行了系统研究。结果表明:花药诱导愈伤组织合适的激素组合为MS+2,4-D2.0 mg.L-1+6-BA1.5 mg.L-1+NAA1.0 mg.L-1;花药在蔗糖质量浓度为6%、4℃条件下处理8 d时,愈伤组织的诱导率最高可达50.8%,优化了牡丹花药愈伤组织培养组合。