利用正交法研究桑树叶片组织培养的影响因素

通过正交实验,研究了５种不同因素（ＩＡＡ、ＮＡＡ、ＢＡ、ＫＴ、ａｇａｒ）配歙地桑树叶的不定芽分化率的诱导,筛选出了最佳诱导桑树叶片不定芽分化率培养基为ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ＋２ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋５ｍｇ／Ｌ ＫＴ＋６ｇ／Ｌ琼脂。     

蓝玉簪龙胆茎段的组织培养技术

采用西藏著名野生花卉蓝玉簪龙胆茎段为组织培养材料。通过多次试验后确定,蓝玉簪龙胆的启动培养中适宜的培养基为ＭＳ＋ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ．＋ＢＡ０．４～０．５ｍｇ／Ｌ,或者为ＭＳ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ;继代培养阶段的适宜培养基为ＭＳ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ;生根阶段的适宜培养基为１／２ＭＳ＋ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ。为蓝玉簪龙胆在组培条件下大量繁殖     

矮牵牛的快速繁殖技术

以矮牵牛为试材,筛选了快速繁殖优良苗木时的最适基本培养基浓度及激素条件．结果表明分化培养时的最适培养基为１／４ ＭＳ＋ ＢＡ０ ．５ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０ ．０２ ｍｇ／Ｌ;增殖培养时为ＭＳ＋ ＢＡ０ ．５ｍｇ／Ｌ＋ ＩＢＡ０ ．２ ｍｇ／Ｌ;诱导根系培养时为１／２ ＭＳ＋ ＩＢＡ０ ．５ ｍｇ／Ｌ＋ 活性炭１００ ｍｇ／Ｌ．生根培养基中添加活性炭有效地促进了矮牵牛根系的生长和发育,同时促进了叶片和茎的分化生长．     

苦丁茶树微繁殖技术的研究

以苦丁茶树腋芽为外植体进行培养，诱导腋芽萌发，产生丛芽，同时，试管内外结合法诱导生根，并大田移栽．结果表明：ａ．初代培养以Ｂ５＋ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．５ｍｇ／Ｌ固体培养基诱导腋芽萌发较好；ｂ．Ｂ５＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＺＴ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．２ｍｇ／Ｌ固体培养基能诱导大量丛芽产生；ｃ．适当剪除叶片并去掉顶芽能促进腋芽萌发；ｄ．小苗在附加ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ，或ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ的１／２ＭＴ，１／２Ｂ５培养基上培养１０～１５ｄ，插入蛭石上发根，成苗快；ｅ．土壤保湿、避免强光照，是小苗成活的关键．     

佛手瓜下胚轴离体培养及再生植株

对佛手瓜下胚轴再生植株、试管苗移栽及大田定植进行了试验，结果表明：在ＭＳ＋ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＬＨ２００ｍｇ／Ｌ培养基上容易形成下胚轴愈伤组织；愈伤组织分化芽的培养基为ＭＳ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ，诱导分化率可达５７５％；顶芽和带腋芽茎段生根的培养基分别为ＭＳ＋ＩＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ和１２ＭＳ＋ＩＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ，生根率分别为８１．８％和８３．３％；移栽培养土用土砂粪＝３２１的灭菌土，幼苗成活率达７５％；大田定值，平均单株结果８８．４３个，平均单果重２４０．２３ｇ．     

木立芦荟的离体快速繁殖

以木立芦荟（Ａ．ａｒｂｏｒｅｓｅｎｓ．Ｍｉｌｌ）为材料，研究芦荟的离体快速繁殖。在附加ＫＴ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ２．０ｍｇ／Ｌ的培养基上能获得无菌材料，但易引起玻璃化。在附加ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基中培养６０～７０天后产生小芽。分化与增殖阶段，在ＭＳ＋ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ培养基中增殖效果最好，繁殖倍数可达３．５６。将继代培养获得的大苗切割成单苗，     

玉米93供113-1花药愈伤组织的诱导及植株再生

本研究以玉米９３供１１３－１为材料，用ＭＳ、Ｎ６、Ｂ５和正１４四种培养基诱导花药愈伤组织，结果正１４培养基诱导率最高，为６．７４％，在激素的影响中，２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的激素组合愈伤组织诱导率最高。在愈伤组织的分化实验中，ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ的激素组合分化效果最好。     

大蒜花序轴离体培养的研究

以大蒜花序轴为外植体,研究了不同品种、不同生长阶段花序轴离体培养的差异和不同ｐＨ值、激素组成对花序轴培养的影响以及继代培养基种类、激素组成及糖原条件。结果表明,取未熟花序轴为外植体,其繁殖系数可高达７６;花序轴培养适宜条件为Ｂ５＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ,ｐＨ６．５;花序轴培养效率存在品种间差异;继代培养条件为ＭＢ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ,ＧＡ３０．０５ｍｇ／Ｌ,     

单双低油菜原生质体培养高效成株体系的研究

以甘蓝型单低和双低油菜为材料，对原生质体培养及植株再生进行了研究。结果表明：低温预处理无菌苗可提高原生质体活力。不同下胚轴部部位对原生质体的得率及分裂频率均有影响。用琼脂糖包理法，在不含ＮＨ４ＮＯ３及ＫＮＯ３，而加有丝氨酸和谷氨酰胺的Ｋｍ８ｐ培养基上培养原生质体获得了高频率再生愈组织。在Ｍ＋ＢＡ１ｍｇ／Ｌ分化培养基上两周后得到芽的分化，转至ＭＳ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋生根粉０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上     

TDZ对枣子离体培养繁殖的影响

厍有ＴＤＺ０．０１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ＋６ＢＡ１ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ的培养基中，对离体芽的繁殖系数、高于对照高于ＭＳ＋６ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ）．２ｍｇ／Ｌ的培养基２倍和３倍，枯梢率下降至零，在生根培养基１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ上，生根可达８０％以上。     

甘蓝型油菜与花椰菜种间杂种子房离体培养研究初报

在甘蓝型油菜×花椰菜种间杂种子房离体培养克服远缘杂交不孕的研究中,观察到不同基本培养基、离体培养时杂种子房的发育天数对杂交结实率有明显的影响。结果表明杂交授粉后12d的杂种子房离体培养效果最好,获得15粒种子,其中11粒种子能萌发成苗;培养基试验表明,1/2MS无机 B5有机 IAA1.5mg/L 蔗糖50g/L的培养基效果最好,结籽率达23%,种子萌发率达100%。     

白菜型油菜×羽衣甘蓝种间杂种的性状表现

人工合成甘蓝型油菜是拓宽油菜遗传育种种质资源的有效途径,也是研究芸薹属物种起源与演化重要的手段之一。对红籽白菜型油菜和黄籽羽衣甘蓝的人工合成杂种进行各种性状调查,研究结果表明:杂种具有亲本互补酯酶同工酶酶带,植株形态相似于甘蓝型油菜,具有较强的营养体杂种优势;植株高度自交不亲和,和几个近缘种杂交亲和性较差,籽粒颜色为红色;杂种和白菜型亲本移栽大田后,同时感染病毒病,但是杂种表现较强的耐病性。     

甘蓝型油菜与青花菜种间杂种子房离体培养研究

利用子房离体培养的方法克服了甘蓝型油菜与青花菜杂种后代杂种胚的衰亡,并通过组织培养技术获得了杂交后代。试验结果表明:授粉后15d的子房离体培养效果最好,获得7粒饱满种籽,其中2粒发芽,发芽率为0.29;1/2MS B5有机 IAA1.5mg/L 蔗糖50g/L为最佳的子房离体培养基,平均每个角果可得到杂种0.17粒,杂种发芽率可达66.7%;通过比较父母本和杂交后代性状,发现杂交后代的生物学性状偏向父本。     

甘蓝型油菜与A~nA~nC~nC~nC~oC~o六倍体的可交配性及杂交种菌核病抗性

【目的】利用甘蓝与甘蓝型油菜的六倍体杂交种为桥梁与甘蓝型油菜回交,从回交种的自交后代中选育理想的甘蓝型油菜个体,是将甘蓝遗传成分转入甘蓝型油菜的一种新策略。调查多份甘蓝型油菜与六倍体的可交配性及杂交种后代的育性,并以油菜菌核病抗性为例,以验证该策略在甘蓝型油菜遗传改良中的应用潜力。【方法】用菌核病抗性较强的野生甘蓝与甘蓝型油菜中双9号进行种间远缘杂交,采用胚挽救及染色体加倍技术创建A~nA~nC~nC~nC~oC~o六倍体。通过调查六倍体与9份甘蓝型油菜的杂交结实率,分析六倍体与甘蓝型油菜的可交配性。通过调查六倍体与9份甘蓝型油菜的杂交种F_1的自交、自由授粉结实率和菌核病抗性水平,反映杂交种F_1代的结实能力以及目标性状的改良情况。【结果】经鉴定,六倍体含有20条A基因组染色体和36条C基因组染色体,即染色体组成为A~nA~nC~nC~nC~oC~o。该六倍体同时具有甘蓝亲本和甘蓝型油菜亲本中双9号的遗传物质,其自交结实率和自由授粉结实率分别为5.6和8.6粒/角。六倍体与9份甘蓝型油菜杂交的结角率在69.1%—92.9%,每角粒数介于4.7-10.5,不同基因型的甘蓝型油菜与六倍体杂交结果率和每角粒数均存在显著差异(P0.01)。所调查的9份杂交种F_1的花粉育性达到正常水平,但自交结实率和自由授粉结实率分别为11.4-20.7粒和19.9-26.1粒,基因型间均存在显著差异(P0.0001),自交结实率和自由授粉结实率之间相关性显著(r=0.67*,P0.05)。综合2013和2014年的茎秆菌核病抗性鉴定数据,六倍体相对于中双9号的相对感病度为0.47,9份甘蓝型油菜的相对感病度在0.94—1.26,亲本基因型之间抗性水平差异显著(P0.0001)。9份杂交种F_1的相对感病度为0.56—1.10,均介于对应的双亲之间,且与甘蓝型油菜亲本的抗性水平显著相关(r=0.78*,P0.05)。其中5份杂交种F_1的相对感病度显著低于对应的甘蓝型油菜亲本(P0.05),即其抗性水平相对于原甘蓝型油菜亲本获得明显提高。【结论】A~nA~nC~nC~nC~oC~o六倍体有一定的结实能力,与甘蓝型油菜的可交配性受油菜基因型显著影响,但均易获得具有较好(一定)结实性的杂交种后代,目标性状在杂交种一代获得显著改良。     

Interspecific Hybridization of Brassica campestris x B.Oleracea Through Ovary Culture

Using three varieties of Brassica campestris, Hauarad (708), Maoshan-3 (714) and Youbai (715),as the maternal plants and one variety of Brassica oleracea Jingfeng-1 (6012) as paternal plants, crosses were made to produce interspecific hybrids through ovary culture techniques.The ovaries from the cross between B. campestris × B.oleracea (708 × 6012 and 714 × 6012) were cultured and ovary culture was more effective in terms of obtained seeds when ovaries were cultured in vitro at 9 d after pollination (DAP). While for the cross of 715 × 6012, it was better when ovaries in vitro cultured at 12 DAP. Among three cross combinations, the cross of 714 × 6012 showed the best response and 43 seeds per ovary were obtained. Among the media studied, the ovaries from the cross of 708 × 6012 cultured on MS media supplemented with 3.0 mg L-1 BA × 0.1 mg L-1 NAA showed better response, and its rate of seeds per ovary reached 44.0%.While the ovaries from the other two crosses (714 × 6012 and 715 × 6012) showed the best response when cultured on B5 media supplemented with 3.0 mg L-1 BA + 0.2 mg L-1 NAA, and the rates of seeds per ovary reached 72.0 and 60.0%, respectively. All seeds obtained from the three cross combinations were cultured on the MS media supplemented with 1.0 mg L-1 BA + 0.05 mg L-1 NAA,and the seeds from the cross of 715 × 6012 showed the best germination response and the percentage of germinations reached 66.7%. The regenerated plantlets were obtained from these seedlings after cultured on the MS media supplemented with 0.05 mg L-1 NAA. Cytological study showed that these regenerated plants were all true hybrids of B.campestris × B.oleracea.     

甘蓝型油菜和诸葛菜属间杂种的获得及其特性

采用人工授粉并结合子房培养的方法,进行了甘蓝型油菜和诸葛菜的正反属间杂交。授粉后5~10d,取子房培养于MS或B5培养基(添加6-BA、NAA、水解酪蛋白和活性碳),结果表明,子房培养有助于提高甘蓝型油菜和诸葛菜属间杂种获得频率。不同杂交组合,属间杂交可交配性不同。以诸葛菜为母本的所有杂交组合没有获得成功,但是在以甘蓝型油菜为母本的正交组合中获得了18株属间杂种,其中8株在形态上近似母本湘油15,10株来自于742与诸葛菜杂交组合,表现出完全的雄性不育,幼苗期叶色浅黄,生长发育缓慢,植株矮小,花瓣呈现乳白色,第一次分枝数少且分枝部位较高。形态学和微卫星标记分析表明,这些植株是真正的属间杂种。杂种后代植株(F2代或回交一代)表现多型性,多数植株的性状倾向母本甘蓝型油菜,可育;部分植株表现为双亲的中间型,部分可育;少数植株发育缓慢,不育。这些杂种植株可能是油菜遗传改良的宝贵资源。     

甘蓝型油菜花药培养技术研究

[目的]筛选甘蓝型油菜愈伤组织的最佳分化培养基,探讨甘蓝型油菜花药培养技术。[方法]在油菜始花期,取其主茎顶端蕾盘的中圈花蕾,将花药接种于B5+2,4 D 1.0mg/L+KT 1.5mg/L的培养基进行诱导,将诱导出的愈伤组织接种于不同配方的12种培养基进行分化培养。[结果]甘蓝型油菜花药培养取花粉处于单核后期至双核初期,对应于外部特征是蕾盘中圈10～15个花蕾,所产生的愈伤组织百分率最高(16%);12种不同配方的培养基中以B5+KT 2.0mg/L+BA 2.0mg/L+IAA 0.1mg/L或MS+KT 2.0mg/L+BA 2.0mg/L+IAA 0.1mg/L培养基上分化成苗最好,分化率分别为75%和70%,将分化的小苗置于1/2MS培养基上诱导生根,可长成完整幼苗。[结论]花药培养可以加速油菜育种进程。     

利用胚和胚珠的离体培养获得甘蓝型油菜与青花菜的种间杂种

以波兹南农业大学植物遗传育种系提供的甘蓝型胞质雄性不育油菜为母本与青花菜杂交 ,授粉后 1 9d,观察其种间杂交的有效性 ,并对其胚和胚珠进行离体培养。结果表明 :种间杂交的亲和性及胚珠退化时间随杂交组合不同而异 ,亲本的基因型对其有很大的影响。胚和胚珠的离体培养可有效地克服合子后的发育障碍获得种间杂种植株     

甘蓝型油菜下胚轴离体培养再生植株研究

[目的]为进一步通过基因转化获得预期优良性状的甘蓝型油菜提供借鉴。[方法]以甘蓝型油菜的下胚轴为外植体,研究不同苗龄、不同基因型、不同预培养条件以及各种生长调节剂组合对油菜外植体高频率再生的影响。[结果]试验中,7 d苗龄的甘蓝型油菜下胚轴再生频率可达35.83%;经3 d预培养处理的油菜下胚轴芽再生频率可提高至57.78%,油菜品种史力丰下胚轴的芽分化率较高,达35.00%,其次是N481-1,而N370-1的芽分化率最低;其最高分化率的激素组合为6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+TDZ 1.0 mg/L,达38.89%。史力丰品种6~8 d无菌种子实生苗的下胚轴在预培养基MS+2,4-D 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4.5 g/L上预培养3 d,在最适分化培养基MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO35.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4.5 g/L中培养,再生频率最高。[结论]建立了甘蓝型油菜下胚轴离体培养高频率再生植株模式。     

六倍体(A~nA~nC~nC~nC~oC~o)与白菜型油菜杂交可交配性及后代菌核病抗性

【目的】利用亲本种遗传资源是改良甘蓝型油菜的重要手段。以甘蓝型油菜与菌核病抗性甘蓝杂交合成的六倍体为桥梁,与大量的白菜型油菜杂交,合成杂种,探索改良甘蓝型油菜菌核病抗性的策略。【方法】采用菌核病抗病甘蓝(C01)与甘蓝型油菜(中双9号)杂交合成六倍体,通过分析六倍体的育性、菌病抗性和减数分裂行为来分析其作为桥梁材料转移菌核病抗性的可能性;将六倍体与110份白菜型油菜杂交,通过考察杂种发育和可交配性来分析六倍体与白菜型油菜杂交的可行性;通过鉴定杂种的苗期表型特征、自交结实率及离体茎秆的菌核病抗性来分析杂种在改良甘蓝型油菜遗传背景上的利用潜力。【结果】该六倍体的花粉育性为90.6%—92.7%,自交结实率为3—7粒/角果;菌核病抗性显著高于对照品种(中双9号);处于减数分裂后期I的花粉母细胞中,68.80%(86/125)的染色体分离比为28﹕28。110份春性、冬性和半冬性的白菜型油菜与六倍体杂交,授粉15 d后的胚珠发育正常,并且都能收获成熟种子,平均可交配性为(4.25±3.91)粒/角果。尽管不同基因型之间的可交配性存在显著差异,但是不同生态型的白菜型油菜与六倍体杂交的可交配性无显著差异(半冬性:(4.35±3.77)粒/角果,春性:(4.34±4.51)粒/角果,冬性:(4.01±3.43)粒/角果;P=0.44)。六倍体作为母本或者父本与白菜型油菜杂交都能结籽,而且没有显著性差异(六倍体为母本:平均结实率为4.27粒/角果;六倍体为父本:平均结实率为3.95粒/角果;P=0.69)。六倍体与白菜型油菜杂交创建的杂种,苗期形态似甘蓝型油菜,但是表型变异丰富;杂种都能自交结籽,平均自交结实率为(7.72±4.45)粒/角果;来自不同生态型的白菜型油菜与六倍体合成的杂种自交结实率无显著性差异(冬性白菜型油菜合成的杂种平均自交结实率:(8.07±3.43)粒/角果,半冬性:(7.88±4.64)粒/角果,春性:(6.41±3.00)粒/角果,P=0.95)。经过两年的离体茎秆菌核病抗性鉴定,6份杂种的菌核病发病程度两年均显著低于中双9号(P0.05)。【结论】以六倍体为桥梁能有效地将甘蓝型油菜亲本种的优良性状导入到甘蓝型油菜中。