首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到19条相似文献,搜索用时 128 毫秒
1.
牡丹基因组AFLP银染反应体系的建立和优化   总被引:9,自引:1,他引:8  
采用改进的SDS方法,从牡丹成熟叶片中提取基因组DNA,所得DNA样品的A260/A280值在1.7~1.8之间,琼脂糖凝胶电泳主带清晰、DNA纯度高、较少降解、不含酶反应抑制剂,可被MseⅠ和PstⅠ两种限制性内切酶完全酶切.通过酶切连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验过程,成功建立了牡丹品种AFLP银染反应体系,得到了清晰的指纹图谱.对扩增结果进行聚类分析,得到了23个牡丹品种的聚类分析图.  相似文献   

2.
悬铃木AFLP分子标记技术体系的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
采用改进的CTAB方法,从悬铃木叶片中提取基因组DNA,所得DNA样品的A260/A280值为1.7~1.9,琼脂糖凝胶电泳主带清晰、DNA纯度高、较少降解、不含酶反应抑制剂,可被MseⅠ和PstⅠ两种限制性内切酶完全酶切,从20对引物中筛选出6对带型分布均匀、多态性高且分辨能力强的引物,分别为: M74P50,M89P57,M74P26,M36P16,M80P66,M23P66.通过酶切连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验过程,成功建立了悬铃木AP反应体系,得到了清晰的指纹图谱,试验结果重复性好.  相似文献   

3.
为了构建运城盐湖土壤微生物宏基因组文库,文章对盐湖土壤微生物总DNA的提取方法进行了比较和探索,通过改良6种植物DNA的提取方法,分别提取了盐湖土壤微生物总DNA,并采用紫外分光光度法、凝胶电泳、内切酶分析和PCR扩增法检测了各个方法所提取的DNA样品的质量.结果表明:改良后的方法3是较适合提取运城盐湖土壤微生物总DNA的方法.采用该方法所得DNA的OD260/280值为1.883,DNA浓度和得率分别为18.1 ng·μL-1和72.4 ng·g-1;DNA片段长度约为23 kb,琼脂糖凝胶电泳条带清晰,无降解;DNA能被EcoR Ⅰ完全酶切,并可用于PCR扩增分析.  相似文献   

4.
运用CTAB法、CTAB改良法1、CTAB改良法2、氯化苄法、裂解法、改良SDS法、改良尿素法等7种方法提取北冬虫夏草基因组DNA,发现CTAB改良法2(提纯时加入低浓度乙醇)提取的DNA的OD260/OD280都在1.9以上,能获得清晰的PCR扩增图谱,能被HindⅢ酶切消化.  相似文献   

5.
运用CTAB法、CTAB改良法1、CTAB改良法2、氯化苄法、裂解法、改良SDS法、改良尿素法等7种方法提取北冬虫夏草基因组DNA,发现CTAB改良法2(提纯时加入低浓度乙醇)提取的DNA的OD260/OD280都在1.9以上,能获得清晰的PCR扩增图谱,能被HindⅢ酶切消化.  相似文献   

6.
2种改进的未知细菌DNA提取方法   总被引:2,自引:0,他引:2  
[目的]研究细菌DNA的提取方法,为未知细菌的研究提供方法支持。[方法]从DNA的纯度、基因组DNA的酶切效果、16SrRNA基因扩增等方面比较了细菌DNA的2种提取方法。[结果]方法Ⅰ提取的DNA的纯度(OD260/OD280)为1.51-1.65,6个样品的平均值为1.56。方法Ⅱ提取的DNA的纯度(0D260/OD280)为1.25~1.41,6个样品的平均值为1.33。方法隈取的DNA纯度较高,但其试验步骤稍微繁琐。方法Ⅱ的试验步骤稍微简单,但试验时间较长。2种方法均提取到长度大于21kb)的细菌基因组DNA。对2种方法提取的DNA进行PCR扩增都得到长度约600bp的条带,效果较好。[结论]2种方法提取的DNA质量均较高,都可以直接用于RFLP、PCR等研究。  相似文献   

7.
采用改良CTAB法,提取了23个梨品种基因组DNA。结果表明:所提取DNA产率在200μg/g鲜叶以上,大部分梨品种OD260/OD280在1.8左右,用于PCR-RFLP分析时,PCR扩增产物谱带清晰,且PCR扩增产物能被相应的限制性内切酶酶切。  相似文献   

8.
RAPD分析中大豆基因组DNA的快速制备   总被引:2,自引:0,他引:2  
提出一种简便、实用的DNA提取方法,DNA得率可达到80μg/g,所得DNA样品的OD260/OD280值在1.8以上,且不含PCR反应抑制剂,RAPD扩增结果良好,该方法提取的DNA产量和质量均能够满足基因工程操作的要求。  相似文献   

9.
改良CTAB法提取薰衣草基因组DNA研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
任艳利  腊萍  张相峰  尚天翠 《安徽农业科学》2011,39(22):13292-13293,13320
[目的]寻找高效、快速的薰衣草(Lavandula pedunculata)基因组DNA提取方法。[方法]通过改良CTAB法提取薰衣草3个品种的基因组DNA。[结果]经检测,所提样品OD260/OD280值在1.85左右,得率为454.50~1 093.35μg/ml,电泳条带清晰,无明显的拖尾现象;Eco RI酶切基因组DNA图谱表明,提取的DNA能被限制性内切酶完全酶切;以提取的DNA为模板,用1对随机引物进行RAPD-PCR,发现检测条带清晰,说明获得的DNA质量较高,可以满足相关的分子生物学研究需要。[结论]该研究可以为薰衣草分子生物学的后续试验的开展奠定理论基础。  相似文献   

10.
以成熟的中国春小麦叶片为材料,采用改进的高盐-低pH方法提取叶绿体DNA,经琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增,结果表明:所提取的小麦叶绿体DNA纯度高(OD260/280=1.89,OD260/230=2.23),适于PCR反应、基因扩增和酶切鉴定等分子操作,为深入研究小麦叶绿体基因组奠定了基础。  相似文献   

11.
一种快速高效适于橡胶树叶片AFLP分析的DNA提取方法   总被引:1,自引:0,他引:1  
以近200个巴西橡胶树种质材料(品种及无性系)幼嫩叶片为材料.采用改良的cTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究。结果表明,该方法提取的DNA溶液无色透明,DD260/DD280的比值均为1.8~2.0,1%琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,无降解现象,KNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI—CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的巴西橡胶树幼嫩叶片基因组总DNA较适于AFLP分析。  相似文献   

12.
[目的]探索基于AFLP的拮抗链霉菌DNA模板制备方法及其扩增体系,为AFLP技术在链霉菌乃至放线菌资源分析中的应用提供依据。[方法]以改进的CTAB法提取DNA,利用Pst I/Mse I型AFLP试剂盒及其反应体系进行扩增,采用5%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析扩增结果。[结果]提取了10个拮抗链霉菌菌株的基因组DNA,0.8%琼脂糖凝胶电泳检测显示其主带清晰,片段大小为37.64-40.86Kb,无降解现象,亦无RNA残留;其OD260/OD280为1.625-1.833;Pst I/Mse I双酶切产物琼脂糖电泳呈弥散荧光长带,说明酶解充分;筛选出的3对引物对DNA模板的扩增谱带清晰,多态性丰富。[结论]该研究建立的DNA模板制备方法及其扩增反应体系可用于链霉菌的AFLP分析。  相似文献   

13.
拮抗链霉菌AFLP分析技术体系的研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
1材料与方法 1.1菌株供试拮抗链霉菌共10个菌株,均由该课题组分离自京郊菜田土壤和天然次生林土壤(表1)。  相似文献   

14.
[Objective] The aim of this study was to investigate the preparation method and amplification system of antagonistic streptomyces DNA templates based on AFLP assays, and also provide a basis for the application of AFLP technology in the analysis of streptomyces or even actinomyces. [Method] The DNAs were extracted by the modified CTAB method and amplified by the Pst Ⅰ/Mse Ⅰ AFLP kit and its reaction system. The amplified products were analyzed by the denatured polyacrylamide gel electrophoresis. [Result] The genomic DNAs of ten antagonistic strains of Streptomyces were extracted and tested. The result of 0.8% agarose gel electrophoresis showed that the major DNA bands were clear without degradation and RNA residue, with the fragment sizes ranging from 37.64 to 40.86 Kb. By ultraviolet spectrophotometry, the OD260/OD280 values varying from 1.625 to 1.833 were obtained. Furthermore, the agarose gel electrophoresis of DNA products digested by Pst Ⅰ/Mse Ⅰ presented the dispersed fluorescent long band, which indicated that the enzymatic hydrolysis was fully carried out. The amplified bands of DNA templates by the screened three pairs of primers were clear with rich polymorphism. [Conclusion] The preparation method and amplification system of DNA template established in this study can be used in the AFLP analysis of Streptomyces.  相似文献   

15.
大白菜基因组DNA的提取及AFLP反应体系的建立   总被引:8,自引:0,他引:8  
1材料与方法1.1材料供试大白菜种质材料32份,分别由北京市农林科学院蔬菜研究中心品种资源库及蔬菜研究中心大白菜育种课题组和中国农业科学院蔬菜花卉研究所国家种质资源中期库提供。材料编号、品种名称、来源地见表1。  相似文献   

16.
杨振华  张靠稳  马爱瑛 《安徽农业科学》2010,38(20):10557-10559
[目的]研究适合于贺兰山紫蘑菇(Corinarius rufo-olivaceus)基因组DNA的提取方法。[方法]通过采用改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、SDS法、Doyle-Doyle法和KI法5种基因组DNA提取方法,分别提取贺兰山紫蘑菇的基因组DNA,用DU800核酸蛋白检测仪测定其DNA含量、浓度和纯度,并通过琼脂糖凝胶电泳进行提取结果比较。[结果]5种不同的提取方法均能提取该紫蘑菇的基因组DNA,其中KI法提取的DNA纯度、浓度和得率为最好。[结论]KI法是贺兰山紫蘑菇(C.rufo-olivaceus)DNA提取的适宜方法,该法具有简单、便捷、省时、适合基因组DNA大量提取的特点。  相似文献   

17.
[目的]研究适于AFLP分析用的桃韧皮部DNA提取方法,为冬季无法获得幼叶和其他幼嫩材料时从事桃基因组研究打下了基础。[方法]以8种野生桃冬季1年生休眠枝的韧皮部为试验材料,采用改进的CTAB法提取基因组总DNA,与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析,并进行了AFLP验证分析。[结果]从野生桃韧皮部提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA纯度和完整性都较好,OD260/OD280均为1.8~2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化,其AFLP分析条带清晰,多态性好。[结论]该法提取的野生桃韧皮部基因组总DNA完全适于AFLP分析。  相似文献   

18.
基于改进CTAB法提取空间诱变柱花草总DNA研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
[目的]用改进CTAB法提取空间诱变柱花草的总DNA。[方法]以柱花草幼苗叶片为材料,采用改良CTAB法提取柱花草总DNA。[结果]所提的DNA凝胶条带清晰,无拖尾现象,浓度在406.6~857.3ng/μl,0D260/DD230检测值在1.96—2.18,OD260/0D280检测值在1.76—1.98。所提DNA适用于ISSR-PCR。[结论]该方法具有简便、快速、高效的特点。  相似文献   

19.
利用改进的CTAB法提取了柑类、桔类、橙类及部分柑桔杂交实生后代等120多个品种的基因组,结果表明:该方法提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8~1.9,1%琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象,DNA的纯度和质量能满足AFLP分析要求.  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号