马立克氏病病毒囊膜糖蛋白I原核表达产物单克隆抗体的制备

以重组质粒pGEX-MDgI在大肠杆菌BL21中表达马立克氏病病毒（MDV）特超强毒648A株的囊膜糖蛋白1（gI_完整基因，通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳分离相应的蛋白质条带，切下并碾碎后作免疫原免疫小鼠，用以制备针对MDV 648A gI糖蛋白的杂交瘤细胞株，以MDV感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）为检测抗原，用间接免疫荧光抗体反应（IFA）筛选到9株杂交瘤细胞株，选其中3株2H7，6F10，2H2制备腹水，其IFA效价均达到1：1500以上，与I型MDV不同现型的毒株CVI988／Rispens,GA,RB1B,Md11株感染的CFF测IFA，均呈现特异性荧光，但反应强度不同，腹水经PBS稀释后与MDV感激的CEF做斑点酶联免疫吸附试验，呈特异性显色，对MDV感染的CEF裂争物做Westernblotting，可检测出1 条特民性条带。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白I原核表达产物单克隆抗体的制备

以重组质粒 p GEX-MDg I在大肠杆菌 BL2 1中表达马立克氏病病毒 (MDV)特超强毒 64 8A株的囊膜糖蛋白 I(g I)完整基因 ,通过 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离相应的蛋白条带 ,切下并碾碎后作为免疫原免疫小鼠 ,用以制备针对MDV64 8A g I糖蛋白的杂交瘤细胞株。以 MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)为检测抗原 ,用间接免疫荧光抗体反应(IFA)筛选到 9株杂交瘤细胞株 ,选其中 3株 2 H7、6F1 0、2 H3制备腹水 ,其 IFA效价均达到 1∶ 1 50 0以上 ;与 I型 MDV不同致病型的毒株 CVI988/ Rispens、GA、RB1 B、Md1 1株感染的 CEF测 IFA,均呈现特异性荧光 ,但反应强度不同。腹水经 PBS稀释后与 MDV感染的 CEF做斑点酶联免疫吸附试验 ,呈特异性显色。对 MDV感染的 CEF裂解物做 West-ern-blotting,可检测出 1条特异性条带     

Molecular Comparisons of Marek＇s disease virus strains of different pathotypes for their gⅠ, gE, pp38 and meq genes

Five to ten serotype I Marek‘ s disease virus (MDV1) strains of different pathotypes were compared for their DNA sequences of gⅠ, gE, pp38 and meq genes. The reference strains were vMDV GA and JM, vvMDV RB1B and Mdll(pl6), vv MDV strains 648A and 584A, vaccine strain CVI988/Rispens; Chinese strains were: v MDV strain N, vvMDV strain G2, vaccine strain 814. Only random aa changes were found in 12 positions within gE of 497 aa among 10 analyzed strains and in 10 positions within gⅠ of 355 aa among 5 strains. There was no relationship found between virus pathotypes and aa changes of both glycoproteins. The aa changes happened in 14 positions within meq of 339 aa among 5 compared strains. But a proline deletion at aa # 194 in a proline- rich domain of meq were shared by two vaccine strains CVI988/Rispens and 814, the latter was a non - pathogenic vaccine strain of serotype 1 isolated in 1983 in China. In another hand, vv MDV strains 648A demonstrated 5 unique aa changes and 4 of them also located in the proline - rich region. The pp38 was very conservative among sequenced 10 strains, there were only two positions at # 107 and # 109 with an altered in its 290 aa. All tested MDV1 strains had glufamine at # 107, instead, only vaccine CVI988 had arginine at the position and lost its epitope reactive with Mab H19, to which all ether tested MDV1 strains were positive. However, CVI988 and vMDV GA shared a Mab T65 - recognized epitope when there was glyeine at aa # 109. It was glutamie acid at aa # 109 in all other MDV1 strains which were not reactive with Mab T65. It seems like that there is some relationship between pathotypes and sequences of pp38 and meq, but more strains need to be compared.     

鹅细小病毒单克隆抗体的制备及抗原表位区分析

采用杂交瘤细胞融合技术,获得3株能稳定分泌抗GPV特异性抗体的杂交瘤细胞株,免疫印迹结果表明:这3株单抗均能与纯化的GPV病毒子及重组VP3蛋白发生特异性反应,而与鸭肝炎病毒、鸭细小病毒、鹅源新城疫病毒无交叉反应。采用真核表达载体pCAGGS对VP3基因进行分段克隆并转染COS-1细胞表达,用单抗介导的间接免疫荧光(IFA)进行检测,结果表明:3E8株单抗与VP3蛋白135～332氨基酸(aa)和322～535aa肽段均能发生特异反应,因此可以推定3E8株单抗识别的抗原表位在VP3的322～332aa上。     

马立克氏病病毒河南分离株Meq基因的克隆与序列分析

【目的】了解马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)河南分离株Meq基因的分子特性,为中原地区MDV流行情况提供较详细的信息,为更好地防控MD奠定基础。【方法】应用PCR方法分别扩增了17株MDV河南省野毒分离株的Meq基因片段,克隆测序后,将各毒株Meq基因序列与vv+MDV 648A株、vvMDV RBIB株、vMDV GA株、mMDV疫苗株CVI988株和814株的Meq基因序列进行比对分析。【结果】17株分离株中除HNGS201和HNLC503的Meq基因扩增产物较预期稍大外,其余15个的片段长度为1 020bp,与预期长度相符;MDV河南分离株之间及其与参考毒株Meq基因的核苷酸同源性为99.0%~100%,部分毒株Meq基因的氨基酸序列有10个位点的氨基酸存在规律性突变;MDV河南分离株和参考株共组成3个进化分支,其中强毒株GA、RB1B和648A位于一个分支,分离株HNGS201、HNLH304、HNLC503与mMDV毒株CVI988和814位于同一分支,其余14株分离株位于另一个较大的分支。【结论】河南省可能流行着不同毒力的MDV,一些mMDV毒株的Meq蛋白存在59个或60个氨基酸的插入。     

不同H9N2亚型禽流感病毒分离株致病力研究及HA抗原性变异分析

 【目的】了解近年来中国H9N2亚型禽流感病毒毒力变化和抗原性变异的特点，【方法】对分离于1998—2008年间的25株H9N2亚型禽流感病毒分离株进行了EID50、ELD50、MDT、ICPI、IVPI和8周龄SPF鸡人工感染排毒试验，测定了部分分离株与抗H9N2亚型禽流感病毒Hp参考株HA蛋白单抗2A4和F6的血凝抑制（HI）和中和反应特性，对具有不同反应特性分离株的HA基因进行了序列分析。【结果】不同分离株呈现致病力差异，具多态性特征，3#、12#和14#分离株致病力偏强，能引起部分SPF鸡发病和死亡，人工感染8周龄SPF鸡排毒时间更早，排毒期更长。3#和12#分离株与单抗2A4和F6呈现特殊的反应特性，单抗不能抑制3#和12#的血凝特性，也不能中和病毒感染CEF细胞。HA蛋白氨基酸序列分析表明，3#和12#分离株145位氨基酸发生漂变（S→N），导致与单抗的血凝抑制反应特性丢失，说明该位点（S145）为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位，是血凝抑制抗体结合位点。S145N的漂变导致在145—147位氨基酸多出一个糖基化位点NGT，可能是分离株毒力增强的原因。【结论】本研究结果表明，H9N2亚型禽流感病毒呈现变异趋势，出现了有致病力和抗原性变异流行毒株。S145为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位，但有该位点漂变导致的抗原变异毒株出现，并可逃避免疫作用，对该病的防控提出了新的挑战。     

抗番鸭呼肠孤病毒(MDRV)单克隆抗体的制备及应用

【目的】制备抗番鸭呼肠孤病毒（MDRV）的单克隆抗体，建立番鸭呼肠孤病毒病的间接免疫荧光（IFA）快速诊断方法。【方法】制备MDRV抗原，用之免疫Babl/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，采用IFA和ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株，体内诱生腹水法制备单克隆抗体，检测其生物学特性，应用制备的单克隆抗体建立MDRV IFA快速诊断方法。【结果】筛选到237-11，45-12和3-H3 3株特异性好并能稳定分泌抗MDRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中45-12株单抗为IgM亚型，237-11和3-H3株单抗为IgG3亚型。45-12和3-H3 2株单抗具有ELISA特性，效价分别为10-4和10-5；237-11株单抗具有IFA特性，效价达10³。特异性测定结果显示，3株单抗仅与MDRV反应，而与正常细胞培养物（MDEF）、番鸭细小病毒（MPV）、鹅细小病毒(GPV)、禽呼肠孤病毒(ARV) 、鸭副黏病毒（PMV）和鸭肝炎病毒（DHV）均无交叉反应。应用抗MDRV单抗建立的IFA方法与病毒分离法（VI）的符合率为91%。【结论】筛选到2株具有ELISA特性、1株具有IFA特性且能分泌抗MDRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，建立了MDRV IFA快速诊断方法，为番鸭呼肠孤病毒病的快速诊断奠定了基础。     

兔出血症病毒VP60蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

以纯化的重组兔出血症病毒核衣壳蛋白(VP60)为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备抗衣壳蛋白的单克隆抗体,获得了2株能稳定分泌抗VP60蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(AE11和AH4).分别利用Western blot、间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)等方法对单抗的免疫活性和特异性进行检测,结果证明,此两株单抗均能识别重组的VP60和天然病毒的衣壳蛋白,而IFA结果显示只有AE11能和RHDV反应,可观察到强烈的特异性绿色荧光,表明成功制备了抗RHDV的VP60特异性单抗.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单抗AG1的生物学特性及夹心ELISA诊断方法的建立

用纯化的猪繁残呼吸综合征病毒沪1株（PRRSV-S1）病毒液作抗原，免疫BALB/C小鼠，获得1株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株，命名为AG1。ELISA交叉试验和阻断试验表明，AG1具有高度特异性。AG1可与PRRSV-S1、美洲株VR-2332、欧洲株LV反应，对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价AG1属于IgG2b，腹水效价在1：10^-3-10^-5之间。AG1有100条染色体，琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b。Western bloting试验表明AG1是针对N蛋白抗原表位的特异性单抗。以AG1为捕捉抗原抗体和酶标抗体，建立了快速检测PRRSV抗原的单抗夹心ELISA法，该方法具有快速、灵敏、准确、广谱等特点。     

含NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的真核表达

为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移质粒载体已经进入细胞DNA;转染转移质粒载体 pUS10F后的293 T细胞所表达的NDV F基因产物抗原性较好,能够与抗NDV的标准血清反应。确定的最佳转染条件为:DNA 3μg／mL,转染后48 h外源基因在细胞中的表达量最高,在6孔板和96孔板中细胞数量分别以 2×105／孔和1×101／孔的转染效果最好。     

猪大肠杆菌病病原学研究进展

猪的大肠杆菌病主要由产肠毒大肠杆菌（ＥＴＥＣ）引起，包括仔猪黄痢、仔猪白痢、猪水肿病等就ＥＴＥＣ的毒力因子和Ｏ抗原群，猪的日龄及其肠道受体与这些疾病的关系作了比较详尽的综述并讨论了可能存在的其它猪大肠杆菌病病型     

舌感受器的比较组织学观察

本文用比较组织学方法,观察大量舌组织切片,初步发现:舌感受器随着动物进化发展在种类与形态结构上有较明显的差异,两栖类最为简单,只看到游离神经末梢;啮齿、偶蹄和食肉类较复杂,有游离神经末梢、丛束状神经末梢、味蕾和肌梭等;人类最为高级,结构最为复杂,增加了肌间结缔组织感受器、肌束膜感受器、血管旁感受器和肌腱感受器等。此外,本文还对上述感受器进行了生理机能、组织发生和生物进化方面的分析和讨论。     

猪后躯被检淋巴结的形态学观察

观察测量屠宰肉尸452头,其中440头为有无腹股沟深淋巴结的形态学观察;10头为后躯被检淋巴结的形态学观察;2头为管道注射,观察引流区。结果:1.猪有腹股沟深淋巴结,在统计230头,460例肉尸中,有24头存在,占10.43％。腹股沟深淋巴结平均重0.88±0.38克,平均大小为2.82±0.70×1.64±0.36×0.47±0.13厘米;汇集股部内侧和下腹部的淋巴液,注入髂内侧淋巴结。2.髂内侧淋巴结平均重1.87±0.71克,平均大小为3.19±0.80×1.38±0.42×0.55±0.18厘米;输入管数为5—6条,管外径为0.09±0.04厘米,输出管数为1—3条,管外径为0.24±0.10厘米。3.髂内侧淋巴结收纳腘浅淋巴结,腹股沟浅淋巴结和髂下淋巴结引流区的淋巴液和部分盆腔内脏的淋巴液。管辖范围广,位置恒定,淋巴结较大,浅在胴体脏面,易找到,不破坏商品,不影响商品的外观,是屠宰肉尸后躯被检的主要淋巴结。     

黄瓜花叶病介体蚜虫种群空间格局动态分析

本文采用聚集指标、聚集指标的模糊聚类分析和空间格局的回归分析等方法,对黄瓜花叶病传毒介体——瓜蚜自然种群动态进行分析,春秋两季瓜蚜种群均为聚集分布;秋季瓜蚜种群空间格局聚集性可划分为前、中、后三种类型;春季瓜蚜分为前、后两种类型。     

多发风险模型的负盈余持续时间分布的计算

本文对多发风险模型的负盈余持续时间进行了计算,从数值上对古典风险模型与多发风险模型的负盈余持续时间进行了比较,进一步说明了二者的不同之处。     

利用积分号与极限号互换定理推导欧拉──普洼松积分

本文从另一个角度出发,讨论并证明了概率论中常用到的欧拉—普洼松积分。     

鸡腿菇菌丝体的酯酶同工酶研究

选择碳源（玉米粉）、氮源（蛋白胨）、pH、温度、培养时间等培养条件,采用L27（5^5）五元二次回归正交试验．液态培养鸡腿菇菌丝体。同工酶分析结果表明,鸡腿蘑菌丝体酯酶（EST）同工酶在不同培养案件间存在差异。     

杂交茄子新品种"呼茄5号"的选育

呼茄5号是以9101-1-3-3为母本,8802-1-2-2为父本配制的1代杂种。该品种中熟,始花节位7节~8节。果实椭圆形,果皮黑红紫色,光泽度极强,耐老化,萼片带绿色,果肉紧密,绿白色,商品性好。平均单果重量450g左右,露地每667m2产量4 500kg左右,适宜露地及保护地栽培。     

光敏不育水稻杂种后代育性鉴定方法的探讨

水稻套袋测自交结实率因光强减弱、通气不良和湿度增高的穗部环境,不利于光合作用,并助长霉变感病,妨碍正常结实,使测得的实际值偏低,不适于不育水稻育性的群体遗传分析.在套袋作业未臻完善的条件下,掌握不育株的标准在田间逐株鉴定自然结实率,仍为保证不育水稻育性鉴定准确性的简易方法。