产Ⅱ a类细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

从自制的发酵肉、酸菜汁、黄瓜汁、大麦汁、玉米汁等以及市售鲜奶、传统干酪、红茶中分离出352株乳酸菌,通过琼脂平板扩散法筛选到l株对单核细胞增生李斯特菌和大肠杆菌有明显抑制作用的乳酸菌菌株.排除有机酸、过氧化氢等的干扰后,乳酸菌发酵液离心后的上清液仍有抑菌活性,用胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶处理后失去抑菌活性,从而确定产生的抑菌物质具有蛋白质性质,是一种细菌素.该细菌素具有热稳定性,在pH6.5,121℃热处理15 min时,抑菌活性仍保持90%以上.经过生理生化试验和16S rRNA基因序列相似性分析,鉴定BC-3菌株为屎肠球菌,命名.Enterococcus.faecium BC-3.其产生的细菌素对单核细胞增生李斯特菌有特异活性,并且具有热稳定性,根据细菌素的分类特征,该细菌素属于Ⅱa类细菌素.     

腌制臭鸡蛋中产细菌素乳酸菌的筛选及其特性分析

为获得产细菌素的乳酸菌,本研究对自然腌制臭鸡蛋中的乳酸菌进行分离筛选;并进行抑菌、有机酸排除、过氧化氢排除和蛋白酶敏感性试验,及温度、pH、表面活性剂和金属离子对抑菌物质的影响研究。从样品中共获得27株乳酸菌,产细菌素的乳酸菌4株,其中菌株FJY-1抑菌能力最强。经形态学、生理生化与16S rDNA基因序列分析,鉴定该菌株为屎肠球菌。其无细胞上清液在pH 2~9范围内处理2h后能维持60%以上的抑菌活性,对热稳定(121℃,30min),经胃蛋白酶处理后抑菌活性消失;该细菌素对沙门氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等均有较强的抑制作用,并证明其对指示菌的作用方式是杀菌,该细菌素在食品防腐中具有较强的应用潜力。     

产广谱乳酸菌素乳酸菌的选育

该研究从自然界中筛选出产广谱乳酸菌素的乳酸菌,利用单层琼脂平板打孔抑菌法筛选。所筛选的产细菌素C1菌株鉴定为乳球菌属(Lactococcus),排除有机酸和过氧化氢等干扰后,发酵上清液仍有较强的抑菌性质;用胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后,发酵上清液的抑菌性急剧下降,证明该乳酸菌素具有蛋白质性质,是一种乳酸菌细菌素。体外抑菌实验表明,该乳酸菌素对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制作用,具有广谱抑菌性。     

新疆高寒牧区产细菌素低温乳酸菌的筛选

从新疆高寒牧区牧民自制乳制品分离得到45株乳酸菌。采用排除有机酸和过氧化氢中和试验对分离的乳酸菌进行处理,结果表明三株乳酸菌有抑菌特性。用胰蛋白酶对发酵液进行处理后,其抑菌活性大大降低,说明代谢产物是具有蛋白属性的抑菌物质,判断为细菌素。鉴定结果初步认为,这三株乳酸菌分别属于植物乳杆菌、戊糖乳杆菌和乳酸乳球菌。     

一株产细菌素乳酸菌的筛选及细菌素特性研究

[目的]研究从酸马奶酒中筛选出的1株产细菌素的乳酸菌的细菌素特性.[方法]从内蒙古地区酸马奶酒中分离到19株乳酸菌,采用牛津杯双层平板扩散法,排除有机酸、过氧化氢的干扰后,经蛋白酶敏感性试验,筛选出1株产细菌素的乳酸菌菌株XMD6.[结果]通过形态学特征、生理生化试验及16S rRNA基因序列分析,鉴定为坚强肠球菌(E.durans).其所产细菌素在80℃对热稳定,显示抑菌活性pH范围为2～7.抑菌谱试验表明,该菌能抑制食品中常见的革兰氏阳性、革兰氏阴性的致病菌及腐败菌,具有较广的抑菌谱.[结论]研究可为今后开发利用新型细菌素防腐剂提供理论依据.     

鸡源乳酸菌的分离鉴定及其生物学特性分析

从健康鸡肠道中自行分离筛选出9株乳酸菌株为试验菌株,通过考察菌种的生长速度、耐酸、耐胆碱、耐肠胃液,并以抑菌性能作为主要指标。通过产酸能力测定、耐酸能力测定、耐受肠胃极端环境性能测定得到2株乳酸菌,2株乳酸菌上清液经牛津杯双层平板法对金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、无乳链球菌等5株指示菌株进行抑菌试验,发现2株乳酸菌对5株指示菌株都具有非常明显的抑菌作用。采用16s rDNA分子标记对乳酸菌进行鉴定,并构建系统发育树。经分子生物学鉴定,L2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、L4为短乳杆菌(Lactobacillus brevis)。     

猪肠道中抑制大肠杆菌的乳酸菌的分离与筛选

采用平板稀释法 ,用 MRS和 M17培养基从 12头猪的新鲜粪便中分离出 2 0 0个菌株 ,进而初筛得 38株对普通大肠杆菌有抑制作用、复筛得 10株对猪源弱毒型大肠杆菌有较强抑制作用、再选出其中抑菌活性最强的 3株 R- 2 1- 1、R- 17- 3和 R- 2 1- 3。生理生化特性试验表明这 3株均为乳酸菌。以多粘菌素 B对弱毒型大肠杆菌抑制作用所得的标准曲线作为参照 ,测得这 3株菌的抑菌活性分别相当于 12 80 0 ,135 0 0和 30 2 0 IU.m L-1的多粘菌素 B,蛋白酶试验、排除酸等试验判断其产生的抑菌物质中含有细菌素 ;通过抑菌谱试验证明 3株菌不仅对革兰氏阳性的单核细胞增生利斯特氏菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用 ,而且对革兰氏阴性菌的猪霍乱沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌有明显的抑制作用 ;其中对革兰氏阴性菌的抑制作用国内外未见报道     

鸡源益生菌对肠道病原菌的体外拮抗作用

为探究鸡源益生菌对鸡肠道病原菌的影响,从健康的土鸡肠道内分离并鉴定出6株乳酸菌(Lactobacillus plantarum)和1株丁酸梭菌(Clostridium butyricum)。以从腹泻病鸡肠道内分离并鉴定的3株病原菌——大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella enterica)和志贺氏菌(Shigella sonnei)为指示菌,采用平板抑菌法挑选出1株抑菌活性强的乳酸菌;将这株乳酸菌和丁酸梭菌用比浊法测定48 h内的生长曲线和pH值变化曲线;采用体外模拟肠道的方式,将2株益生菌分别与3株致病菌做体外拮抗试验。结果显示,乳酸菌R5和R6的抑菌能力最强,选取R5与丁酸梭菌D2研究其体外对致病菌的拮抗性能。体外拮抗研究表明,在72 h内乳酸菌R5可将病原菌完全杀灭,而丁酸梭菌对3种致病菌也均有显著抑菌作用。发现乳酸菌和丁酸梭菌在体外拮抗作用中均有显著的抑菌作用,而乳酸菌R5的抑菌效果更好。本研究结果可为益生菌的应用提供理论依据。     

人参内生菌的分离及拮抗菌株的筛选

利用研磨法和组织块法对我国吉林省5个不同地区来源的健康人参植株分别进行了内生细菌和内生真菌的分离,并采用菌体初筛和发酵液复筛相结合的方法,筛选了对6种人参主要病害病原菌具有抑菌活性的内生菌株.结果显示:在人参根、茎、叶不同器官中共分离获得152株内生细菌和46株内生真菌,初筛后得到对2种以上病原菌有抑菌活性的内生细菌16株,内生真菌3株,复筛后对4种以上病原菌具有抑菌活性的内生细菌2株,内生真菌1株,还发现了对灰霉病菌具有明显抑制作用的菌株3株.     

鱼源乳酸菌的抑菌特性研究

采用体外试验研究了3株从斜带石斑鱼仔鱼体内分离的乳酸菌其产酸能力及抑菌特性.结果表明:菌株EA-1和Y1B-3产乳酸的速度和pH值下降速度较快,培养后期乳酸含量显著高于Y4-2(P<0.05).3株乳酸菌对致病性哈维氏弧菌和溶藻弧菌均有不同程度的抑制作用,但乳酸对三株乳酸菌的抑菌活性没有影响,提示3株乳酸菌均能产生乳酸以外的抑菌物质.三株乳酸菌的抑菌物质具有一定的热稳定性,经60℃和80℃热处理后保留70%以上的抑菌活性,但经100℃高温处理失去抑菌活性.3株乳酸菌产生的抑菌物质对胰蛋白酶敏感,在偏中性条件下抑菌活性较高.     

花生根瘤内生细菌对花生黑斑病和褐斑病拮抗作用的初步研究

本试验从花生根瘤内分离出38株内生细菌,平板对峙试验结果表明：大汶口1、X2-8-（1）和12-（2）三种内生细菌对褐斑病菌和黑斑病菌都具有较好的抑制作用。     

酸马奶中乳酸菌产酸能力的研究

着重研究了牧民手工自制以及工厂化生产的酸马奶中分离出的17株乳酸菌的产酸能力。对其中15株乳酸菌进行了产酸能力的测定,对511与K2进行了与酵母菌组合发酵试验,研究其酸度变化情况。结果表明：15株乳酸菌的产酸能力各不相同,产酸能力强的乳酸菌培养24 h pH值在4.0以下,产算能力弱的乳酸菌培养24 h pH值在5.0以上。在组合发酵试验中,酸度组合二〉组合一〉组合三。     

青贮饲料中微生物及乳酸菌特性初步研究

分析青贮饲料中微生物的种类和数量,从中分离鉴定了22株乳酸菌,并研究了这些乳酸菌的特性。结果表明:分离株都是革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性和兼性厌氧菌。根据所分离到的乳酸菌的形态学和生理生化特性,这些乳酸菌可被分为6组(A-F)。经表型分类鉴定,A组、B组、C组和D组为典型的乳杆菌属(Lactobacillus)。E组属于肠球菌属(Enterococcus)。F组为明串珠菌属(Leuconostoc)。青贮饲料中的大多数乳酸菌为乳杆菌属(Lactobacillus),占总数的79%以上。     

乳杆菌竞争性抑制两种病原菌粘附上皮细胞的研究

【目的】研究嗜酸乳杆菌(LAB1)在体外模拟预防和治疗条件下,竞争性抑制致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli )和沙门氏菌(Salmonella choleraesuis,S.cho)对仔猪空肠上皮细胞系（IPEC-J2）的粘附作用。【方法】 用LAB1预处理IPEC-J2后再用E. coli或S.cho攻毒为模拟预防实验;用E. coli或S.cho先攻毒IPEC-J2后再用LAB1处理为模拟治疗试验。提取粘附后的3种菌及IPEC-J2的DNA,使用文献记载和自行设计的引物,利用实时荧光定量PCR方法,量化检测LAB1与E. coli 、S.cho之间的竞争性粘附率。【结果】在模拟治疗试验中,在高（1.0×109 CFU）、中（1.0×108CFU）、低（1.0×107CFU）3种浓度的LAB1处理条件下,能显著抑制高、中浓度S.cho对IPEC-J2的粘附（P＜0.05）;在模拟预防试验中,相同浓度的LAB1能显著抑制相同浓度的S.cho对IPEC-J2的粘附（P＜0.05）。在模拟预防和治疗试验中,3种浓度LAB1均能显著抑制低浓度E. coli对IPEC-J2的粘附（P＜0.05）,高浓度LAB1能显著抑制高、中浓度E. coli对IPEC-J2的粘附（P＜0.05）。【结论】在体外试验条件下,LAB1对E. coli及S.cho粘附IPEC-J2有竞争性抑制作用。在模拟预防和治疗试验中,LAB1对E. coli及S.cho粘附IPEC-J2的竞争性抑制作用效果有所不同。     

不同处理对花生与甜玉米秸秆混合青贮发酵品质的影响

为探讨青贮方式、混合比例及添加剂对花生秸秆和甜玉米秸秆混合青贮发酵品质的影响,设计花生秸秆和甜玉米秸秆10∶0、7∶3、5∶5和3∶7等4种混合比例青贮,采用花生秸秆表面分离的乳酸菌和3%蔗糖混合作为添加剂,调制裹包青贮,以3∶7混合比例的地上式窖贮为对照进行比较。结果表明:10∶0、7∶3和5∶5混合比例经添加剂处理后,乳酸含量显著(P0.05)升高,pH值、丁酸含量和氨态氮含量显著(P0.05)降低;添加剂处理后,10∶0混合比例青贮料的干物质含量显著(P0.05)提高,丙酸含量显著(P0.05)降低,5∶5混合比例的乙酸含量显著(P0.05)降低;无添加剂处理时青贮料采用3∶7混合比例发酵品质较好,有添加剂处理时10∶0比例发酵品质较好;裹包青贮方式较优于窖贮。     

乳酸菌剂对青贮饲料发酵品质的改善效果

 为探讨添加乳酸菌对青贮饲料发酵过程中微生物的动态变化、发酵品质及乳酸异性体生成比率的影响，以意大利黑麦草（Lolium multiflorum）为材料草，选用2种乳酸球菌及1种乳酸杆菌进行青贮饲料的添加调制。其结果如下：⑴乳酸球菌添加区，于贮藏初期，乳酸球菌旺盛繁殖；乳酸杆菌添加区，在发酵全过程保持了高水准的乳酸杆菌数，促进了乳酸发酵。⑵添加乳酸菌有效地抑制了与青贮饲料共存的丝状菌（霉菌）、酵母菌及一般细菌的繁殖，其制菌效果，乳酸杆菌大于乳酸球菌。⑶添加乳酸菌使pH值及挥发性氮与全氮（VBN/T-N）比值降低，乳酸含量提高，改善了青贮饲料发酵品质。⑷乳酸菌添加改善了L（+）乳酸的生成比率，与无添加区相比，乳酸球菌添加区和乳酸杆菌添加区分别提高了7%-8%和12%-14%。     

食源性乳酸菌在改善烟叶品质中的应用

为探索乳酸菌提升烟叶抽吸品质的可能性,从中国传统发酵食品豆豉中分离并鉴定了2株乳酸菌,植物乳杆菌L8和L14。将L8和L14用于烟丝发酵,感官评吸结果表明,发酵后卷烟烟气细腻醇和,杂气和刺激性明显减轻,酸香味突显,余味干净。基于感官评吸对菌株发酵条件进行正交实验优化,结果发现最适产香条件为:接菌量1×10⁸ CFU·mL^-1、发酵温度37 ℃、菌龄10 h,烟叶产地云南保山。以商品化卷烟(云烟紫云)烟丝为发酵材料,感官评吸结果再次证明L8和L14能显著提高卷烟吸食品质。发酵后烟丝主要化学成分比例更加协调,总酸含量(尤其是乙酸)和总醛含量(尤其是3-甲基丁醛)分别显著增加和减少。上述结果说明乳酸菌在提升烟叶品质方面具有很大潜力。     

乳酸菌发酵剂冻干保护剂筛选及应用的研究

用蔗糖、乳糖，海藻糖、麦芽糊精、山梨醇、甘油、侧金盏花醇等１３种材料对乳酸菌的冻干保护效果进行的比较研究表明，海藻糖，侧金盏花醇为最佳保护剂，其次为蔗糖、麦芽糊精、山梨醇、谷氨酸钠、脱脂奶粉，在以水和增菌液为基质中冻干保护效果显著，对乳球菌的保护效果优于乳杆菌。冻干菌物菌落总数与菌体产酸力有一定关系，但与乳糖酶关系不明确，冻干后的菌体表面呈脑回样皱褶，但形态变化不大。并设计了最佳冻干保护剂配方     

单播草地匍茎翦股颖根际联合固氮菌筛选及部分特性初探

从西安地区单播草坪匍茎翦股颖的根际分离到固氮菌株188株,通过气相色谱仪,利用乙炔还原法最终筛选出4株固氮酶活性较高的菌株进行固氮菌部分特性测定及初步对菌株进行鉴定.结果表明:4株菌株中,X4菌株固氮酶活性最高,C2H4达180.20 nmol.mL-1.h-1,与其他菌株相比差异极显著(P<0.01),X2菌株固氮酶活性最低,C2H4为39.32 nmol.mL-1.h-1;筛选出的4株菌株除X4菌株生长较慢外,其余菌株都生长迅速;X2、X3和X4菌株为革兰氏阳性菌株,X1为革兰氏阴性菌株;除X4为中性兼性厌氧性菌株外,其余均为碱性好氧性菌株.经生理生化实验初步鉴定,X1和X4分别属于Enterobacters和Staphylococcu属,X2和X3菌株属于Bacillus属.     

农用抗生素生产菌株的筛选

采用放线菌常规分离方法,从湖南、江西、贵州6个地点采集种植吴茱萸的土壤中分离出15株放线菌,并对它们进行5种病原菌的拮抗性筛选.结果表明,6-1-1和10-1-1菌株对水稻纹枯病病原菌的抑制率达98.8%和93.3%,对白绢病病原菌的抑制率达91.3%和90.2%,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌也有一定的抑制效果.