木薯叶多酚氧化酶的提取及其酶学性质研究

以木薯叶为原料,研究木薯叶多酚氧化酶PPO的最佳提取条件与酶学性质。结果表明,木薯叶PPO 的 最佳提取条件为磷酸缓冲液PBS的pH 值6.8料液比4 mL/g提取时间6 h;木薯叶PPO 酶促反应产物在399 nm 处有最大吸收峰,以邻苯二酚为底物的酶促反应的米氏常数Km=0.8 mol/L动力学方程为V=2000[S]/0.8+[S]该酶最 适温度为37益,最适pH 值为7.0。     

麦麸中植物酯酶的提取及其在有机磷农药残留检测中的初探

本文初步确定了麦麸中提取植物酯酶的工艺、酶促反应的最佳检测波长和酶促反应最适条件。酶活测定采用分光光度法,波长确定为533纳米,酶活力用单位时间酶促反应速率表示。酶促反应的最佳条件为:酶液保存温度0～5℃;反应温度40℃,保温时间15分钟,pH7.5,酶量30μL,8毫克/毫升固兰B盐0.5毫升,3毫克/毫升底物(α-乙酸蔡酯)200μL。同时探讨了从麦麸中提取的植物酯酶用于快速检测蔬菜中农药残留的方法。     

果蔬农药残留快速检测固定化酶片的制作研究

[目的]对胆碱酯酶的保藏性进行研究分析,以期得到保障农药残留检测的最佳酶活力。[方法]试验选定高酶活力的大豆酯酶为酶原,通过筛选最适反应温度、反应时间、离子浓度和最适pH,及最佳的反应显色体系来确定反应最适的条件,采用不同的显色体系酶抑制法,研究酶片的制作方法。[结果]酶片载体材料采用硝酸纤维膜,制作每张酶片取20μL大豆酶液,15μL 0.5%的BSA溶液,2μL 0.05%戊二醛于平底试管中。添加0.03 mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液至总体积100μL,4℃固定10 h;制作每张显色片,需在1 cm×1 cm大小的滤纸片上加入50μL显色剂,30μL底物,4℃冷风吹干,封膜真空保存。[结论]固兰B盐和α-乙酸奈酯组合,适合作为酶抑制法检测有机磷农药残留的显色剂,且效果明显。     

植物胆碱酯酶抑制法分析有机磷农药残留的研究

根据有机磷农药化学特性及其对植物胆碱酯酶抑制的原理,在确定酶促反应条件的基础上,考察了不同展开体系对11种有机磷农药的薄层层析分离效果,建立了10种有机磷农药残留的定性分析方法。     

两种酶快速检测有机磷农药残留条件优化研究

比较了快速测定蔬菜中有机磷农药残留的两种酶抑制法,即胆碱酯酶抑制法和植物酯酶抑制法,通过正交试验优化了两种酶抑制法的测定条件。结果表明:动物酯酶中的苍蝇酶、蝇蛆酶与植物酯酶中的小麦酯酶活力和被农药抑制程度相近;玉米酯酶的活力远低于小麦酯酶的活力,不适于用来检测残留农药;动物酯酶在pH值7.0时活力最高,小麦酯酶在pH值6.0时最高。     

荔枝果肉过氧化物酶酶学性质研究

本文从荔枝果肉中提取了过氧化物酶(POD),对其酶学性质进行了研究.结果表明,该酶最适反应温度为45℃,对热较敏感,当温度为70℃以上时,短时处理即可使酶活降至50％以下.最适pH 5,但在pH6.0～8.0范围内活力比较稳定.该酶在25℃和0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH7.0)条件下对愈创木酚和没食子酸的Km值分别是4.64× 10-3和0.063 mol/L.谷胱甘肽和亚硫酸盐能完全抑制POD活性,但谷胱甘肽抑制浓度远低于亚硫酸盐,抗坏血酸只能在廷迟时间内抑制POD活性,对POD抑制具有暂时性,各抑制机制不同;CuSO4 、ZnSO4 、CaCl2 、MgCl2、EDTA对荔枝果肉POD活性有一定激活作用;FeSO4和MnSO4对POD活性有较强的抑制作用.     

荧光法测定有机磷农药残留总量的条件优化研究

[目的]为农药污染的治理提供有价值的参考和依据。[方法]在pH值6.40的Clark-Lubs缓冲溶液中,加入碱性藏花红(ST)与一定浓度的十二烷基苯磺酸钠(SDBS),测定荧光强度,再加入有机磷农药,检测荧光强度变化,据此建立测定有机磷农药残留总量的新方法。[结果]有机磷农药残留总量荧光法测定的优化条件为:在室温下,以ST+SDBS为反应体系,ST浓度为5.0×10-6mol/L,SDBS浓度为9.0×10-4mol/L,缓冲溶液pH值为6.40,缓冲溶液用量为1.0 ml,溶液中甲醇的用量控制在10%以内。[结论]试验所建立的测定方法已成功用于土壤中有机磷农药残留总量的检测。     

番茄果实特异性表达有机磷水解酶的农药降解活性分析

为研究番茄果实中表达有机磷水解酶(OPH)降解有机磷农药的活性,经农杆菌介导,将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE8OP遗传转化番茄子叶,通过抗性筛选和分子检测,获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。酶活分析发现,酶促反应最适温度为30℃,稳定性较高。酶的最适保存pH值为9,最适试验pH值为8.0。与1 mmol/L Zn2+条件下酶活相比,Co2+提高了酶活2.1倍,Ca2+、Cu2+、Fe2+、Mg2+、Mn2+、EDTA、SDS、TritonX-100、β-ME和DTT都不同程度地抑制了酶活。检测重组表达OPH降解蝇毒磷、毒死蜱和对硫磷的酶活。表明,降解蝇毒磷的Km最低,为4.04μmol/L。重组表达OPH有助于提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。     

酶抑制分光光度法检测蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法的研究

为了缩短用于蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残留检测的酶抑制分光光度法的检测时间对抑制时间为10min时的最适条件进行了研究。提出了新的最适条件确定标准,即保证酶的活性保持在一定的水平的基础上(0.1333min-1≤k1≤0.2667min-1[1]),选择抑制率(以甲胺磷为抑制剂)最高时的温度和pH值作为最适条件。确定了抑制时间为10分钟时的最适条件为:抑制温度47.0℃,pH值为7.7。进而在此最适条件下确定了新的检测结果判断标准:当酶抑制率≥58%时,蔬菜中含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残留为阳性。     

麦麩中植物酯酶的提取及其在有机磷农药残留检测中的初探

本文初步确定了麦麸中提取植物酯酶的工艺、酶促反应的最佳检测波长和酶促反应最适条件。酶活测定采用分光光度法，波长确定为533纳米，酶活力用单位时间酶促反应速率表示。酶促反应的最佳条件为：酶液保存温度咿5℃：反应温度40℃，保温时间15分钟，pH7．5．酶量30μL，8毫克／毫升固兰B盐0．5毫升，3毫克／毫升底物（α-乙酸蔡酯）200μL。同时探讨了从麦麸中提取的植物酯酶用于快速检测蔬菜中农药残留的方法。