中药成分复方的佐剂作用及其与中药复方的功效比较

分别用淫羊藿多糖(EPS)加蜂胶黄酮(PF)、黄芪多糖(APS)加人参皂甙(GS)制成2个中药成分复方(cCHMI1,cCHMI2),同时用相应的淫羊藿、蜂胶、黄芪和人参的提取物制成相应成分含量相同的2个中药复方(cCHM1,cCHM2).试验1用2个中药成分复方(对照组为生理盐水)分别配合兔瘟灭活苗免疫家兔,于免疫后第0、3、7、10、14、17、21、28、35、42天用血凝抑制试验法测定血清抗体效价的动态变化;试验2将4个复方分别与灭活的新城疫强毒混合制成疫苗免疫雏鸡,以油佐剂苗、无佐剂苗和生理盐水为对照,分别于免疫后第7、14、21、28、35、42天用MTT法和血凝抑制试验法检测外周血淋巴细胞增殖和血清抗体效价的动态变化.结果表明,2个中药成分复方能显著提高家兔血清的兔瘟抗体效价,cCHMI1的效果优于cCHMI2;4个复方均能显著促进雏鸡淋巴细胞增殖和提高血清抗体效价,效果与油佐剂苗相当,中药成分复方稍优于中药复方.     

温和气单胞菌高免血清制备初探

试验将培养的温和气单胞菌,加入甲醛灭活,再按一定比例加入氢氧化铝佐剂制备成氢氧化铝灭活苗,免疫家兔后采集血清并检测血清抗体效价。试验结果,用两种不同的免疫程序免疫家兔后采集血清检测效价分别为1∶1024和1∶512。表明温和气单胞菌氢氧化铝灭活苗能刺激家兔产生高滴度抗体。     

中药成分复方的佐剂作用及其与中药复方的功效比较

分别用淫羊藿多糖（EPS）加蜂胶黄酮（PF）、黄芪多糖（APS）加入参皂甙（GS）制成2个中药成分复方（cCHMI1，cCHMI2），同时用相应的淫羊藿、蜂胶、黄芪和人参的提取物制成相应成分含量相同的2个中药复方（cCHM1，cCHM2）。试验1用2个中药成分复方（对照组为生理盐水）分别配合兔瘟灭活苗免疫家兔，于免疫后第0、3、7、10、14、17、21、28、35、42天用血凝抑制试验法测定血清抗体效价的动态变化；试验2将4个复方分别与灭活的新城疫强毒混合制成疫苗免疫雏鸡，以油佐剂苗、无佐剂苗和生理盐水为对照，分别于免疫后第7、14、21、28、35、42天用MTT法和血凝抑制试验法检测外周血淋巴细胞增殖和血清抗体效价的动态变化。结果表明，2个中药成分复方能显著提高家兔血清的兔瘟抗体效价，cCHMI1的效果优于cCHMI2；4个复方均能显著促进雏鸡淋巴细胞增殖和提高血清抗体效价，效果与油佐剂苗相当，中药成分复方稍优于中药复方。     

豆状带绦虫TPO18基因的原核表达及保护性分析

【目的】明确重组蛋白 pGEX-TPO18 的免疫保护效果。【方法】提取豆状带绦虫六钩蚴 RNA,根据带科其他种属绦虫 18 kD 基因的保守区设计引物,5′端分别引入EcoR I、Xho I限制性酶切位点,RT-PCR 扩增,产物克隆于 pMD18-T中进行序列测定,并对序列进行生物信息学分析。将纯化后的 PCR 产物和质粒 pGEX-4T-1 分别用 EcoRⅠ＋XhoⅠ双酶切,回收目的片段,连接后转化至 E.coli BL21感受态细胞,挑斑摇菌,通过 PCR 方法和重组质粒测序技术进行鉴定,将鉴定正确的重组表达质粒命名为 pGEX-TPO18。用 IPTG 诱导表达重组质粒,收集菌体进行 SDS-PAGE 分析,用 GST 琼脂糖树脂纯化 TPO18 蛋白,进行 Western blottting 检测。将纯化后的重组蛋白分别乳化弗氏佐剂、206 佐剂、氢氧化铝佐剂后免疫家兔,每次 50 μg/只,共免疫 3 次,末次免疫后 34 d 每只家兔感染 1 500 个虫卵,感染 58 d 后扑杀并计算各免疫组减囊率。免疫前后每隔 7 d 采血分离血清,ELISA 法检测血清抗体水平,以 40 µg•mL-1重组蛋白包被酶标板,血清 1﹕200 稀释,检测血清样品的 OD492nm 值。【结果】TPO18 基因的 RT-PCR 扩增产物为 339 bp, 与预期大小相符;测序结果表明无碱基突变,重组质粒pGEX-TPO18构建成功。pGEX-TPO18 在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为 38.6 kD 的可溶性蛋白,Western blotting分析结果显示兔抗豆状囊尾蚴阳性血清与重组蛋白在38.6 kD处有一条明显的反应条带,表明该重组蛋白具有反应原性。经ELISA检测,免疫后7 d 免疫组家兔抗体水平开始升高,第43 天达到峰值。经口感染虫卵后,免疫组抗体水平开始降低,但仍保持一定水平。家兔免疫保护试验表明弗氏佐剂、206 佐剂和氢氧化铝佐剂免疫组减囊率分别为 79.13%、65.66% 和 50.43%。【结论】研究表明弗氏佐剂免疫效果较好,有望研制出抗豆状囊尾蚴病的高效疫苗。     

硫酸化香菇多糖对新城疫疫苗免疫效果的影响

试验Ⅰ:免疫应答试验:取450只雏鸡随机均分为9组,在14日龄用新城疫Ⅳ系疫苗免疫,同时分别肌肉注射高、低剂量的3种硫酸化香菇多糖(sLNT_1、sLNT_2、sLNT_3)和香菇多糖(LNT)。分别于首免前和首免后连续6周检测血清HI抗体效价和外周血T淋巴细胞增殖的动态变化。试验Ⅱ:免疫保护试验:取350只雏鸡随机均分为7组,除非免疫组外其余组用新城疫Ⅳ系疫苗免疫,同时3个sLNT组和LNT组分别注射sLNT_1、sLNT_2、sLNT_3和LNT。于免疫后第21天,除无佐剂对照组第2组外各组鸡均肌肉注射NDV强毒攻毒,观察保护效果,并分别于攻毒前和攻毒后第3、6、9、12和15天测定血清HI抗体效价和外周血T淋巴细胞增殖的动态变化。结果表明:3种sLNT在首免后28 d内比LNT显著提高血清抗体效价最高2个滴度(高剂量的效果优于低剂量),促进淋巴细胞增殖(低剂量的效果强于高剂量);攻毒鸡发病率和死亡率降低,保护率提高最多达17.5%,加速攻毒后血清抗体生成和T淋巴细胞增殖,病鸡最快可以在攻毒后6 d恢复正常。综合评价以sLNT_2的效果最好。揭示:硫酸化修饰能显著提高LNT的免疫增强活性,增强新城疫疫苗的...     

中华鳖细菌疫苗免疫佐剂的筛选及其初步应用

将分离自中华鳖Trionyx sinensis主要细菌性疾病—肠道出血性败血症、鳖穿孔病（疖疮病）、红脖子红底板病、鳖腐皮病的4株病原菌,在体积分数为3．5％的福尔马林溶液中灭活24h。在灭活的4株菌中添加不同佐剂,充分混匀后分别制备成总含菌量为6×10^9个／mL的4价菌苗,分别免疫8只ICR小鼠,并设不加佐剂免疫组及空白组作为对照。经3次免疫后,随机选3只小鼠抽血制备血清,用间接ELISA方法测定抗体效价,除空白对照组外,其它4组小鼠的免疫血清效价为1：1．6×10^4-1：2．56×10^5,各免疫组的效价依次为弗氏佐剂〉白油佐剂〉蜂胶佐剂〉不加佐剂。另外5只小鼠用于免疫保护性试验。结果表明：3种佐剂的免疫保护率均为100％,而不加佐剂组免疫保护率为80％,空白对照组死亡率为100％。考虑到弗氏佐剂的成本较高且白油佐剂有副作用,故选择蜂胶作为免疫佐剂,制备了中华鳖4价菌苗。用该菌苗免疫接种50只体重为100～150g／只的健康中华鳖,注射剂量为0．2mL／只,并设置对照组（注射等量的生理盐水）,共接种20只健康中华鳖。分别于免疫后第20、30、40、50天随机采集3只受免疫的中华鳖和对照组的1只中华鳖血液并制备血清,用浙江省淡水水产研究所制备的针对中华鳖IgM的单抗3H3介导的ELISA方法,测定血清中的抗体效价。结果表明：当中华鳖免疫后40d,血清中抗体效价达到最高,为1：6．4×10^4;免疫后50d将受免中华鳖分成4组,分别用4种菌株以5LD50（9×10^6个／mL）进行攻毒试验（0．5mL／只）,结果免疫保护率均达到100％,而对照组死亡率均为100％。     

两种免疫方式对欧洲鳗鲡肠上皮内淋巴细胞和杯状细胞的影响

利用嗜水气单胞菌-ISCOMs疫苗口服或注射免疫欧洲鳗鲡,分别于口服或注射免疫后第1、7、14和21 d采集欧洲鳗鲡前、中、后肠,经石蜡制片,HE和AB-PAS染色计数肠上皮内淋巴细胞和杯状细胞数量.结果显示:两种免疫方式均能不同程度影响肠道上皮内淋巴细胞和杯状细胞数量;血清抗体效价检测结果显示,免疫7 d后抗体效价开始升高,且注射免疫组血清效价整体水平高于口服免疫组.     

家兔苦马豆素多克隆抗体的制备及其对小花棘豆中毒的治疗效果

采用合成的苦马豆素(swainsonine,SW)人工抗原免疫接种家兔,获得高效价的SW抗血清,分离纯化得到的家兔SW多克隆抗体,复制家兔小花棘豆中毒模型,用SW多克隆抗体治疗小花棘豆中毒家兔,通过检测血清生化指标和免疫学指标,评价SW多克隆抗体治疗家兔小花棘豆中毒的效果。将18只家兔随机分为对照组(6只)、攻毒组(6只)和攻毒治疗组(6只),攻毒组和攻毒治疗组按照10g/(kg·d)的剂量饲喂小花棘豆,攻毒组试验兔出现死亡时(第70天)停止攻毒。攻毒第21天,攻毒治疗组试验兔注射SW多克隆抗体,每只兔每天1mL,连续注射4d。以攻毒试验开始为第0天进行首次采血,试验开始后每7d采血1次,进行血清免疫和生化指标测定。结果显示,攻毒第7天时攻毒家兔血清AKP活性和SW质量浓度显著高于对照家兔(P0.05);第14天时攻毒家兔血清AST和LDH活性显著高于对照家兔(P0.05),血清AMA活性和E-玫瑰花环率均显著低于对照家兔(P0.05);第21天时攻毒家兔血清BUN、CRE和GLU浓度显著高于对照组家兔(P0.05)。攻毒治疗组家兔注射SW抗血清后血清AKP、LDH、AST、ALT活性,BUN、CRE、GLU浓度和SW质量浓度较攻毒家兔显著下降,AMA活性和E-玫瑰花环率显著上升。说明,SW多克隆抗体可有效治疗家兔小花棘豆中毒。     

苦马豆素-HSA对小鼠免疫原性研究

【目的】研究苦马豆素-HSA(SW-HSA)对小鼠的免疫原性,为构建SW噬菌体单链抗体库奠定基础。【方法】将12只健康Balb/c小鼠随机分为小剂量免疫组(A组)、大剂量免疫组(B组)和对照组(C组)3组,每组4只。免疫组用SW-HSA加入佐剂后进行了4次免疫,首免和第2次免疫间隔30 d,抗原剂量相同,分别为A组0.05mg/只,B组0.10 mg/只;第3,4次免疫分别在第50,70天进行,第3次免疫各组抗原量分别是首免的1.5倍,第4次免疫抗原量分别是首免的2.5倍。第3,4次免疫后第10天采血,用间接血凝试验与间接酶联免疫吸附试验检测血清中的SW抗体效价。【结果】第4次免疫后,间接血凝试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达26和25;间接酶联免疫吸附试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达29和28。【结论】用SW-HSA免疫Balb/c小鼠,可获得高抗体效价的免疫小鼠。     

His6免疫原的制备及免疫小鼠抗体效价检测

采用EDC一步法将His6多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备两种人工结合抗原KLH-His6和BSA-His6。将制备的KLH-His6作为免疫原,皮下分5点注射免疫6只健康6周龄雌性Balb/c小鼠;首次免疫取KLH-His6(50μg/只)与氟氏完全佐剂(FCA)充分乳化,每只免疫200μL,以后每间隔两周,同法进行第2,3次免疫,用氟氏不完全佐剂(FIA)乳化。每次免疫8 d后尾部采血,以BSA-His6为包被抗原检测抗His6抗体。结果表明,成功制备了His6免疫原,并免疫了小鼠;间接ELISA检测不同时期小鼠抗体效价最高达到1∶8 000,免疫小鼠的抗体效价水平整体呈上升趋势,为His6单隆抗体的制备奠定了基础。     

几种佐剂免疫增强效应的比较研究

本研究以氢氧化铝胶、油佐剂、裂解乳酸菌,百白破三联苗(DTP)和左旋咪唑等5种佐剂,分别配合布氏杆菌猪二(S_2)号苗给豚鼠免疫。以淋巴细胞转化、E—玫瑰花环形成、凝集反应及布氏菌素皮肤变态试验等方法,3个月内进行跟踪性定期检测,考察所试各佐剂增强细胞免疫及体液免疫的作用及特点。试验结果表明,所试各佐剂对豚鼠的免疫应答均具有增强作用。其中,裂解乳酸菌对细胞免疫及体液免疫的增强作用均较理想,是一种具有发展前途的佐剂;百白破三联苗增强细胞免疫及体液免疫效果均佳,但其过敏原作用值得重视;油佐剂在提高抗体滴度,促进体液免疫应答方面的作用最强,明显优于所试的其它佐剂。     

兔病毒性出血症4种灭活疫苗的研制及效果比较

[目的]研制兔病毒性出血症新型疫苗.[方法]分别以黄芪多糖、蜂胶、铝胶、生理盐水为佐剂,研制兔病毒性出血症黄芪多糖佐剂、蜂胶佐剂、铝胶佐剂以及常规灭活疫苗,并从安全、免疫效果等方面对这4种疫苗进行比较.[结果]4种疫苗均有良好的安全性.免疫后7d4种疫苗产生的特异性抗体效价均逐步升高,攻毒保护率均达到100％.免疫后14 d黄芪多糖佐剂抗体效价显著高于蜂胶佐剂、铝胶佐剂以及常规灭活疫苗.免疫后180 d黄芪多糖佐剂疫苗的保护率达75％,蜂胶佐剂与铝胶佐剂可达到50％,常规灭活疫苗的保护率达25％.[结论]这4种疫苗均具有良好的安全性和免疫原性,其中黄芪多糖灭活苗的免疫效果最好.     

铜石龙子肠道细菌数量的变化与免疫机能的关系

研究肠道细菌数量的变化与免疫机能的关系.以2％的大黄和板蓝根喂饮铜石龙子(Sphenomorphus indicus),在第1、2、4、7、14、21和28天检测铜石龙子肠道细菌数量的变化、抗体效价、血液溶菌酶活性和吞噬细胞的吞噬能力的变化.结果与结论:肠道细菌数量第2天显著高于对照组(P＜0.05),第4天达最大(P...     

9种细菌成分及其代谢产物对鲫鱼免疫功能的影响

将9种细菌细胞成分及其代谢产物分别添加入饵料投喂鲫鱼,连续投喂35 d,每隔7 d检测鲫鱼白细胞吞噬活性(phagocytic activity)、吞噬细胞杀菌活性(bactericidal activity)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismu- tase,SOD)活性、溶菌酶(lysozyme)活性和血清凝集抗体效价(agglutinating antibody titer),以研究这9种细菌细胞成分及其代谢产物对鲫鱼免疫功能的影响。结果表明,蜡状芽孢杆菌蕈状亚种组(Bacilluscereussubsp mycoides)、噬菌蛭弧菌组(Bdellovibro bacteriovorus)、皮杆菌组(Dermabater sp．)和蜂房芽孢杆菌组(Bacillus alvei)鲫鱼白细胞的吞噬活性、吞噬细胞的杀菌活性、SOD酶活性、溶菌酶活性与对照组相比,均呈极显著性差异(P<0．01),这4 种细菌的细胞成分及其代谢产物均能增强鲫鱼的细胞和体液免疫功能。此外,血清凝集抗体效价的测定结果表明, 蜡状芽孢杆菌蕈状亚种组效价最高,为1:256,噬菌蛭弧菌组、皮杆菌组和蜂房芽孢杆菌组最高效价分别为 1:128,1:64和1:64。在以上4种细菌中,除蜂房芽孢杆菌组的血清凝集抗体效价峰值出现在第14天外,其余3 组各项检测指标的峰值均出现在第21天。     

禽流感母源抗体消长规律和免疫保护抗体临界值的测定

对初生雏鸡的AI母源抗体进行了动态观察 ,并在HI效价为 6 (Log2 )和 4 (Log2 )、2 (Log2 )左右时 ,分别应用禽流感病毒进行攻毒。结果显示 :初生雏鸡AI母源抗体HI效价的峰值在 7日龄时 (7.85 (Log2 ) )出现 ,比 1日龄 (6 .8(Log2 ) )时高出 1个倍比滴度 ;7日龄后HI效价即随雏鸡日龄的增加而迅速下降 ;至 2 8日龄时 ,已趋于消失。攻毒试验中 ,当HI效价为 6 (Log2 )左右时 ,其保护率为 10 0 % ;在 4 (Log2 )时 ,保护率仅为 5 0 % ;在 2 (Log2 )左右时 ,保护率只有2 0 %。由此说明 ,能使雏鸡对AIV的攻击获得完全保护的临界值应在 4 (Log2 )～ 6 (Log2 )之间 ,且必须大于 4 (Log2 )。     

禽流感油乳剂灭活疫苗的研制及应用

采用分子生物学技术,用陕西省部分地区自然发病鸡群分离鉴定的AIV毒株,按不同的抗原含量研制成AIV的双价油乳剂灭活疫苗进行质量检验和安全试验。结果表明:该灭活疫苗符合兽药生物制品规程的要求;免疫易感鸡后3～5 d出现HI抗体,14 d达1:128以上,21～30 d达到高峰(1:1024),并维持3～6个月(1:256);用同源AIV毒株攻毒,5 d产生保护力,7 d达100%(5/5),保护期为9个月;疫苗4℃保护期暂定12个月。区域性免疫试验,免疫后第14 d抽血检验HI滴定在(1:128)以上。使用安全,效果可靠。     

2株益生菌在鳗鲡消化道内的定植与演替

对鳗鲡分别人工灌喂含有益生菌A40209CDC4(枯草芽孢杆菌,Bacillus subtilis)和A31009NA(少动鞘氨醇单胞菌,Sphingomonas pauci mobilis)的饲料,于停止灌喂后的第1、2、3、4、5、7、9、15、20、30 d进行细菌的分离培养,研究试验菌株A31009NA和A40209CDC4在鳗鲡消化道内的定植与演替规律。结果显示:A40209CDC4能在鳗鲡胃内定植至少7 d,在肠道内定植至少17 d;A31009NA能在鳗鲡胃内定植至少4 d,在肠道内定植至少9 d;消化道细菌总数与益生菌数量同步变化。试验结果表明:试验用益生菌菌株A40209CDC4和A31009NA均能在鳗鲡消化道内定植,并具有从胃至肠的迁移规律;人为添加具定植能力的益生菌时,将对养殖动物消化道菌群数量产生显著影响。     

接种高温细菌复合菌剂对鸡粪堆肥的影响研究

为了研究接种高温复合菌剂对鸡粪堆肥处理的影响,本实验采用高温好氧堆肥技术,设计了对照(不接菌)和接菌(按8%接种高温细菌)2种处理,探讨了发酵过程中堆肥温度、水分、pH值、NH4+-N含量和有机质含量变化。结果表明:与对照相比,接菌处理堆肥升温快,最高达69℃;水分蒸发快;有机物料分解速度快,有机质分解率比对照高3%;pH值降低0·2以上;种子发芽指数于第17d上升至80·1%,堆肥接种处理比对照提前5d达到腐熟;发酵过程中减少了臭气产生和氨的挥发,接菌处理堆肥NH4+-N含量比对照增加12·1%。     

多巴胺对鸡新城疫疫苗抗体效价的影响

将180只10日龄公鸡随机均分成9组,用新城疫LaSota弱毒疫苗(ND)点眼滴鼻免疫的同时,3个实验组分别肌肉注射高、中、低剂量的多巴胺激动剂和拮抗剂溶液,注射1次/d,连续注射3次,对照组注射生理盐水。各组分别于免疫后7、14、21、28 d翼下静脉采血,分离血清,用微量血凝抑制(HI)测定新城疫抗体效价。结果表明,多巴胺(DA)受体激动剂中剂量组的HI抗体效价明显高于对照组,且呈现一直上升趋势;多巴胺(DA)受体拮抗剂的高剂量组抗体效价明显低于对照组,且呈现一直下降趋势;表明DA对新城疫疫苗的抗体效价有明显的调节作用。     

家蚕隐性灰色卵的连锁定位分析

本试验发现的灰色卵是所有灰色卵中唯一的隐性遗传灰色卵。其灰色卵基因属第2连锁群,基因记号为gr-r,位于第2连锁群7.5(2-7.5)处。