昆虫病原线虫Oscheius myriophila 的形态和分子特征

2010—2013年在昆虫病原线虫调查中,从华南农业大学植物园采集土样,利用大蜡螟(Galleria mellonella)诱集,获得1个小杆类昆虫病原线虫种群(华农种群HN)。该线虫雌虫的形态符合Oscheius myriophila的原始描述,测量值中除虫体宽度(70~123 vs 57~70 μm)和口腔宽度(5~8 vs 4.5 μm)更宽、尾更长(138~188 vs 108~135 μm)外,其余特征值均在该种原始描述的范围内;用HN种群的18S和28S r DNA序列进行Blast搜寻和比对,结果表明该种群18S序列与GenBank中的O.myriophila(AY602176)的相似度高达99%(1512/1514=99%),28S序列与O.myriophila(U81588)的相似度达100%(609/609=100%)。分子系统发育分析结果显示,HN与Gen Bank中的多个O.myriophila种群以高置信度聚在相同的Insectivorus 支系。综合形态学和18S和28S rDNA序列特征,确定华农种群HN为Oscheius myriophila。     

小卷蛾斯氏线虫对小地老虎的侵染性试验

室内试验结果表明 ,不同温度、不同线虫剂量对小地老虎幼虫的侵染力不同 .在 2 2 - 2 7℃温度内 ,线虫侵染力最强 ;在同一温度下 ,线虫剂量越大 ,小地老虎幼虫死亡率越高 .田间试验结果表明 ,2种施放线虫方法毒饵法和浇灌法防治小地老虎效果均比喹硫磷好 ;毒饵法 (线虫剂量为 4 0 0 0 0条·株 -1)防治小地老虎的田间平均防治效果可达 6 8.53%     

昆虫病原线虫Oscheius myriophila 共生细菌菌株B1 的分离与鉴定

从昆虫病原线虫(Oscheius myriophila)华农种群HN体内分离得到1株共生细菌B1。该菌株在NA培养基上形成的菌落为圆形,白色,表面光滑,不透明,隆起,边缘整齐;革兰氏阴性,短杆状,单鞭毛,有荧光。Biolog检测结果显示B1为沙雷氏菌(Serratia sp.);用引物27F/1492R进行PCR扩增,得到B1的16S rDNA扩增产物大小为1 445 bp。Blast搜寻和比对结果表明,该菌株16S rDNA序列与所选的17个嗜线虫沙雷氏菌(S.nematodiphila)的相似度达97%~100%,并以高置信度(99)与这17个嗜线虫沙雷氏菌种群及4个粘质沙雷氏菌(S.marcescens)种群聚于1个单支系中。综合形态和16S r DNA序列特征以及Biolog检测结果,将共生细菌B1鉴定为嗜线虫沙雷氏菌(Serratia nematodiphila)。     

食线虫性真菌弯孢节丛孢菌的分离及捕食线虫过程的观察

【目的】从牛羊相关联的基质中分离食线虫性真菌弯孢节丛孢菌Arthrobotrys musiformis并进一步观察该分离株对捻转血矛线虫Haemonchus contortus 3期幼虫和秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans的捕食过程。【方法】用诱饵平板技术分离弯孢节丛孢,然后借助扫描电镜观察弯孢节丛孢对捻转血矛线虫3期幼虫和秀丽隐杆线虫作用的动态过程。将该菌分离株NPS045接种在表面铺有纤维素膜的20 g·L-1水琼脂平皿中培养4 d后并加入试验线虫,于2种线虫捕捉后不同时间段取样观察。【结果】电镜观察结果显示,加入试验线虫后5 h该菌产生捕食结构并开始捕捉2种线虫;弯孢节丛孢对捻转血矛线虫3期幼虫于捕捉后22 h刺入角质层,56 h虫体有侵入性菌丝长出,68 h消化完全;秀丽隐杆线虫于捕捉后14 h刺入并明显皱缩,19 h虫体严重皱缩,24 h消化完全。【结论】从1 502份与牛羊相关的样品中分离出17株弯孢节丛孢菌,其在总样品中的检出率为1.13%。     

一株昆虫病原性真菌莱氏野村菌的分离与鉴定

利用PDA培养基,对收集自广东化州的家蚕病原真菌(编号为Ma1菌株)进行分离培养.首先对菌落特征、菌丝、分生孢子梗及分生孢子形态特征进行观察.再利用真菌核糖体基因ITS区域设计合成的引物对Ma1菌株进行PCR扩增得到558 bp大小的目的条带.目的条带采用Blast方法将测序结果在GenBank中进行同源搜索,依据邻接法构建获得与其相关菌株的ITS序列系统发育树.通过形态学和ITS基因序列分析,最终判定来自家蚕的病原真菌Ma1菌株为莱氏野村菌(Nomuraea rileyi).     

稻平脐蠕孢的分离、鉴定及对作物的安全性

为了筛选获得可用于防治李氏禾的病原菌菌株,采用孢子形态观察和ITS1-5.8S-ITS2序列分析法对分离自云南西双版纳稻田感病李氏禾植株上的两株病原真菌菌株进行了鉴定,采用离体叶片生测法评价其除草活性,采用盆栽生测法评价其对主要作物的安全性.结果表明,两株病原真菌分别被鉴定为稻平脐蠕孢(Bipolaris oryzae)和稻平脐蠕孢有性型[Bipolaris oryzae (teleomorph:Cochliobolus miyabeanus)].稻平脐蠕孢发酵液对李氏禾的致病性最高为88.9;稻平脐蠕孢有性型发酵液配制的菌悬液对李氏禾的致病性最高为100.两个菌株对水稻、玉米、黄瓜及番茄等主要农作物安全.     

猪源乳酸菌的分离及其生物学性能研究

【目的】从猪新鲜粪便和肠道黏膜中筛选乳酸菌,为猪益生剂饲料添加剂提供理论依据和可靠菌种。【方法】采集陕西八眉猪的粪便和肠道组织,分离纯化乳酸菌,通过体外耐酸、耐胆汁试验以及抑菌试验和黏附试验,筛选特性优良的益生菌,用16SrRNA基因序列系统发育树确定其分类地位。采用小鼠安全性检验试验,检测筛选菌株的安全性。【结果】筛选出一株耐受性和抑菌性良好,生长曲线稳定且黏附性较好的乳酸菌,命名为FB027;另一株抑菌性和黏附性良好,生长曲线稳定且耐酸、耐胆盐较好的乳酸菌,命名为SE013。16SrRNA基因序列系统发育树分析发现,FB027为非解乳糖链球菌(Streptococcus alactolyticus),进化与同属的血红链球菌Streptococcus sanguinis(GenBank登录号CP000387.1)同源性最高,SE013为肠系膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides),进化与同属的伪明串珠菌Leuconostoc pseudomesenteroides(GenBank登录号AB572039.1)同源性最高。小鼠安全性检验试验发现,连续2周口服乳酸菌FB027和SE013,小鼠健康状况良好,行为、生长、采食量和病理组织剖检均无明显异常。【结论】分离获得了性能优良的2株乳酸菌,其在猪饲料添加剂方面有潜在的应用前景。     

嗜热氧化乙酸脱硫肠状菌的分离和特征

从一个在58℃连续运转多年的厌氧生物反应器中分离到一株硫酸盐还原细菌,定名为菌株CAMZ。菌株CAMZ细胞为1～1.5 μm×4～6.5μm,单个或成对,杆状,两端尖中间大,呈橄榄形。革兰氏染色阴性。能利用乳酸、丙酸、丁酸、丙酮酸、丙氨酸、H_2/CO_2、乙酸等多种基质,但不利用苯甲酸、软脂酸、葡萄糖、蔗糖,木糖、纤维二糖等物质。生长于H_2/CO_2时能合成大量的乙酸。菌株以SO_4~-,S_2O_3~-和S作为电子受体,并形成S~-,但不利用SO_3~-,NO_3~-,NO_2~-和甜菜碱作电子受体。需要维生素溶液或酵母浸提液促进生长。最适生长温度为55～60℃,最适pH为6.5～7.0。生长不需要NaCl,但可在低于1.5％NaCl培养基中生长。细胞具有很高的一氧化碳脱氢酶活性。DNA中mol％G+C为49.7。根据其形态和特征,认为菌株CAMZ是脱硫肠状菌属的一个新种,定名为嗜热氧化乙酸脱硫肠状菌(Desulfotomaculum thermoacetoxidans sp.nov.),典型菌株为CAMZ。     

藏猪源唾液乳酸杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

【目的】对藏猪粪便中乳酸杆菌进行分离、鉴定及生物学特性研究。【方法】采集不同生长阶段藏猪（仔猪、保育猪、母猪）粪便,通过MRS选择性培养基培养、形态学观察、产酸性能测定、细菌生化鉴定及16S rDNA基因测序技术等方法从中分离、鉴定乳酸杆菌,检测藏猪源乳酸杆菌的生长曲线、耐酸耐胆盐特性、溶血活性、体外抑菌效果、益生基因,并对其进行安全性评估。【结果】从藏猪粪便中分离出48株乳酸杆菌,经16S rDNA基因测序和生物学特性分析,最终得到1株藏猪源唾液乳酸杆菌（Lactobacillus salivarius）,该菌株具有较好的产酸性能,产酸量可达（0.070±0.005） mol/L;对高质量浓度胆盐和低pH具有良好的耐受能力;该菌株中检测到肠菌素P2基因（Ent P2）,无溶血活性;体外抑菌结果显示,藏猪源唾液乳酸杆菌对金黄色葡萄球菌（CMCC 26003）和大肠杆菌（CMCC 44102）具有良好的抑菌效果;15 d小鼠灌胃试验结果显示,小鼠的体质量变化和脏器指数与生理盐水组无显著性差异,未观察到菌血症和细菌移位现象。【结论】筛选得到1株安全无毒副作用的藏猪源唾液乳酸杆菌,该菌具有较好的生物学特性,可作为发酵饲料和防治细菌性肠道疾病的潜在益生菌。     

Isolation and characterization of Bacillus subtilis EB-28, an endophytic bacterium strain displaying biocontrol activity against Botrytis cinerea Pers.

The fungal pathogen Botrytis cinerea Pers. causes severe rotting on tomato fruits during storage and shelf life. As a biological control agent, endophytic bacterium was regarded as an effective alternative to chemical control. Out of 238 endophytic bacterial isolates, three strains (EB-15, EB-28, and EB-122) isolated from Lycopersicum esculentum Mill., Speranskia tuberculata (Bge.) Baill, and Dictamnus dasycarpus Turcz. respectively were found to be strongly antagonistic to the pathogen in vitro and were selected for further in vivo tests. One endophytic bacterium strain, encoded EB-28, was selected from the three in vivo tested isolates. The inhibitive rate of EB-28 reached 71.1% in vitro and 52.4% in vivo. EB-28 was identified as Bacillus subtilis according to its morphological, physiological, and biochemical characteristics and 16S rDNA sequence analysis.     

1株产色素毛壳菌的分离鉴定及其生物学特性

为筛选出能够产生色素的真菌,采用组织分离法从核桃枝干上分离鉴定出1株产天然红色素的毛壳菌属真菌YLHT−2A,通过形态学和ITS分子方法对菌株进行鉴定,并对菌株YLHT−2A的生物学特性进行研究。结果表明：菌株YLHT−2A鉴定为金色毛壳（Chaetomium aureum）;该菌株最佳培养基为PDA培养基,最佳培养温度是30 ℃,最佳生长光照条件是24 h全黑暗,最佳生长pH为10。     

微生物杀虫在害虫综合治理中的应用研究概况

文中对国内外微生物杀虫在害虫综合治理中的应用研究现状进行了综述。就病毒杀虫、细菌杀虫、真菌杀虫、原生动物微孢子虫杀虫、线虫杀虫等方面分别进行了概括。综合资料表明我国微生物治虫前景可观,有待进一步开展应用研究。     

腌制臭鸡蛋中产细菌素乳酸菌的筛选及其特性分析

为获得产细菌素的乳酸菌,本研究对自然腌制臭鸡蛋中的乳酸菌进行分离筛选;并进行抑菌、有机酸排除、过氧化氢排除和蛋白酶敏感性试验,及温度、pH、表面活性剂和金属离子对抑菌物质的影响研究。从样品中共获得27株乳酸菌,产细菌素的乳酸菌4株,其中菌株FJY-1抑菌能力最强。经形态学、生理生化与16S rDNA基因序列分析,鉴定该菌株为屎肠球菌。其无细胞上清液在pH 2~9范围内处理2h后能维持60%以上的抑菌活性,对热稳定(121℃,30min),经胃蛋白酶处理后抑菌活性消失;该细菌素对沙门氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等均有较强的抑制作用,并证明其对指示菌的作用方式是杀菌,该细菌素在食品防腐中具有较强的应用潜力。     

菜豆花内生假单胞杆菌的分离与鉴定

[目的]分离并鉴定菜豆花中的1株内生优势细菌(WBF1)。[方法]从菜豆花中分离出1株内生优势细菌WBF1,通过革兰氏染色、16S r DNA及生理生化实验对其进行鉴定。[结果]革兰氏染色结果显示该菌为革兰氏阴性杆菌,16S r DNA序列分析显示其为变形杆菌科不动杆菌属假单胞杆菌;其生理生化特征符合假单胞杆菌特性;该菌定植于菜豆花中,生长温度为20~43℃。[结论]该菌是菜豆基因工程生防菌宿主菌的良好候选菌株。     

柳蜷叶丝角叶蜂生物学特性及其防治

柳蜷叶丝角叶蜂Phyllocolpa sp.是近年在甘肃天水发现的一种新害虫,严重危害多种柳属植物。1年发生1代,以老熟幼虫在表土1-5 cm中结茧越夏越冬。幼虫食柳芽及芽尖内层组织,造成其外层被干枯芽尖蜷束,叶片弯曲变形形成虫苞,每年4月上旬至5月上旬为猖獗危害期。用1.8%阿维菌素乳油和25%灭幼脲Ⅲ号胶悬剂2 000倍液喷冠防治3龄前小幼虫,防效分别为92.8%、95.2%;用3%高渗苯氧威乳油4 000倍液喷冠防治3龄后大幼虫,防效为96.7%。     

野生红菇菌丝体的分离

以广西浦北县椎林下野生红菇的子实体作为分离材料 ,对子实体的不同部位进行组织分离和孢子分离 ,分别接入不同配方的培养基上进行菌丝萌发试验 ,获得了红菇组织分离纯培养菌丝体。比较了几种不同成分培养基的分离效果 ,并对所获菌丝体的形态特征进行初步研究。经 3代母种扩转 ,在Ⅰ号、Ⅴ号母种培养基上菌丝生长良好     

Species diversity of thrips (Thysanoptera) in selected avocado orchards from Mexico based on morphology and molecular data

Avocado is one of the most important crops in the world, and Mexico is the largest producer of this fruit. Several insect pests affect its production, and thrips are amongst the most important. A key step in the design of control methods is accurate species identification. Despite this, formal reports on species diversity of thrips in Mexico are very scarce. Morphological identification can sometimes be time-consuming and inconclusive. Therefore, we explored the species diversity of thrips in Mexican avocado orchards(Michoacan state) based on partial sequences of the mitochondrial gene cytochrome oxidase subunit Ⅰ(COⅠ). Forty-four specimens were analysed, which represented approximately 8% of all individuals collected from five localities distributed in three Municipalities. All specimens were analysed using the COⅠ marker, and specimens within the genera Frankliniella were also analysed using a marker within the D2 domain of the 28 S(28 SD2) nuclear ribosomal DNA. Molecular identifications were confirmed using morphological taxonomy. Overall, six genera were found(Neohydatothrips, Scirtothrips, Frankliniella, Arorathrips, Caliothrips and Leptothrips). All genera contained only one species, except Frankliniella, for which there were six species. Data from the two molecular markers suggest the existence of cryptic species within Mexican F. occidentalis populations.     

香蕉枯萎病拮抗菌的筛选鉴定及其生防效果

以海南发病香蕉园中的健康香蕉根际土壤为样品,以香蕉枯萎病病原菌Fusarium oxysporm f.sp.cubense(FOC)为指示菌进行香蕉枯萎病拮抗菌的分离筛选和鉴定,初筛得到16株拮抗菌,通过复筛得到1株有较强抑菌活性的拮抗菌株YL-19,其发酵液抑菌圈直径为26.26 mm。通过形态特征观察、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析将其初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。该菌最适生长温度为37～42℃,最适初始pH值为6～8。对发酵液的抑菌物质稳定性初步研究显示:抑菌物质对胰蛋白酶及紫外线照射不敏感,对强酸、强碱和温度比较敏感。盆栽试验结果表明:用YL-19二次发酵的生物有机肥对香蕉枯萎病的防治效果达到74%,且对香蕉苗有明显的促生效果。     

一株黄瓜内生细菌的分离鉴定及其对灰霉病的防治效果

为了获得对黄瓜灰霉病有较好防治作用的内生细菌,从不同品种、健康的黄瓜组织中分离内生细菌。对峙培养法测定结果表明,从‘温室3号’黄瓜叶片分离到的1株内生细菌(WSL-8)对Botrytis cinerea有较强的拮抗作用;经生理生化和16SrDNA序列的进化树分析,确定该细菌为Paenibacillus polymyxa;通过抗生素标记法分析了该细菌在黄瓜植株体内的分布和数量,明确了随着培养时间的延长菌体数量逐步降低;利用该细菌菌液浸泡黄瓜片或浸泡黄瓜种子盆栽,接种病原菌后第3天对黄瓜灰霉病的防效分别为23.65%和56.83%。     

产Iturins族脂肽生防芽孢杆菌的分离、筛选及鉴定

为获得能够产Iturins类脂肽的芽孢杆菌以应用于植物的生物防治中,以果蔬体内、根际土壤等多生境中分离的118株细菌为出发菌株,采用平板对峙法、管碟法对其进行了初筛和复筛。结果表明:其中3株菌株对立枯丝核菌、瓜果腐霉和尖孢镰刀菌显示出强烈的抑制作用;通过薄层层析等方法对产Iturins脂肽菌株进行初步分析,最终确定K103为目标菌株。通过形态学鉴定、生理生化试验及16SrDNA的分子生物学等方法,对产抗菌脂肽的K103菌株进行分类学鉴定,最终确定菌株K103为解淀粉芽孢杆菌,并将其命名为解淀粉芽孢杆菌K103(Bacillus amyloliquefaciens K103)。