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1.
研究以香蕉栽培品种"天宝蕉"(Musaspp.cv.Tianbao)横切薄片(Thin cross-sections,TCSs)为材料,采用根癌农杆菌介导的方法,进行S6PDH基因转化香蕉的研究。结果表明,在横切薄片继代增殖培养基M4中添加5%~7%(V/V)的椰汁明显增强了香蕉芽苗的生长势;GUS基因瞬时表达检测表明,长势旺盛的香蕉芽苗(直径为7~8 mm)适宜作为香蕉遗传转化的受体材料,横切薄片厚度以2 mm左右为佳;采用两步法进行抗性芽的筛选得到37个抗性芽苗,生根移栽后获得31株成活苗;目的基因S6PDH和报告基因GUS的PCR检测表明其中4株是转基因植株。该研究为将蔷薇科山梨醇代谢途径引入香蕉以提高其耐渗透胁迫的能力奠定了重要的基础。  相似文献   

2.
研究以香蕉栽培品种“天宝蕉”(Musa spp.cv.Tianbao)横切薄片(Thin cross-sections,TCSs)为材料,采用根癌农杆菌介导的方法,进行棒S6PDH基因转化香蕉的研究.结果表明,在横切薄片继代增殖培养基M4中添加5%~7%(V/V)的椰汁明显增强了香蕉芽苗的生长势;GUS基因瞬时表达检测表明,长势旺盛的香蕉芽苗(直径为7~8 mm)适宜作为香蕉遗传转化的受体材料,横切薄片厚度以2mm左右为佳;采用两步法进行抗性芽的筛选得到37个抗性芽苗,生根移栽后获得31株成活苗;目的基因S6PDH和报告基因GUS的PCR检测表明其中4株是转基因植株.该研究为将蔷薇科山梨醇代谢途径引入香蕉以提高其耐渗透胁迫的能力奠定了重要的基础.  相似文献   

3.
花生上胚轴为外植体的植株再生及转化研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
以8 d龄花生无菌苗的上胚轴为外植体,进行植株再生和农杆菌介导遗传转化研究.结果表明,上胚轴能高效诱导花生植株再生,外植体在MS 3 mg/L TDZ 6 mg/L 6-BA 1.5 mg/L NAA培养基上能高效诱导不定芽分化,10 d时诱芽率达100%;不定芽接种到MS盐 B5维生素 3mg/L TDZ 0.01%酵母粉培养基中15 d诱导出大量丛生芽;MS 0.5 mg/L NAA培养基较适合诱导丛生芽生根,25 d时生根率达82%.筛选确定35 mg/L潮霉素浓度为转化筛选压,以含AtRD29Ap::GUS融合基因的根癌农杆菌侵染8 d龄上胚轴10 min,共培养3 d,经上述再生体系,以潮霉素筛选获得1株拟转化再生植株.  相似文献   

4.
以薹菜子叶-子叶柄为外植体,研究了根癌农杆菌介导的遗传转化技术。用含GUS和NPTⅡ基因的农杆菌侵染子叶-子叶柄,获得了具有卡那霉素抗性的再生植株。再生植株经GUS组织染色,证实外源基因转化到植物基因组中。卡那霉素敏感性测定结果表明,当培养基中含卡那霉素(Km)15 mg/L时,非转化再生植株全部白化。转基因抗性芽筛选的适宜的卡那霉素浓度为10 mg/L。  相似文献   

5.
采用根癌农杆菌介导法,将水稻反义蜡质基因导入寒地 4 个水稻品种(系)成熟胚的愈伤组织。这些愈伤组织经连续2 次 25~50 mg/L潮霉素抗性筛选,获得抗性愈伤组织的转化频率为12.15%~25.95%,经分化培养,不同品种的绿苗转化频率分别为 2.49%~4.43%。分化成苗的植株经GUS检测,80%以上的植株叶片呈阳性反应,显示兰色。经 PCR检测,也能扩增出外源基因相应的DNA片断,证明外源基因已整合到转基因植株中。  相似文献   

6.
根癌农杆菌介导反义蜡质基因的水稻遗传转化   总被引:6,自引:0,他引:6  
通过根癌农杆菌介导法.将水稻反义蜡质基因导入6个水稻品种(系)幼胚的愈伤组织.这些愈伤组织经连续两次25~50mg/L潮霉素抗性筛选,获得抗性愈伤组织的转化频率为30.75%~59.09%,经分化培养,不同品种的绿苗转化频率分别为3.85%~8.97%.分化成苗的植株经GUS检测,80%以上的植株叶片呈阳性反应,显示蓝色.部分呈阴性反应的植株经PCR检测,也能扩增出外源基因相应的DNA片断,结果证明外源基因已整合到转基因植株中.  相似文献   

7.
以橡胶草为试验材料,利用农杆菌介导法进行遗传转化研究。结果表明:50mg/L的卡那霉素(Kan)对橡胶草的抗性芽具有很好地筛选效果,生根筛选时,Kan的适宜质量浓度为35mg/L;最佳抑菌抗生素为羧苄青霉素(cb),适宜质量浓度为500mg/L,获得35株抗性试管苗,通过GUS染色及分子生物学检测,最终获得6株转基因植株,转化率为17.1%。可见,获得的橡胶草转基因植株,为橡胶草后续的遗传转化研究奠定了基础。  相似文献   

8.
根癌农杆菌介导Bt杀虫基因对花椰菜的转化初报   总被引:5,自引:1,他引:4  
采用 Ti质粒 p KSB带有 Bt杀虫蛋白基因、NPT 选择标记基因及 GUS基因 ,通过根癌农杆菌 L BA40 44菌株的介导 ,将 Bt杀虫基因导入花椰菜品种中。试验以花椰菜下胚轴为外植体 ,将下胚轴切段置于分化培养基 (MS+ 6 - BA1 .0~ 2 .0mg/L + NAA 0~ 0 .5 mg/L)上 ,对影响转化的种种因素进行了试验。得到了转化的愈伤组织及再生植株 ,用组织化学法检测 GUS活性 ,观察到愈伤组织内的转化细胞呈阳性蓝色反应  相似文献   

9.
以洋桔梗(Eustoma graniflorum)品种Double Mariachi Pink为试验材料,在已建立的洋桔梗高频再生体系和高效稳定遗传转化体系的基础上,将PBI121 - ACC合酶反义基因片段(1008 bp)通过农杆菌介导法转化洋桔梗,通过高频再生获得116株抗性苗.再生抗性苗在生根培养基1/2MS+NAA0.1 mg/L+ Km 15 mg/L上生根筛选获得了55株正常生根的植株;对其中随机挑选的8个株系进行PCR鉴定和GUS表达检测,在增殖筛选培养基MS+6 -BA 0.1 mg/L+ NAA 0.05 mg/L +Km 30 mg/L+ Cb 100 mg/L上初步筛得到5个PCR阳性株系,其中4株GUS检测呈阳性;5个PCR阳性株系经PCR - Southern杂交鉴定得到1株阳性植株.将阳性株系出瓶移栽,其平均花期为24d.  相似文献   

10.
【目的】利用农杆菌介导法,将外源冷调节基因Cbcor15a导入甘蔗愈伤组织,建立快速、高效的甘蔗遗传转化体系,为培育具抗寒性甘蔗品种奠定基础。【方法】以新台糖22号(ROC22)为材料,通过对愈伤组织诱导、分化、生根等培养基进行优化,筛选出外源基因转化甘蔗的适合激素种类与用量、PPT用量、抗生素种类与用量;利用甘蔗转基因二元植物表达载体pCambia1300-Cbcor15a-bar,通过农杆菌介导法将目的基因Cbcor15a导入甘蔗愈伤组织。【结果】当农杆菌菌液OD600为0.4、侵染20 min时有利于愈伤组织分化;甘蔗愈伤组织诱导和分化培养阶段的最佳PPT为0.50mg/L。侵染后在共培养中添加500.00 mg/L抗生素Cef能有效抑制农杆菌,添加300.00 mg/L抗生素Cef能促进愈伤组织分化成苗,添加200.00 mg/L抗生素Cef能促进幼苗生根。MS培养基中添加低量NAA更有利于甘蔗愈伤组织的分化;在促进细胞分裂时KT的效果明显优于6-BA。MS培养基中添加5.00 mg/LNAA和70.00g/L蔗糖能有效促进分化苗生根。利用建立的遗传转化体系可获得286株转冷调节基因Cbcor15a的甘蔗转化植株;选取83株通过PPT抗性筛选后长势良好的转化植株进行阳性检测,其中有4株呈阳性。【结论】利用农杆菌介导的Cbcor15a基因转化甘蔗的遗传转化体系能成功将Cbcor15a基因整合到甘蔗基因组。  相似文献   

11.
农杆菌介导法将LFY基因导入苹果的研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
以M26苹果叶片为外植体,利用GUS瞬时表达率,对农杆菌介导法转化苹果的因素进行优化,通过含LFY基因的根癌农杆菌EHA105转化苹果叶片,获得了提早开花的转基因植株。结果表明:以OD600=0.3~0.5农杆菌菌液侵染叶片,25℃条件下共培养,共培养后的叶片延迟筛选3 d,在附加卡那霉素30 mg/L的再生培养基中选择培养,转化芽再生率可达6.97%。PCR检测初步证明目的LFY基因已整合到苹果基因组中。  相似文献   

12.
《山西农业科学》1995,23(4):3-9
用Agrobacteriumtumefaciens菌株LBA4404(含有质粒pBI121和pAL4404)介导转化普通烟草(Nicotianatabacum)的悬浮细胞,获得卡那霉素抗性(KmR)材料,其再生植株中表现GUS活性。以这一继代半年以上的转基因烟草细胞系为材料,与胡萝卜(Daucuscarota)细胞进行科间细胞共培养和低渗活化等处理,在含200mg·l-1卡那霉素(Km)的培养基上筛选,得到具有KmR的胡萝卜田胞系(ceR),其再生的胡萝卜植株中也有一部分表现为KmR,并在部分植株中检测到GUS活性。这一结果表明T—DNA可以通过科间细胞的共培养而从转基因烟草细胞中通过胞间通道转移到胡萝卜细胞中,并在胡萝卜细胞中表达。从这一结果来看,细胞共培养和有关处理的技术(ACHT)可能会成为植物基因转移的新技术。同时,发现共培养可以改进原来不亲和细胞之间的亲和性,这为植物细胞的识别和亲和性研究、亲和性的改善提供了方法和技术。  相似文献   

13.
以摩尔多瓦葡萄早期体细胞胚为受体,通过农杆菌介导辅以超声波处理转化 hGLP1基因。结果表明,摩尔多瓦葡萄体细胞胚的卡那霉素临界致死质量浓度为10 mg/L,农杆菌浸染时辅以超声波处理可显著提高GUS瞬时表达效率(高达69.4%)。采用此体系对摩尔多瓦葡萄进行转化,获得高瞬时表达和稳定表达的转化子,进一步筛选培养获得7株抗性再生植株。利用PCR扩增的方法进行检测,其中2株PCR检测呈阳性,初步证实 hGLP1基因已整合到摩尔多瓦葡萄基因组。  相似文献   

14.
[目的]对甘蓝型黑籽油菜遗传转化中预培养环节进行优化。[方法]利用甘蓝型黑籽油菜下胚轴为外植体,对油菜下胚轴的预培养及其浸染后影响再生和分化情况进行研究,分别从苗龄、激素两方面讨论了下胚轴再生与分化频率的影响。[结果]苗龄、激素与遗传转化之间存在密切的联系。在农杆菌介导的油菜下胚轴预培养最佳体系是:4 d苗龄的外植体在农杆菌侵染前进行5 d预培养,预培养基是MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L。绿色抗性愈伤组织获得GUS瞬时表达,PCR鉴定再生植株为转基因植株。[结论]该研究获得了最佳的预培养条件,为建立一个高效的遗传转化体系奠定基础。  相似文献   

15.
反义AcInv基因转化马铃薯方法的研究   总被引:17,自引:6,他引:11  
马铃薯反义AcInv基因,采用农杆菌介导法,选用生产上推广的9个普通四倍体栽培种,对影响转化的各个因素进行了优化研究。结果表明:在愈伤组织诱导过程中,卡那霉素(Km)的适宜浓度为100 mg/L;生根过程中为50 mg/L。外植体的预培养为:茎段2 d,叶盘3 d效果较好;农杆菌浓度当OD600值为0.5时对茎段和叶盘的转化效果均较佳;茎段和叶盘侵染时间分别达8 min和10 min时转化率较高;外植体与农杆菌共培养时间分别为2 d和3 d时,茎段和叶盘的转化率较高;各个品种的外植体在卡那霉素抗性培养基上均能形成愈伤组织,但只有1号(“大西洋”)最后从愈伤组织上分化成苗,形成正常植株,植株再生率为11.2 %,PCR扩增检测表明大部分转基因植株为阳性。  相似文献   

16.
豌豆凝集素基因转化单倍体烟草   总被引:2,自引:0,他引:2  
豆科植物凝集素在对根瘤菌的识别中起重要作用。通过农杆菌介导,采用叶盘法将豌豆凝集素基因转化单倍体烟草,获得了转基因再生植株。对转基因植株进行了GUS检测。该转基因单倍体烟草可用于非豆科植物进凝集素对根瘤菌的识别作用研究。  相似文献   

17.
The immature embryos of wheat cultivars Liaochun10, Tiechun1 and Fengqiang3 were bombarded with gold particles coated with pti5-vp16 by gene gun and disease resistant regenerated plants were attained. In order to confirm that the plants are genuine transformed ones, a series of molecular tests were conducted as follows. Firstly, transient GUS expression test on embryos two days after bombardment was done. There were many obvious blue spots produced on the surface of bombarded embryos after GUS staining, in which the maximum reached to 85 blue spots per embryo. Secondly, PCR test was performed with DNA from the regenerated plants obtained after double selection with ppt. 6 plants were found PCR test positive. At last, further verification analysis using dot hybridization and southern blotting was carried out on those PCR positive plants and the strong hybridization signals appeared as expected. All the above tests were uniformly indicated that the disease resistant regenerated plants were true transgenic plants. When inoculated with Blumeria graminis, transgenic wheat plants of PCR positive results were mostly resistant(R) after 7 days, and resis-tant, moderate resistant(MR), moderate susceptible(MS) at 14 days respectively. The disease severity of them was distinctively lighter than that of control.  相似文献   

18.
Morphologically normal plants were regenerated from Nicotiana plumbaginifolia cells transformed with an Agrobacterium tumefaciens strain containing a tumor-inducing plasmid with a chimeric gene for kanamycin resistance. The presence of the chimeric gene in regenerated plants was demonstrated by Southern hybridization analysis, and its expression in plant tissues was confirmed by the ability of leaf segments to form callus on media containing kanamycin at concentrations that were normally inhibitory. Progeny derived from several transformed plants inherited the foreign gene in a Mendelian manner.  相似文献   

19.
玉米基因枪转化受体材料的选择   总被引:3,自引:0,他引:3  
以4种玉米转化受体为材料,进行了基因枪转化玉米受体材料的研究。通过GUS基因的短暂表达和转Bar基因抗性绿苗分化率研究表明,预培养3~4d的玉米幼胚更适合作基因枪转化的受体材料。对转基因再生植株的PCR分析及除草剂抗性检验,证明Bar基因已整合到玉米基因组中。试验结果还表明,在转基因筛选过程中加入AgNO3,可提高抗性绿苗分化。  相似文献   

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