猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗保存期试验

猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗现行规定在2～8℃贮存期为7个月.为了探究该疫苗能否在2～8℃贮存1年仍符合〈中华人民共和国兽用生物制品质量标准〉中猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗质量标准（以下简称质量标准）,本试验将3批猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗在2～8℃贮存至8、10、12、14个月,然后按质量标准抽样做物理性状检验、无菌检验、安全检验和效力检验.结果表明,猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗在2～8℃保存1年后,各项检测均符合质量标准.     

用豚鼠效检猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗判断标准的初步研究

8批猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗共免疫PPV HI抗体阴性猪23头，每批2～3头；免疫阴性豚鼠24只，每批3只。均设不免疫为对照。定期采血，测定PPV HI抗体，进行猪和豚鼠免疫后抗体比较试验。全部出现抗体反应的时间，猪是免疫后1周，豚鼠是免疫后4周。23头免疫猪攻毒后，从血浆和内脏中均未分离到病毒，而从对照猪血浆和内脏中均分离到病毒，证明当免疫豚鼠HI≥64时，免疫猪能抵抗PPV强毒的攻击。     

猪细小病毒病灭活疫苗稳定性研究报告

为了研究猪细小病毒病灭活疫苗(L株,悬浮培养)的稳定性(保存期),将3批猪细小病毒病灭活疫苗实验室制品(批号为201401、201402和201403)于2～8℃保存3、6、9、12、18、24个月后分别进行性状、无菌性和效力等检验.结果 显示:3批实验室制品在2～8℃保存24个月,性状、无菌性和效力等检验结果均符合标...     

猪细小病毒病灭活疫苗纯化浓缩技术研究

为了研究采用中空纤维柱对猪细小病毒液进行浓缩是否可行,同时研究浓缩纯化后的疫苗安全性是否受到影响,采用0.45μm的中空纤维柱去除细胞碎片,然后用100 ku中空纤维浓缩纯化系统对猪细小病毒原液进行20倍浓缩纯化洗滤及重悬(最终相当于2倍浓缩),用病毒原液和2倍浓缩液分别配制疫苗,对两种疫苗的安全检验、效力检验进行比较...     

鸡自家大肠杆菌油乳剂灭活疫苗的研制

从河北省几个大肠杆菌病较严重的大型鸡场分离到29株大肠埃希氏菌，分离菌株的生化特性符合大肠埃希氏菌的特性。以该菌株为抗原研制了自家大肠杆菌油乳剂灭活疫苗，并对其物理性状、安全性、免疫效力、保存期及抗体消长规律进行了检测。结果表明，试验鸡疫苗在免疫后3周到9个月内对大肠杆菌的攻击获得全部保护。疫苗40℃保存15个月，其免疫效力没有下降。     

猪细小病毒病灭活疫苗佐剂筛选及配苗乳化工艺研究

为了筛选制备猪细小病毒病灭活疫苗(L株,悬浮培养)的佐剂,用注射用白油和法国赛比克公司生产的Montanide TM ISA 206 VG佐剂(简称206佐剂)分别配制灭活疫苗,通过对两种疫苗的配苗乳化工艺、疫苗性状、无菌检验、安全检验、效力检验和免疫期等方面进行比较.结果显示:与注射用白油配制的疫苗相比,使用206佐...     

猪细小病毒病的防治

据了解,在我国一些地方的中小型养猪场胎猪出生后死亡的现象越来越突出,损失较大。其中一种危害严重的疾病就是猪细小病毒病。 猪细小病毒是引起母猪繁殖障碍的主要病原。其特征是妊娠母猪胚胎死亡、流产、死产等。该病简称PVV病。其感染率很高,既可水平传播,又可垂直传播,消化道、呼吸道及交配、胎盘感染是常见的传染途径,也可由污染的人和器具及老鼠等作为媒介而传染。被污染的猪舍是细小病毒的隐藏场所,即使病猪离开猪舍空圈4个半月,经过常规办法清扫的猪圈,当再次放入易感猪时仍能被感染。     

猪繁殖与呼吸综合征油乳剂灭活疫苗的研制

利用PRRSV河南分离株研制了细胞毒油乳剂灭活疫苗(简称灭活疫苗),健康猪首免后,第5 d可检到抗体,第35 d抗体达到高峰,第63 d抗体仍维持较高的水平.试验结果表明,灭活疫苗对健康猪均能产生较强的保护力,猪免疫后20~35 d出现抗体高峰,并可持续3个月以上.应用试验结果显示,灭活疫苗免疫保护率均达92%以上.     

猪细小病毒病、伪狂犬病二联灭活疫苗保存期试验

将试制的3批细小病毒病、猪伪狂犬病二联灭活疫苗(批号201601、201602和201603),置于2～8℃冰箱内保存,间隔3、6、9、12和15个月后,分别取出进行疫苗的性状和效力检验,以确定疫苗的稳定性和保存期。结果,疫苗经保存15个月后,物理性状符合现行《中国兽药典》标准;疫苗接种豚鼠进行猪细小病毒部分的效力检验,HI抗体效价均≥1:64,对照鼠HI效价≤1:8;疫苗接种猪伪狂犬病毒中和抗体阴性健康猪进行猪伪狂犬病毒部分效力检验,血清中和指数均≥316,表明接种猪能产生对猪伪狂犬病毒坚强免疫力。试验结果表明,疫苗于2～8℃保存15个月的过程中,稳定性良好,物理性状无变化,免疫效力未降低,保存期达到15个月。     

鸽新城疫油乳剂灭活疫苗的研制

鸽新城疫(PND)是一种高度接触性、败血性传染病,对养鸽业有巨大威胁.为了控制本病的发生,利用从当地鸽群分离的鸽新城疫病毒,研制了鸽新城疫油乳剂灭活疫苗,并对该疫苗的安全性、免疫效力、免疫期及保存期等进行了研究.结果表明:该疫苗使用安全,无不良反应;具有良好的免疫原性,免疫21 d攻毒保护率达100%;免疫期可持续6个月,免疫7个月攻毒保护率达80%以上;在2～8 ℃条件下保存有效期可达12个月,保存15个月进行效力检验,攻毒保护率仍达80%以上.     

猪细小病毒X株在不同细胞上增殖效果比较

为选择猪细小病毒X株增殖的细胞系,对猪细小病毒X株在ST、PK-15、CEF、Vero细胞系上增殖情况进行比较,观察病变时间和病变情况,并分别测定其TCID50和血凝价。结果表明,猪细小病毒X株在这4种细胞上都能产生细胞病变,在ST、PK-15、CEF、Vero细胞上最先开始出现病变的时间分别为24、36、72和48 h,测其在以上4种细胞上的TCID50分别为10-6.4/0.1 mL、10-5.8/0.1 mL、10-2.1/0.1 mL和10-3.2/0.1 mL,HA分别为1 210、1 28、1 23、1 25,因此,建议选用ST细胞作为猪细小病毒X株的增殖细胞系。     

不同代次的猪细小病毒(PPV S-1株)NS1基因的克隆与序列分析

根据GenBank中猪细小病毒PPVNADL-2株NS1基因序列设计了一对引物,以PPVS-1分离株不同传代代次的DNA为模板．进行PCR扩增。将扩增产物分别克隆到pGEM．T载体中进行测序。结果表明：扩增片段长约2．2kb。包含完整的NS1基因,共编码662个氨基酸。应用DNAStar软件进行序列分析,结果显示：所有代次的NS1核苷酸同源性在99．4％以上,氨基酸同源性在98．5％以上;PPVS-1分离株在传代致弱的过程中,NS1基因出现了一些变异,有4处较为一致的突变,即1052位C→T、1636位G→A、1717位A→G、1732位T→G．对应的氨基酸变化分别为Thr^351→Met^351、Val^546→Met^546、Asn^573→Asp^573、Set^579→Ala^579．这可能是PPVS-1在ST细胞上传代致弱的分子基础之一。     

猪细小病毒病弱毒疫苗的保存期试验

将2批猪细小病毒病弱毒疫苗分别在2—8℃保存11个月、12个月、13个月,-20℃保存22个月、24个月、26个月,进行物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、安全试验及免疫效力试验,探讨不同保存条件和保存期对疫苗的影响。结果表明:物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验均符合《中国兽药典》的要求。安全试验每批次疫苗接种乳鼠全部健活;以10头份/头的剂量接种PPV HI抗体阴性猪,接种后定期采集血样和鼻肛分泌物进行病毒分离,结果均为阴性。疫苗在2—8℃保存至13个月,-20℃保存至26个月TCID_(50)均≥10~(6.25)笛/头份;接种PPV HI抗体阴性豚鼠抗体全部转为阳性;疫苗免疫PPV HI抗体阴性猪,免疫后1个月、7个月分别用PPV强毒攻击获得100%保护。     

不同猪瘟疫苗类型及剂量的抗体反应特性研究

随机选择3个猪场, 从9头母猪生下的仔猪中挑选81头仔猪。随机分成9组,每组又分为3个小组,每小组3头,分别免疫猪瘟组织苗(A)、猪瘟细胞苗(B)和猪瘟脾淋苗(C),各疫苗分别采用1头份、2头份和3头份3个剂量。于25日龄首免疫前后不同时间点采血,分离血清。应用ELISA和IHA两种方法分别对采集的540份血清检测猪瘟抗体。不同类型的猪瘟疫苗免疫试验结果表明：猪瘟脾淋苗免疫效果较好,但不同疫苗之间的抗体水平差异不显著。不同免疫剂量的试验结果显示：3种疫苗以3头份的剂量免疫后抗体反应略高于1头份和2头份,二免后都能获得较高的抗体水平。     

多重PCR检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的研究

根据GenBank上已发表的猪伪狂犬病毒(PRV)的gH基因、猪细小病毒(PPV)的VP2基因序列和猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF2基因序列,设计合成了3对特异引物,分别建立了PRV,PPV和PCV2的单项PCR诊断方法;通过对扩增条件的筛选,建立了PRV,PPV,PCV2的复合PCR诊断方法,利用1次PCR反应,即可同时扩增PRV的355 bp,PPV的195 bp和PCV2 487 bp的特异性片段,而猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、正常细胞(PK-15)扩增结果均为阴性,对PRV,PPV,PCV2的最低检出量分别为100 fg,1 pg和10 pg的DNA.该方法适合对PRV,PPV和PCV2的联合检测和鉴别诊断.     

猪细小病毒灭活疫苗NJ株毒种分离及鉴定

为防控猪细小病毒病,进行了猪细小病毒灭活疫苗毒种研究。将南京某猪场初产母猪流产胎儿的脾、肺等组织病料处理后接种ST细胞培养,获得了1株猪细小病毒强毒,将分离毒株适当稀释接种ST细胞,经3轮蚀斑纯化获得1株纯净的猪细小病毒NJ株(PPV-NJ株),作为疫苗毒株。将NJ株接种ST细胞培养连续传15代,每代次病毒效价均不低于1 ml 107.25TCID50、血凝素效价不低于29。选择第5代病毒液,灭活后与矿物油佐剂混合乳化制成灭活疫苗,以不同剂量分别免疫豚鼠和后备母猪,用血凝抑制试验(HI)和ELISA检测抗体效价。分别用剂量0.125 ml、0.250 ml和0.500 ml疫苗免疫豚鼠28 d后,各免疫组HI抗体效价均高于28,0.5 ml组HI抗体效价高达211,ELISA抗体均显示阳性(OD630≥0.32),分别用剂量0.5 ml、1.0 ml和2.0 ml疫苗免疫后备母猪后,HI检测结果显示,3个剂量组免疫后1周HI抗体效价高于26,3周后达峰值,至免疫后4个月略有下降,2.00 ml剂量组HI效价最高(211.75)。ELISA检测结果显示,各剂量组在免疫后1周均转阳(OD630≥0.32),免疫后4～18周均维持较高水平。HI抗体效价和ELISA抗体水平与免疫剂量均呈正相关性。结果显示,利用NJ株病毒制备的灭活疫苗具有抗体产生快、效价高等特点,显示出良好的疫苗开发前景。     

猪细小病毒N株免疫期测定

用PPV—N株制备成弱毒疫苗,在配种前1个月接种PPV HI抗体阴性的后备母猪,接种2周后检测PPV HI抗体均达到1：256以上。当怀孕到40d时用PPV强毒攻击,攻毒后40d剖杀的2头怀孕母猪其胎儿正常健活,胎儿心血未检测到PPV HI抗体,胎儿脏器未分离到病毒;自然分娩的2头母猪,其仔猪健活,未吃初乳仔猪PPV HI抗体阴性,仔猪脏器未分离到病毒;而强毒攻击的对照猪均出现不同程度的死胎,并从未吃初乳仔猪检测到PPV HI抗体和从死胎儿肺回收到病毒。按上述方法连续观察到第3胎（免疫后15个月）,证明免疫母猪怀孕到第3胎仍能抵抗PPV强毒攻击,说明PPV—N株对母猪的免疫期达1年以上。     

硒蛋氨酸对猪细小病毒体外增殖的抑制作用

以PK15细胞为模型,研究不同浓度的硒蛋氨酸对猪细小病毒(PPV)体外复制的抑制作用。结果表明,在2～8μmol·L-1范围内,硒蛋氨酸对细胞生长没有影响,但对猪PPV的体外复制呈现显著的抑制作用(P<0.05),且随着浓度的增加其抑制作用增强。还原型谷胱甘肽和甘露醇均有增强硒蛋氨酸的抑制病毒复制作用,两者同时添加时,其作用更明显。     

猪圆环病毒2 型疫苗研究进展

疫苗免疫接种是防控猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)的主要方式,PCV-2疫苗的研究与开发已成为国内外兽医工作者的关注热点.在国际市场上销售的商品化PCV-2疫苗主要包括亚单位疫苗、嵌合病毒疫苗和灭活疫苗,其中PCV-2灭活疫苗已在我国规模化猪场中广泛使用.综述了近年来国内外各类PCV-2疫苗研究进展及存在的问题,以期为猪圆环病毒病的防制与PCV-2新型疫苗的研发提供参考.