一株具有抑菌活性的粉背雷公藤内生真菌的分离鉴定

从粉背雷公藤新鲜植株中分离筛选具有抑菌活性的内生真菌.采用组织块培养法分离得到107株内生真菌.以金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌、变形球菌、枯草芽孢杆菌作为指示菌进行体外抑菌试验,通过滤纸片扩散法筛选出一株具有研究潜力的抑菌活性菌株(ETH-1),菌株ITS序列的系统发育分析结果表明ETH-1为拟茎点霉属真菌.     

高抗菌活性纳豆芽孢杆菌的诱变筛选

以市场上常见的4种用于制作纳豆食品的菌粉(菌液)为出发菌,采用2种不同诱变剂(紫外线和亚硝基胍)在不同剂量下复合诱变处理,试验结果表明,原始菌株在紫外线照射时间为80 s、NTG剂量为0.4 mg/m L时,致死率分别为83%和87%。以此诱变条件对纳豆芽孢杆菌进行紫外线、NTG复合诱变,通过与指示菌共同涂布培养,以菌体的生长情况、菌落直径的大小以及抑菌圈直径为初筛标准,初筛出了60株抑菌效果较好的菌株。进一步通过管碟法复筛,得到1株具有较高抗菌活性的突变株L-23,抑菌圈直径可达27 mm,传代培养10次后抑菌圈直径无显著变化,其抑菌活性具有较好的遗传稳定性。     

产抑菌活性物质放线菌菌株的筛选

[目的]筛选产抑菌活性物质的放线菌菌株。[方法]以金黄色葡萄球菌、对青霉素和头孢菌素类耐药的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作为指示菌,采用滤纸片扩散法对300株放线菌的发酵产物进行抗菌活性筛选,通过最小抑菌浓度法（MIC）对筛选的阳性菌株进行抗菌活性测定。[结果]筛选到抗菌活性物质产生菌111株,抑菌率为37.0%;其中对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和耐药金黄色葡萄球菌有抑制活性的菌株分别为111、10和47株。各菌株的最小抑菌浓度有很大差别,菌株174883对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强,其发酵样品稀释到2 048倍仍然表现出抑菌活性。用青霉素酶和头孢菌素酶作用于阳性菌株发酵产物,筛选到6株菌株代谢产物的抑菌活性变弱,菌株32349和kj0428的抑菌活性被抑制最明显。[结论]筛选得到的阳性放线菌菌株具有良好的抗菌活性,为新型抗生素的筛选提供了研究基础。     

一株具有抑菌活性的粉背雷公藤内生真菌的分离鉴定

从粉背雷公藤新鲜植株中分离筛选具有抑菌活性的内生真菌。采用组织块培养法分离得到107株内生真菌。以金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌、变形球菌、枯草芽孢杆菌作为指示菌进行体外抑菌试验,通过滤纸片扩散法筛选出一株具有研究潜力的抑菌活性菌株(ETH-1),菌株ITS序列的系统发育分析结果表明ETH-1为拟茎点霉属真菌。     

一株新型嗜水气单胞菌拮抗菌的筛选及鉴定

从草鱼养殖池塘的水样及底泥样品中筛选对嗜水气单胞菌有拮抗作用的菌株,初步研究其抑菌效果,为水产养殖过程中嗜水气单胞菌的生物防治提供菌株资源.以嗜水气单胞菌为指示菌,采用点喷法进行拮抗性菌株初筛,采用牛津杯法进行复筛;通过细菌形态观察、生理生化特性试验、16SrDNA基因测序和系统发育分析,对筛选菌株进行分类鉴定.得到1株对嗜水气单胞菌有明显抑制作用的拮抗菌株WM-1,抑菌圈直径达21.8mm,经鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus).该菌筛选得到的拮抗菌WM-1,对嗜水气单胞菌抑制效果显著,为进一步研究其抑菌机理提供了菌种资源.     

淫羊藿内生真菌的分离及抑菌活性研究

从淫羊藿根、茎、叶分离出23株内生真菌,对分离出的真菌利用琼脂块法进行初选与滤纸片法进行复选,并以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)4种微生物为指示菌对分离到的内生真菌进行抗菌活性检测。结果发现,分离得到的内生真菌中有10株菌株具较好的抑菌活性。对大肠埃希菌抑菌效果最好的为标号K7的菌株,抑菌圈直径为18.0 mm;对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌效果最好的均为标号B3的菌株,其抑菌圈直径分别为18.0、15.0 mm;而对灰霉病菌抑菌效果最好的为标号K6的菌株,其抑菌圈直径达到12.0 mm。     

海绵放线菌的分离与抑菌活性筛选研究

本文用5种分离培养基从大连海域潮间带采集的2种海绵中分离培养放线菌,以副溶血弧菌、哈维弧菌和鳗弧菌3种海水养殖病原菌为指示菌对放线菌进行抑菌活性的筛选,并基于16S rDNA序列对筛选出的抑菌活性较强的海绵放线菌进行多样性分析。结果表明:从海绵中共分离出57株海绵放线菌,以寡营养的M2培养基分离效果最好。抑菌活性筛选有55株对3株指示菌中的至少1株具有抑菌活性;有11株抑菌活性较强,对3株指示菌均具有抑菌活性,初步鉴定均属于链霉菌属。由此表明,海绵放线菌多能够产生对海水养殖病原菌较强的抑菌活性,是天然活性物质的重要来源,在海水养殖应用方面具有较大的开发价值。     

筛选和利用海洋细菌防治玉米纹枯病试验

从江苏省南通市沿海滩涂、近海海水、海藻体内分离到了862株海洋细菌,以玉米纹枯菌为指示菌对其抑菌活性进行检测,经初筛、复筛、定量复筛,获得7株抑菌效果较好的拮抗细菌,并对筛选出的高效拮抗菌株进行室内抑菌及田间防病测定试验。结果表明,NH-8菌株的拮抗活性和防效最强,通过形态特征、生理生化及16S rDNA同源性序列分析,初步鉴定该菌株为芽孢杆菌。     

植物乳杆菌SD26的筛选及对白色念珠菌的抑菌作用

[目的]从泡菜中成功筛选分离出1株乳酸菌并对其抑制白色念珠菌进行初步研究.[方法]采用涂布平板法从四川大凉山农家泡菜中分离筛选出1株乳酸菌,经形态学观察、生理生化试验及16SRNA基因序列对其进行鉴定.测定该筛选菌株对白色念珠菌的抑菌活性大小、生长曲线影响、最小抑菌浓度和细胞形态作用,初步研究其抑菌机理.[结果]菌株SD26为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),其对白色念珠菌的抑菌圈直径可达到26 mm,共培养能显著抑制白色念珠菌的生长.该植物乳杆菌SD26对活菌数为3.0 × 107 CFU/mL的白色念珠菌的最小抑菌活菌数为4.0×108 CFU/mL.电镜观察结果表明该植物乳杆菌SD26能破坏白色念珠菌细胞膜的完整性.[结论]从泡菜中筛选的乳酸菌为植物乳杆菌SD26,其对白色念珠菌的抑菌活性是通过破坏其细胞膜起作用.     

巨大芽孢杆菌B196菌株发酵滤液的抑菌谱及其稳定性

分别以菌丝生长速率法和抑菌圈法测定了巨大芽孢杆菌B196菌株发酵滤液对18种植物病原真菌和7种细菌的抑制作用,发现该滤液抑菌谱较广,对供试的所有真菌均有抑制作用,对其中8种真菌的抑菌率在80％以上;对6种供试细菌有抑制作用,其中对水稻细菌性条斑病菌的抑菌活性最强,抑菌圈直径达到27.67mm.以水稻纹枯病菌为指示菌,测定了B196菌株发酵滤液的酸碱稳定性、热稳定性、蛋白酶稳定性及紫外线稳定性.结果表明,发酵滤液在pH 2 ～8条件下抑菌活性没有明显变化;经121℃处理20 min,抑菌活性为原有活性78.43％;对胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K均稳定,但对木瓜蛋白酶敏感;对紫外线稳定,在处理4h后,抑菌率在80％以上.     

5种虫生拟青霉高产VE菌株的筛选及优化

[目的]为从真菌中开发利用天然VE提供一定的科学依据和参考。[方法]用紫外分光光度法测定5种虫生拟青霉中天然VE的含量,采用正交试验对细脚拟青霉进行高产VE培养基的优化。[结果]细脚拟青霉中的天然VE含量最高;所得优化的培养基碳源为甘露糖,氮源为尿素,微量元素为铁,pH值自然。[结论]该研究中的真菌资源具有开发脂溶性物质的极大潜力。     

比色法测定细脚拟青霉胞内甘露醇及羟自由基清除率

[目的]采用比色法测定细脚拟青霉菌丝体中的甘露醇含量及羟自由基清除率。[方法]以细脚拟青霉为供试菌株,用超声提取法提取细脚拟青霉菌丝体中的甘露醇,以D-甘露醇为标准品,绘制其标准曲线并计算其回归方程,通过测定甘露醇的吸光度计算细脚拟青霉菌丝体中的甘露醇含量及羟自由基清除率。同时,测定培养时间和提取时间对菌丝体中甘露醇含量和抗氧化活性的影响。[结果]甘露醇在412 nm处有最大吸收峰,质量浓度在10~80μg/m l范围内其具有良好的线性关系,其回归方程为:C=103.09A-1.381 4,r=0.998 8;平均回收率为101.47%,RSD为2.6%(n=5)。菌丝体中的甘露醇含量及羟自由基清除率的变化趋势基本不随培养时间改变,培养第6天时均达到最高值,分别为73.56μg/m l和47.95%。[结论]为进一步研究细脚拟青霉的抗氧化功能提供理论依据。     

3株泰山虫草无性型的分子生物学研究

[目的]研究3株泰山虫草无性型的分子生物学特性。[方法]以野生泰山虫草子实体分离出的3个菌株为材料,通过对rDNAITS区的扩增、克隆和测序来鉴定虫草的无性型。[结果]3个菌株不是同1种,COA1为蛹草拟青霉,COA2为球孢白僵菌,COA3为细脚棒束孢,由此推断泰山虫草只是以地理位置得名。[结论]研究了3株泰山虫草无性型的分子生物学特性。     

超声提取对细脚拟青霉菌丝体抗氧化活性的影响

[目的]研究超声提取对细脚拟青霉菌丝体抗氧化活性的影响,确立最佳提取工艺。[方法]以DPPH自由基清除率为指标,采用单因素试验和L9（34）正交试验法对提取溶剂、提取次数、超声温度、时间、料液比和超声功率等条件进行研究。[结果]超声提取细脚拟青霉菌丝体中抗氧化活性成分的最佳工艺条件为：以水为提取溶剂,提取温度30℃,提取时间30 min,料液比1∶30,提取功率290 W,提取次数2次。[结论]与常规提取方法相比,超声波提取法是一种简单、耗时短、效率高的提取方法。     

细脚拟青霉液体栽培及氨基酸成分分析

[目的]对细脚拟青霉进行液体栽培研究,并对其氨基酸成分进行分析。[方法]利用马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基进行液体栽培试验,测定孢梗束产量,并对液体栽培的细脚拟青霉孢梗束和摇瓶培养的细脚拟青霉菌丝体的氨基酸含量进行测定比较。[结果]液体栽培的干孢梗束产量为2.50 g/L;氨基酸分析表明,细脚拟青霉孢梗束的芳香族氨基酸是菌丝体中的2倍,但菌丝体中的人体必需氨基酸、儿童必需氨基酸和甜味氨基酸含量高于孢梗束。[结论]该研究为细脚拟青霉相关产品的开发提供了参考。     

40株虫生真菌发酵液对白色念珠菌的抑制作用

以白色念珠菌(Candida albicans)作为模型菌株,采用杯碟法对40株虫生真菌液体发酵后的代谢产物进行抑菌活性试验,从而筛选出与高活性抑菌代谢产物相对应的菌株.结果表明,古尼拟青霉(Paecilomyces gunnii)RCEF0866、RCEF0857菌株、斜链拟青霉(Paecilomyces sp.)RCEF0189菌株、多形白僵菌(Baeuveria amorpha)RCEF0285菌株、绿色野村菌(Nomuraea prasina)RCEF0879菌株经液体发酵产生的代谢产物具有较强的抑制白色念珠菌活性,其抑菌圈直径分别为17.28、16.59、17.07、15.66和22.78 mm.     

脂肽类生物表面活性剂微生物合成菌的筛选

对采集的16个样品经富集培养和平板分离,共获得122株菌株.采用排油活性法和表面张力测定法筛选出5株产表面活性剂的优良菌株,均能将发酵液表面张力降低到40.0mN/m以下.其中一株假单胞菌H0591菌株将发酵液表面张力下降到了32.2mN/m.该菌产生的表面活性刑具有良好的酸碱稳定性和耐温性,且显示出了很强的抗真菌活性.薄层色谱(TLC)后通过茚三酮显色分析表明该表面活性剂为脂肽类化合物.     

淡紫拟青霉对根结线虫的防治作用

结果表明:淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus菌株FZ0289对根结线虫卵的侵染率达98.2%;FZ0289麦粒菌剂和麸皮菌剂对黄瓜根结线虫病的防治效果分别为77.7%和73.3%,增产19.7%.     

淡紫拟青霉种内RAPD多态性分析

对来自中国不同地理来源的20株淡紫拟青霉,及拟青霉属其它菌株4株进行RAPD分析,从RAPD扩增结果可知淡紫拟青霉种内具有丰富的遗传多样型。RAPD扩增指纹图谱有效地分辨不同菌株的基因型。聚类分析结果表明,菌株间差异与地理来源无关,与防治效果正相关;种内的遗传差异要大于种间的差异,说明种内可能含有隐含种;未鉴定菌株为淡紫拟青霉。     

乳酸对淡紫拟青霉防治根结线虫的辅助作用研究

为提高淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)在土壤中的定殖率及对根结线虫病害的防治效果,在淡紫拟青霉制剂中添加了乳酸.室内试验表明,乳酸能增强淡紫拟青霉发酵液的杀根结线虫效果,培养基中加乳酸增加了淡紫拟青霉对根结线虫卵孵化的抑制效果,并且随着乳酸浓度的增加,杀虫、抑制孵化效果呈上升趋势;乳酸可以增加...