大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA提取和反转录活性研究

[目的]研究大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA的质量及反转录活性。[方法]在大赖草总DNA转化小麦幼苗叶片mRNA差异显示相关试验中,利用改进的TRIzol法,从幼苗叶片中提取总RNA,紫外光谱分析,1.2%琼脂糖电泳检测,并进行随机引物RT-PCR扩增。[结果]OD260 nm/OD280 nm比值为1.95～1.98;总RNA和RT-PCR电泳条带均表现出整齐、清晰。[结论]获得的总RNA质量好、纯度高,有很高的反转录活性,完全适合于进一步的分子生物学研究。     

水稻叶片mRNA差异显示技术中总RNA的提取和检测

水稻叶片mRNA差异显示技术中,叶片总RNA的质量是十分关键的因素,介绍水稻叶片mRNA差异显示相关试验中,叶片总RNA提取和检测的方法及需要注意的一些问题。     

凡纳滨对虾总RNA完整性的正确评估

凝胶电泳技术通常被用于总RNA完整性检测,一般认为28S和18S rRNA条带亮度的比值大于等于2表示总RNA完整性良好,该比值越小表明总RNA降解越严重。为了检测这一标准在水产虾蟹类中是否继续适用,分别对凡纳滨对虾rRNA和mRNA的完整性进行了分析。用TRIzol分离纯化的凡纳滨对虾总RNA经凝胶电泳检测,发现其28S∶18S rRNA的比值远小于2;但是以同样的总RNA为模板进行RT-PCR,能顺利扩增出长约1 100 bp的ACT和e EF1A基因序列。进一步的3'∶5'分析显示这2个内参基因mRNA的3'∶5'ratio分别为2.79和1.53,直接表明被测mRNA完整性良好。因此,凝胶电泳低估了水产虾蟹类总RNA的完整性,建议采用3'∶5'分析技术对水产虾蟹类总RNA完整性进行检测。     

基于转录组SNP构建油茶主要品种资源的分子身份证

【目的】近年来，油茶（Camellia oleifera）产业发展迅速，已成为中国四大油料之一。油茶良种不断涌现，但品质参差不齐，“同名异物、同物异名”等现象时有发生。建立油茶品种资源的单核苷酸多态性（single-nucleotide polymorphism,SNP）分子标记数据库，筛选重要SNP位点，开发油茶品种资源DNA指纹图谱，构建油茶品种资源的分子身份证，为品种鉴别、品种追溯等提供分子水平鉴别技术支撑。【方法】以221份普通油茶品种资源为材料，提取未成熟种子RNA，进行转录组测序。以二倍体南荣油茶基因组为参考，识别供试油茶品种资源的SNP位点并基因分型，利用SNP数据分析油茶群体及亚群的遗传多样性，分析SNP位点的观测杂合度、期望杂合度、多态信息含量（PIC）等信息，筛选核心SNP位点并采用Sanger测序验证，得到最优SNP位点组合后，结合品种资源基本信息构建油茶品种资源分子身份证。【结果】从油茶转录组中共检测到1 849 953个高质量SNP位点。群体遗传多样性分析发现，油茶群体观测杂合度为0.2966，期望杂合度为0.2462，固定指数为-0.2048,PIC为0.2...     

猪Ghrelin的基因克隆及其组织中mRNA分布的研究

从猪下丘脑、胃等组织中提取总RNA，根据已发表的猪Gkklin mRNA序列设计合成引物，通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行cDNA扩增，获得了282bp的片段，克隆于pMD-18T载体后进行序列分析，确认PCR产物为Ghrelin cDNA。检测结果表明：初生仔猪的下丘脑和90d生长猪下丘脑、胃底部、十二指肠、空肠、回肠、胰腺、肝脏、肾脏、心脏等部位组织中均有Ghrelin mRNA分布。     

油茶优良无性系的RAPD分子鉴别

油茶优良无性系是当前生产上的主要良种．通过采用RAPD分子标记方法。从180多个引物中筛选出22个具有多态性的随机引物进行扩增。得到141个位点。其中有91个是多态位点。以此为基础建立油茶优良无性系的RAPD分子鉴别体系．同时还探索出油茶叶片总DNA的分离技术和建立了RAPD反应体系，为油茶分子技术育种积累了相关的知识并奠定了DNA技术基础．     

羊草ClassⅡ几丁质酶基因的克隆及序列分析

1材料与方法 1．1植物材料采摘自然生长于黑龙江省安达市（119°28’E，44°1’N）盐碱地的羊草叶片，-70℃冰箱保存。1．2总RNA的分离与eDNA文库的构建用液氮研磨叶片后，用TRIZOL Reagent（GIBCO BRL）提取总RNA，使用PolyATtract mRNA Isolation Systems（Promega）提取mRNA。然后采用Stratagene提供的cDNA合成体系合成cDNA，体外包装和扩增，构建羊草叶片的cDNA文库。     

一种简单经济的提取水稻未成熟种子RNA的方法

多糖污染是从田间水稻叶片和未成熟种子等高含糖组织中提取高质量RNA的主要限制因素.我们介绍一种简单经济的RNA提取方法,它适合从水稻叶片和未成熟种子这些富含多糖的组织中提取总RNA.这种方法可以克服产率低和质量低的问题.RNA提取后经过电泳和分光光度计分析结果表明,每克水稻组织总RNA产率在520 μg到800 μg之间,OD260/230比值大于2.0,OD260/280比值大于1.9.提取的RNA可以用于体外反转录cDNA、mRNA分离和基因表达系列分析（serial analysis of gene expression,SAGE）库的构建.     

植物RNA结合蛋白的研究进展

从RNA结合蛋白的鉴定方法，RNA结合蛋白的基序，以及植物RNA结合蛋白在调控叶绿素mRNA的稳定和转录、植物抗逆反应、开花和激素信号传导等过程中的作用等方面介绍了植物RNA结合蛋白的研究进展。     

杜仲树皮总RNA提取方法的比较

[目的]从杜仲树皮中获得高质量的总RNA。为开展杜仲后续mRNA分离、杜仲抗真菌蛋白基因克隆、及杜仲树皮cDNA文库构建等研究奠定基础。[方法]以杜仲树皮为材料,分别采用改良CTAB-LiCl法、RNApure Plant Kit法和RNAiso Plus法进行总RNA提取,用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性,用紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率。[结果]改良CTAB-LiCl法和RNA-pure PlantKit法提取的杜仲树皮总RNA纯度和完整性较高,A260/A280值均在1.800~2.000,28和18 SrRNA条带清晰,RNA得率较高;而RNAiso Plus法提取的杜仲树皮总RNA的纯度和完整性较低,A260/A280值为1.652,28S和18S rRNA条带存在降解和弥散现象,RNA得率低。[结论]改良CTAB-LiCl法和RNApure Plant Kit法抽提获得的杜仲树皮总RNA质量较高,能满足后续RT-PCR和RACE等试验的要求,这为成功克隆杜仲相关基因奠定了基础。关键词杜仲树皮;RNA提取;方法;比较