淡紫拟青霉几丁质酶的形成条件

采用摇瓶试验，研究了淡紫拟青霉几丁质酶的形成条件，在马铃薯煎汁，玉米粉，黄豆粉３种天然基质中。以马铃薯剪汁的产酶效果最好，蔗糖，果糖，山梨糖和可溶性淀粉等碳源的添加能增加酶的产量，在氮源方面。酶母膏，蛋白胨，尿素，精氨酸等能促进酶的形成。     

淡紫拟青霉多糖提取工艺研究

[目的]研究淡紫拟青霉多糖的提取工艺,为进一步开发提供参考依据。[方法]首先通过液体发酵获得淡紫拟青霉菌丝,然后以水为提取剂,在不同的提取条件下提取多糖,并测定其含量。[结果]淡紫拟青霉多糖的最佳提取工艺为：浸提温度70℃、浸提料液比1：30、浸提3次,2h/次。[结论]该提取工艺操作简便、浸提时间短、提取效率高。     

淡紫拟青霉角蛋白酶特性初步研究

【目的】对淡紫拟青霉PL-HN-16角蛋白酶的酶学特性进行初步研究。【方法】以鸡毛(黄色和黑色)、鹅毛、猪毛角蛋白为发酵底物,并作为培养基中的惟一氮源,观测发酵液的变化及培养液中的角蛋白酶活性,同时以鹅毛为发酵底物,对淡紫拟青霉角蛋白酶粗酶的最适作用温度和pH进行了初步研究。【结果】PL-HN-16对鸡毛、鹅毛、猪毛均能降解,PL-HN-16角蛋白粗酶最适作用温度为40℃、最适pH为8.0。【结论】在最佳作用温度与pH条件下,PL-HN-16角蛋白酶活性为41U/mL,PL-HN-16对不同发酵底物的降解活性不尽相同。     

淡紫拟青霉研究进展与展望

综述了近年来国内外对淡紫拟青霉的分类、生防机制、分子生物学及次生代谢物等方面的研究概况,并对淡紫拟青霉菌的发展前景进行了展望。     

淡紫拟青霉种内RAPD多态性分析

对来自中国不同地理来源的20株淡紫拟青霉,及拟青霉属其它菌株4株进行RAPD分析,从RAPD扩增结果可知淡紫拟青霉种内具有丰富的遗传多样型。RAPD扩增指纹图谱有效地分辨不同菌株的基因型。聚类分析结果表明,菌株间差异与地理来源无关,与防治效果正相关;种内的遗传差异要大于种间的差异,说明种内可能含有隐含种;未鉴定菌株为淡紫拟青霉。     

淡紫拟青霉对烟草根结线虫病的防治效果

利用盆栽试验研究淡紫拟青霉菌剂,杀线虫剂和日晒消毒土壤对烟草根结线虫病的防治效果及其对烟草植株生长的影响。结果表明,淡紫拟青霉能有效地抑制烟草根结线虫的发生并促进植株生长,施用菌剂的植株病情指数比对照下降３４％,根部和地上部植株鲜重,叶长和株高均有明显增加。     

淡紫拟青霉E7菌株抗逆性研究

对淡紫拟青霉E7菌株的耐热性、耐酸碱性、耐盐性及耐化学药物特性进行测定。结果显示,在PSA培养基上,E7菌落生长和产孢的适宜温度为5～40℃,最适温度为29℃;E7菌株在pH4—13范围内的培养基上均可以生长;在40℃和50％条件下E7菌株的LT50分别为78．8和40．8min;E7菌株有较强的耐盐碱能力,对氯霉素有较强的耐受性;E7菌株对杀菌剂多菌灵、百菌清、苯醚甲环唑、除草剂百草枯以及消毒防腐剂福尔马林较敏感,其EC50分别为21、13、6、16、120μg／mL,对杀线虫剂阿维菌素和辛硫磷、杀菌剂三唑酮不敏感,其EC50分别为175、338、337μg／mL。表明淡紫拟青霉E7菌株有较强的抗逆性,对一些化学农药的兼容性也较好。     

牛整合素β6基因的原核表达及其抗血清的制备研究

[目的]为深入研究ITGB6亚基的基因功能奠定基础。[方法]利用基因克隆技术获得整合素β6基因（ITGB6）胞外区,然后将其重组到pET-32a（＋）质粒中,经鉴定及序列分析确定获得了重组阳性克隆;转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导及蛋白纯化。[结果]SDS-PAGE结果显示,在94 kD处出现特异性条带;对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备ITGB6蛋白抗血清,Western-blot分析表明抗血清可与原核表达的ITGB6蛋白特异性结合,ELISA方法检测抗血清的效价可达到1∶2 560。[结论]成功表达了牛的重组整合素β6基因。     

淡紫拟青霉防治植物线虫研究进展

淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus）是防治植物线虫较有潜力的生物防治菌剂之一,对植物线虫卵具有较强的寄生能力。就其生物学特性、防治机理、环境安全性等方面进行了阐述。     

猪带绦虫组织蛋白酶B基因的克隆表达及抗血清的制备

[目的]探索猪带绦虫组织蛋白酶B基因克隆、原核表达及抗血清制备的方法。[方法]根据从Gene DB获得的猪带绦虫组织蛋白酶B的基因序列设计特异性引物,以猪带绦虫的c DNA为模板,扩增出猪带绦虫组织蛋白酶B基因的开放阅读框。将去掉信号肽的部分进行了原核表达,用重组蛋白免疫青紫蓝灰兔,并制备高效价抗血清。[结果]成功克隆了猪带绦虫组织蛋白酶B基因的开放阅读框序列,将其命名为Tscp B,长度为1 074 bp,编码357个氨基酸,理论蛋白分子质量约为39.71 ku,具有组织蛋白酶B的特征结构域。采用大肠杆菌原核表达系统对目的蛋白进行大量表达,成功获得了大小约38 ku的猪带绦虫组织蛋白酶B的重组蛋白,此目的蛋白以包涵体的形式存在。Western blotting表明,猪囊尾蚴病阳性血清可以与纯化的重组蛋白发生特异性结合,说明被猪囊尾蚴感染过的猪血清中存在组织蛋白酶B的抗体。[结论]猪带绦虫组织蛋白酶B重组质粒能在大肠杆菌系统中高效表达,且该蛋白具有较高的免疫活性。     

人表皮生长因子cDNA的克隆、原核表达和抗体的制备

根据已发表的人表皮生长因子(hEGF)mRNA序列设计引物,上游引物5′端引入山羊β-乳球蛋白信号肽序列。PCR从人肝脏混合单链cDNAs中扩增出hEGF cDNA;测序表明,克隆的hEGF cDNA与已发表的序列完全相同;经Signalp V1．1软件分析,山羊β-乳球蛋白信号肽序列与hEGF cDNA能在预计位点切割。将此cDNA克隆到GEX-6P-1中,经IPTG诱导,在BL21(DE3)大肠杆菌中表达约32ku的GST-hEGF融合蛋白。将此cDAN插到pcDNA-3中,用此重组质粒免疫青紫蓝兔,经6次免疫后获得抗hEGF的多克隆抗体,该抗体能识别GST-hEGF融合蛋白。     

淡紫拟青霉几丁质酶提取工艺的优化研究

[目的]为优化淡紫拟青霉几丁质酶的提取工艺.[方法]以硫酸铵溶液为提取剂,先通过单因素试验,确定硫酸铵浓度、透析温度、透析时间和透析液酸碱度的最佳水平,然后通过正交试验确定最住浸提条件.[结果]淡紫拟青霉几丁质酶的最佳提取工艺为：硫酸铵浓度60％、透析温度30 ℃、透析时间2d,透析液pH 6,在该条件下几丁质酶酶活可达0.0534 U.[结论]该结果可以为几丁质酶的进一步开发和工业化生产提供一定科学依据.     

淡紫拟青霉PL050705菌株的根际定殖及对根际真菌群落结构影响

室内平板法测定了生防菌淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus )PL050705菌株对柑橘慢衰病株根际主要真菌的拮抗能力,PL050705菌株对测试真菌均具有强的拮抗能力.田间试验的清水对照(CK)、PL050705+虾壳粉(p+p)、PL050705(p)、灭线磷(e)4个处理组中,p+p、P的处理组PL050705在柑橘根系周年均以保持高定殖量;p+p处理组PL050705菌株的B-P优势度指数周年保持较稳定高水平(0.444～0.526),P处理组PL050705菌株的B-P优势度指数周年呈下降状态(0.590～0.256);根际土壤真菌多样性指数(Shannon-Wienner指数)分别是P+p>p>CK>e.试验表明PL050705菌株具有良好拮抗与根际定殖能力,特别是与虾壳粉混合施用情况下,能周年保持种群优势度,并提高土壤真菌种群多样性.     

植酸酶鼠源多克隆抗血清的制备

 【目的】制备灵敏性高、特异性强的植酸酶多克隆抗体。【方法】将初步纯化的麸皮植酸酶蛋白经凝胶电泳鉴定纯度后,按50 μg蛋白/只?次免疫Balb/C小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后一次免疫60 d后,摘眼球取血,制备抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定敏感性和特异性。【结果】凝胶电泳的麸皮植酸酶只有一个条带;血清植酸酶抗体效价达1×104;半数抑制浓度达148.87 ng?mL-1。此抗血清对市售的普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩的微生物植酸酶的半数抑制浓度分别达到165.59 、163.80和166.51 ng?mL-1,交叉反应率分别为89.85%、90.88%和89.41%。100℃煮沸5 min后的麸皮、市售普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩酶半数抑制浓度分别为2 871.34、5 208.85、7 914.12和5 804.24 ng?mL-1,交叉反应率分别为5.18%、2.86%、1.88%及2.56%。【结论】制备出了具有高效价、高灵敏度和特异性的鼠源植酸酶多克隆抗体,为植酸酶单克隆抗体制备及植酸酶ELISA检测试剂盒研制奠定了基础。     

南芥菜花叶病毒外壳蛋白的克隆表达及抗血清的制备

依据报道的ArMV外壳蛋白基因(coat protein,cp)序列设计引物,通过RT-PCR扩增得到长约990bp的ArMV cp基因亲水基团部分片段,将目的片断克隆到原核表达载体pEGX-6p-1中,构建ArMV cp基因与GST蛋白融合表达载体pEGX-cp,重组载体化大肠杆菌BL21,经IPITG诱导后,融合蛋白GST-cp得到了特异表达。用12%的SDS-PAGE分析结果表明,表达产物大小为63.2 kDa主要以包含体的形式存在。用冰冷的KCl显色,分离表达的蛋白质特异条带制备抗体,免疫家兔后得到特异性较强的抗血清,经酶联免疫法检测效价为1∶100 000。     

淡紫拟青霉几丁质酶及其在植物寄生线虫生防中的研究

淡紫拟青霉几丁质酶是一种对植物线虫有生防活性的酶。综合报导了国内外学对这类酶的主要性质、研究背景、生防作用等的研究结果。根据该酶的特点和作用,提出淡紫拟青霉几丁质酶为线虫防治、线虫病原真菌研究及资源调查、基因工程应用、植物病害防治等领域开辟了广阔的应用前景。     

多羟基双萘醛(WCT)抗血清的制备与不同酶联免疫吸附检测法的对比试验

通过对多羟基双萘醛分子式上的醛基的改造,利用混合酸酐法使小分子化合物多羟基双萘醛能够与大分子蛋白质BSA相结合,形成人工抗原,注射兔子,成功制备WCT抗血清。通过ELISA检测,血清的效价为1∶256,非专化性效价为1∶2。本试验比较了酶联夹心法和间接酶联法的灵敏度,发现间接法检测WCT的灵敏度比夹心法相对高,这为应用间接法检测WCT提供了依据。