鲤鱼HSP70基因组织表达差异研究

1材料与方法 1．1材料 供试鲤鱼购自成都市洗面桥市场。主要试剂：TR—Iaol总RNA提取试剂盒购自Invitrogen公司，反转录试剂盒、pMD-18T载体、D12000DNA和如DNA聚合酶购自大连宝生物工程有限公司；琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒购自Axygen公司；DEPC原液（Sigma分装）、JM-109感受态细胞购自大连宝生物工程有限公司，其他试剂均为国产分析纯。     

野桑蚕不同组织细胞色素P450CYP30581V1基因的诱导表达特征研究

1材料与方法 1．1材料与试剂野桑蚕采自苏州大学独墅湖校区桑园；宿主菌E．coli TOP10为苏州大学基础医学及生物科学学院生物资源与功能基因组学研究室保存；植物次生性物质芸香苷和内源性物质蜕皮激素均购自SIGMA公司；氯氰菊酯购自拜耳杭州作物科学有限公司；外源性化合物NaF（分析纯）购自西安化学试剂厂；RNAiso reagent试剂盒购自TakaRa公司；其他常用试剂购自TaKaRa公司或上海生工生物工程技术服务有限公司：     

五指山小型猪生长激素释放激素受体基因的cDNA克隆及序列分析

1材料与方法 1．1材料随机采集五指山猪品种耳组织样共30份，将其迅速放入液氮带回实验室，-70℃保存备用。 1．2试剂RT—PCRKit、PCR产物纯化回收试剂盒、重组质粒抽提试剂盒，均购自天根生物工程有限公司；SalⅠ、BamHⅠ、pMD18-TVector试剂盒、Ecoli DH5α均购自TaKaRa公司。     

一种高效提取棉花细胞核的技术

1材料与方法1．1材料二倍体亚洲棉品种石系亚1号，来自中国农业科学院棉花研究所。试剂HEPES购自Amresco公司，DTY购自BioBasicInc．，TritonX-100、PVP40购自Sigma公司，DAPI购自Roche公司，其他试剂均为国产分析纯。     

猪繁殖与呼吸综合症GP5蛋白的纯化与免疫活性分析

1材料与方法1．1表达菌及试剂猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）6P-1-GP5表达质粒由该实验室保存。Novagen蛋白纯化试剂盒、硝酸纤维素膜（NC膜）均购自华美公司；弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂购自Sigma公司；辣根酶标记兔抗猪IgG购自北京中杉金桥生物技术有限公司；其他常规试剂均由国内生产。试验用豚鼠由中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物厂提供，体重400-500g，共8只。     

家鹅球虫种类鉴定及国内一新记录种

用卵囊形态特征观察与回归动物试验相结合的方法，对从江苏省昆山市19个鹅群中分离获得的7种球虫进行了种类鉴定，证实6种球虫为家鹅的真实寄生虫，其中艾美耳属(Eimeria)5种：鹅艾美耳球虫(E．anseris)、棕黄艾美耳球虫(E．fulva)、赫氏艾美耳球虫(E．hermani)、有害艾美耳球虫(E．nocens)和条纹艾美耳球虫(E．striata)；泰泽属(Tyzzeria)1种：稍小泰泽球虫(T.parwula)。检出的1种等孢属球虫(Isospora sp)为家鹅的假寄生虫。条纹艾美耳球虫为国内新记录，赫氏艾美耳球虫和棕黄艾美耳球虫为江苏省新记录。19个鹅群均有球虫感染，稍小泰泽球虫、赫氏艾美耳球虫和有害艾美耳球虫为优势种，其感染率分别为89．5％、78．9％和68．4％。     

雄性育性基因RNA干扰载体的构建与鉴定

1材料与方法1．1材料酶和试剂：各种限制性内切酶购自Roche公司，T4DNA连接酶购自上海生工公司，Taq聚合酶、dNTP、凝胶回收试剂盒均购自Promega公司，引物由上海生工公司合成，其他试剂均为进口或国产分析纯。植物材料和质粒：棉花洞A雄性可育株由西南大学棉花教研室提供，表达载体P^BП21质粒和大肠杆菌菌株XL1-Blue由西南大学生物技术中心实验室保存。pUCm-T克隆载体购自上海生工公司。     

山西省某奶牛场球虫病流行病学调查与虫种鉴定

为了解山西省忻州某奶牛场艾美耳球虫感染率和虫种分布，为后期球虫病治疗及牛群饲养管理提供临床依据，采用饱和盐水漂浮法对采自奶牛场200头产后母牛和600只犊牛的800份新鲜粪便样品进行球虫卵囊分离收集，采用麦氏虫卵计数法和PCR方法对球虫卵囊进行检查和种类鉴定。结果表明，奶牛场艾美耳球虫的总感染率为32.75%,0～3月龄和5～12月龄犊牛的球虫感染率分别为36.33%和43.00%，产后母牛的球虫感染率为12.00%,5～12月龄犊牛的球虫感染情况较0～3月龄犊牛严重，产后母牛感染情况轻于犊牛；通过序列比对分析共鉴定出4种牛艾美耳球虫，分别是邱氏艾美耳球虫（77.48%）、牛艾美耳球虫（41.22%）、奥博艾美耳球虫（31.68%）和椭圆艾美耳球虫（14.50%），以邱氏艾美耳球虫为优势虫种；所调查的奶牛中有多重感染的情况，鉴定的262份阳性粪便样本中有117份为感染2种以上球虫，混合感染率为44.66%，发现最多可混合感染4种球虫。5～12月龄犊牛的球虫混合感染情况较0～3月龄犊牛严重，而产后母牛多以1种球虫感染。     

利用Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法

1材料与方法1．1材料新生牛血清购自GIBICO生物公司；青霉素、链霉素购自哈尔滨制药六厂；降脂烷购自sigma公司；过碘酸钠购自上海生物试剂公司；脱脂乳购自飞鹤乳业公司；Babl／c小鼠购自兰州生物制品研究所。     

鹅副粘病毒GX1株的HN和F蛋白基因的克隆和序列分析

1材料与方法 1．1病毒来源鹅副粘病毒分离株GX1株由广西壮族自治区动物疫病预防控制中心实验室分离保存。 1．2试剂及仪器各种PCR反应试剂、PMD-18T载体、胶回收试剂盒、限制性内切酶等均购自宝生物工程（大连）公司。仪器：恒温孵化箱、PCR反应仪、超速离心机、移液器等。     

E.tenella吉林株单卵囊的分离及PCR鉴定

[目的]为了获得E．tenella纯株，进行相关的分子生物学研究。[方法]对已经建立的球虫单卵囊分离技术进行改进，用分离的单卵囊胶囊接种雏鸡。同时应用PCR方法对收集的单卵囊分离株进行球虫种类鉴定。[结果]20只试验鸡中有15只粪便中分离到卵囊，感染成功率为75％。PCR扩增结果表明该单卵囊分离株为Etenella。[结论]采用单卵囊胶囊进行接种，操作简便，既节省了接种时间，又降低了接种难度，且大大提高了接种成功率，为球虫的分子生物学研究提供了材料。     

E.tenella吉林株单卵囊的分离及PCR鉴定(英文)

[Objective] In order to get a purified strain to carry out the relative molecular biology research about E.tenella. [Method] The single-oocyst isolation method was improved and the isolated single-oocyst which was put into capsule was fed to chickens. At the same time, the collected oocysts were identified by PCR method. [Result] The oocysts were isolated from feces of 15 chickens among that of 20 chickens and the infection rate was 75%. The PCR results demonstrated that the single-oocyst strain was E.tenella. [Conclusion] The inoculation of single oocyst capsule was simple, besides, this method did not only save time but also declined inoculation difficulty, increased infection rate and provided good materials for biological research of coccidian.     

肠艾美尔球虫单卵囊分离及ITS-1序列测定

[目的]建立一种有效的鉴定球虫种类分子生物学方法。[方法]采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫。根据GenBank中发表的艾美尔属球虫18s和5.8srDNA序列,设计特异性引物,扩增内转录间隔区1（ITS-1）,PCR产物直接测序。[结果]成功地分离出肠艾美尔球虫,其卵囊扩增出434bp清晰条带,且最低能检测出27孢子化卵囊。[结论]该研究结果为球虫虫种及虫株的准确鉴定奠定了基础。     

安徽部分地区鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊的分离与鉴定

为获得纯种柔嫩艾美耳球虫虫株,从安徽省巢湖市、霍邱县、定远县3个地区患球虫病的鸡场采集3株混合球虫,培养至孢子化,分离单卵囊接种1～7日龄的雏鸡,感染后7～12 d,收集卵囊,然后通过生物学特性和PCR方法进行虫种鉴定。结果显示,3个地区的单卵囊感染成功率分别为50%、57%和29%,各虫株经生物学特性和PCR鉴定均为柔嫩艾美耳球虫。研究表明:1.0%琼脂单卵囊分离法简便且成功率较高,利用特异性引物PCR鉴定虫株,为纯种地方株的研究奠定了基础。     

转基因柔嫩艾美耳球虫对生态环境的影响

【目的】从表达M2e-EYFP融合蛋白转基因柔嫩艾美耳球虫的稳定性,及其在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力方面,分析转基因球虫对生态环境的潜在风险。【方法】稳定性试验包括:转基因球虫感染非靶动物,观察临床症状和卵囊产出情况;转基因球虫继代繁殖,检测荧光率;转基因球虫与毒害艾美耳球虫混合感染,PCR检测卵囊中的外源基因。传播能力试验主要是分析感染鸡和不感染同居鸡的卵囊产量和荧光率。竞争性试验则是用不同混合比例的2种球虫感染鸡,检测卵囊产量和荧光率;存活能力试验是用不同处理方式的卵囊感染鸡,检测卵囊是否产出以分析卵囊存活能力。【结果】转基因球虫不感染小鼠和家鸽,与野生型柔嫩艾美耳球虫宿主特异性相同;连续繁殖传17代后外源基因稳定表达。与毒害艾美耳球虫混合寄生时在异种球虫体内未检测出外源基因。传播能力试验中,46d攻毒时转基因球虫感染与不感染同居组的卵囊产量差异不显著,但与不感染对照组相比均显著减少,且1∶1感染和不感染同居组卵囊荧光率检测结果维持在51.6%67.9%。竟争性试验中,攻毒时各比例感染组卵囊产量均极显著少于不感染攻毒对照组,荧光率检测结果各比例组变化幅动不大,且1∶1组哨兵鸡卵囊荧光率检测结果为41.2%61%。存活能力试验,转基因球虫与野生型球虫在夏季室温条件下均不能存活90d,且与其他不同方式处理的卵囊外界存活时间接近。【结论】说明转基因球虫具有良好的稳定性,在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力未呈现显著优于野生球虫的趋势。     

鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术的构建及致病性研究

构建了一种新的鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术 ,并对杨陵柔嫩艾美耳球虫地理株进行了分离 ,对继代增殖的纯种卵囊进行了致病性试验。结果表明 ,该单卵囊分离技术简单易行 ,单卵囊感染成功率可达4 0 % ;该虫株对雏鸡有很强的致病性 ,经口接种 1× 10 5个孢子化卵囊 ,致死率高达 80 %。     

The Effects of Exogenous Nitric Oxide on Eimeria tenella Oocysts

The effects of exogenous NO on Eimeria tenella oocysts were studied. The E. tenella oocystsfreshly isolated from feces of experimental chickens infected with E. tenella and sporulated E. tenella oocystswere treated in vitro by the well-known NO-donors, SNP, SPER/NO and GSNO. The results showed thatamong the 3 NO donors, only GSNO had significant effects on the percentage of sporulated oocysts, the inhibi-ting rate of purified oocysts was from 93 to 97%, and reached 100% on the oocysts in the feces of chickenswith E. tenella infection. GSNO also significantly decreased the virulence of E. tenella oocysts, and the oo-cysts treated by 2 -8 mmol L-1 GSNO almost lost their pathogenicity to chickens.     

柔嫩艾美尔球虫库尔勒株免疫原性初步研究

本实验采用单卵囊分离技术,得到1株柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella),对该株E.tenella的免疫原性做了初步研究,分别用100个卵囊/只,1,000个卵囊/只,10,000个卵囊/只的剂量免疫,以100,000个卵囊/只的剂量攻毒,结果显示,1000个卵囊/只的剂量免疫效果最好。     

肠艾美尔球虫单卵囊分离及ITS-1序列测定

[目的]建立一种有效的鉴定球虫种类分子生物学方法。[方法]采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫,提取卵囊基因组DNA。根据GenBank中发表的艾美尔属球虫18SrDNA和5.8SrDNA序列,设计特异性引物,扩增内转录间隔区1（ITS-1）,PCR产物直接测序。[结果]成功分离出肠艾美尔球虫,PCR扩增出434bp清晰条带,且最低能检测出27个孢子化卵囊。[结论]该研究结果为球虫虫种及虫株的准确鉴定奠定了基础。     

柔嫩艾美耳球虫子孢子抗原的制备

[目的]为进一步研究柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）的单克隆抗体奠定基础。[方法]给肉鸡雏接种E．tenella纯种孢子化卵囊：第5～10天收集鸡的粪便并标记、粗提，经卵囊孢子化、纯化孢予化的卵囊、计数卵囊后，最终制备出子孢子抗原。[结果]该方法制备E．tenella子孢子抗原较其他方法简单易行，不需太多专门仪器和培养液，一般实验室均可进行，效果良好。但所用时间较长。[结论]该试验成功分离提纯出了鸡的E．tenella卵囊，并获得了蛋白浓度较高的抗原，为单克隆抗体的制备提供了有力保障。