孕酮受体基因多态性及其与小尾寒羊产羔数的关系

设计15对引物,采用PCR-SSCP技术检测孕酮受体(progesterone receptor,PGR)基因全部9个外显子在小尾寒羊、湖羊、特克塞尔和多赛特中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊产羔数的影响.只有引物P9扩增片段具有多态性.对于P9扩增片段,在小尾寒羊、湖羊和多赛特中均检测到AA、AG和GG型,...     

藏绵羊孕酮受体基因第4外显子多态性分析

以391只藏绵羊为研究对象,采用PCR-SSCP技术分析孕酮受体(PGR)基因第4外显子在藏绵羊中单核苷酸多态性(SNPs),探讨PGR的生理功能及其对藏绵羊繁殖力的影响。结果表明:PGR基因扩增片段在藏绵羊品种中存在PCR-SSCP多态性,序列比对分析发现2个SNPs位点,全为颠换。在该群体中发现3种基因型,分别为AA、BB和AB,其中AA为优势基因型,A为优势等位基因。χ2独立性检验表明,PGR基因扩增片段上各基因型呈极显著差异。     

猪孕酮受体基因的遗传变异及其与繁殖性状的相关性

以猪孕酮受体(PGR)基因序列为模板设计引物,采用PCRRFLP技术检测PGR基因外显子1在长白猪和大白猪中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对猪总产仔数、产活仔数和出生窝重的影响。对于扩增的外显子1片段,在大白猪中检测到GG、AG和AA型,在长白猪中只检测到GG和AG型。测序结果表明,GG型与AA型相比,在326 bp处有一单碱基突变(G→A),该基因所编码的氨基酸则由甘氨酸变为丝氨酸。长白猪GG型总产仔数、产活仔数和出生窝重与AG型总产仔数、产活仔数和出生窝重的差异均没有统计学意义。大白猪AG型总产仔数、产活仔数和出生窝重与GG型总产仔数、产活仔数和出生窝重的差异有统计学意义,大白猪GG型总产仔数、产活仔数和出生窝重与AA型总产仔数、产活仔数和出生窝重的差异没有统计学意义,大白猪AG型总产仔数、产活仔数与AA型总产仔数、产活仔数的差异有统计学意义,大白猪AG型出生窝重与AA型出生窝重的差异没有统计学意义。     

甘加型藏羊发情周期血浆孕酮动态变化及HPO轴PGR的表达

为研究甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期血浆孕激素(P₄)的分泌及孕激素受体(Progesterone receptor, PGR)在HPO轴中的表达，分析其在藏羊繁殖活动中的调控作用，本研究应用酶联免疫吸附试验、蛋白免疫印迹法、实时荧光定量和免疫组织化学染色法检测甘加型藏羊发情周期血浆中孕酮含量的动态变化、HPO组织中PGR mRNA及其蛋白的表达和组织分布。结果显示：1)甘加型藏羊发情周期血浆孕酮呈波动式和脉冲式分泌，在间情期达到最高峰值，发情期最低，二者差异显著(P<0.05)。2)PGR mRNA及其蛋白在HPO组织中均有表达；下丘脑中，PGR mRNA及其蛋白相对表达量在间情期最高，各时期之间差异显著(P<0.05);垂体中，PGR mRNA表达量在发情后期达到最高，显著高于发情前期和间情期(P<0.05),发情前期蛋白相对表达量高于其他时期；卵巢中，PGR mRNA在发情期最高，与间情期差异显著(P<0.05),蛋白表达水平在发情前期最高。3)PGR免疫阳性反应产物表达在下丘脑神经胶质细胞和大神经元胞体中，腺垂体嗜酸性细...     

姜曲海母猪子宫雌二醇和孕酮受体含量的变化

以长白母猪为对照,分析了1月龄、发情期和间情期姜曲海母猪子宫细胞质雌二醇受体(CER)和细胞核雌二醇受体(NER)以及细胞质孕酮受体(CPR)和细胞核孕酮受体(NPR)。3个时期该猪子宫CER分别为351、410和367fmol/mgDNA,其Kd值分别为7.1、4.8和4.0nmol;子宫NER分别为245,1390和620fmol/mgDNA,Kd值为3.7、6.6和4.4nmol;CPR分别为251、364和147fmol/mgDNA;NPR分别为232、337和184fmol/mgDNA。在发情期和间情期,姜曲海母猪子宫NER以及与细胞质受体的比值均比长白母猪高,说明此时姜曲海母猪子宫对雌二醇具有较高的敏感性。性成熟后,试验猪的雌二醇受体和孕酮受体均受它们配体激素的调节。     

雌二醇和孕酮对小鼠子宫半胱亚磺酸脱羧酶基因表达和牛磺酸含量的调控

实验主要研究了17β-雌二醇(E2)和孕酮(P4)对小鼠子宫组织中半胱亚磺酸脱羧酶基因(CSD)表达和牛磺酸含量的调控。给去卵巢小鼠分别皮下注射植物油(对照组)、17β-雌二醇(E2)、孕酮(P4)、E2和P4、E2和氟维司群(ICI 182780)、P4和米非司酮(RU486),24h后观察各组小鼠子宫中CSD的表达和牛磺酸的含量。Real-time PCR和Western blot定量分析结果显示,每只小鼠注射1μg E2能够显著抑制CSD的mRNA和蛋白的表达,6mg P4能够显著促进CSD mRNA和蛋白的表达,其受体抑制剂RU486和ICI182780都能逆转它们的作用。高效液相色谱(HPLC)测定结果显示,注射1μg E2和6mg P4分别下调和上调子宫组织中牛磺酸的含量。上述结果提示E2和P4可能通过受体途径参与调节子宫CSD的表达,从而调节子宫中牛磺酸含量。     

大鼠品系PGR-iCre构建

采用CRISPR/Cas9基因编辑技术首次制备用于子宫基因敲除的PGR-iCre大鼠。PGR-iCre大鼠与含有Flox报告基因Tdtomato大鼠(Tdtomatof/f)杂交得到PGRCre+/--Tdtomatof/+大鼠。利用real-time PCR、免疫组化、荧光检测等技术检测Tdtomato基因在PGRCre+/--Tdtomatof/+大鼠不同器官表达,间接检测PGR驱动的Cre重组酶组织特异性表达。结果表明,PGR驱动Cre重组酶在大鼠子宫、卵巢、输卵管、乳腺、下丘脑、垂体、脾脏、肾脏、肺等器官不同程度表达;未检测到Cre重组酶在心脏、肝脏、肌肉中表达。综上,PGR-iCre大鼠可作为子宫基因敲除工具鼠研究大鼠子宫表达基因的相关功能。     

孕酮酶免疫测定试剂盒的研制及其在家畜繁殖上的应用

本文详细介绍了我们研制的孕酮酶免疫测定试剂盒所含内容、使用方法、操作程序、质量控制及其在家畜繁殖上的应用情况。试剂盒不仅操作简便,快速(从加样到出结果只需2小时左右),灵敏度高(1.6pg/孔),特异性强,稳定性好,而且无毒,对仪器设备的要求不高,适于在科研、临床诊断和畜牧生产中推广应用。已用该试剂盒检测了黄牛、水牛、奶牛、绵羊、警犬和家兔等动物在生理和病理情况下血液或全乳中的孕酮含量,结果可靠。     

不同发育期大鼠乳腺组织中孕酮受体的表达研究

为了探讨大鼠乳腺中孕酮受体(PR)的变化规律,试验采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的孕酮受体表达进行了半定量研究。结果表明,妊娠18 d的PR表达水平明显低于处女期和妊娠6,12 d (P<0．05),整个妊娠过程中,以妊娠12 d最高;在泌乳6 d时检测不到PR,泌乳12,18 d可检测到PR表达,泌乳 18 d的PR水平低于泌乳12 d,但差异不显著(P>0．05)。表明PR可能参与了乳腺细胞的发育和泌乳。     

ESR基因型与青年母猪外周血液激素浓度的关系

采用放免法测定了不同ESR基因型青年母猪 (各 3头 )外周血液激素浓度的变化。结果表明 :4种激素浓度随着生理状况不同出现明显波动 ;3种ESR基因型雌二醇变化曲线一致 ,在发情同一时期 ,雌二醇浓度差异不显著 ;AA型和AB型孕酮变化曲线一致 ,在发情后第 7天 ,AA和AB基因型远高于BB型 (P <0 .0 5 ) ;在发情初期BB基因型FSH浓度显著比AA型高 (P =0 .0 5 ) ,但是在发情后第 14天AA型与AB基因型FSH浓度比BB型高 (P =0 .0 7)。没有检测到 3种基因型青年母猪LH浓度存在显著差异。     

采食水平对初产母猪妊娠早期孕酮分泌、胚胎存活及相关基因表达的影响

 【目的】研究采食水平对初产母猪妊娠早期孕酮分泌、胚胎存活和胚胎成纤维细胞生长因子受体-2 （FGFR2）、孕酮受体（PGR）及胚胎和子宫内膜视黄醇结合蛋白4（RBP4）、叶酸结合蛋白（FBP）、子宫转铁蛋白（UF）基因表达的影响。【方法】母猪配种后随机分到3个组，按2.0倍、1.2倍和0.6倍维持需要供给饲粮（分别为采食高、中、低水平），妊娠12、25和35 d屠宰母猪，收集血清、子宫液和胚胎、子宫组织，运用ELISA测定血清和子宫液中孕酮浓度，用RT- PCR测定目的基因在胚胎和子宫内膜中的表达。【结果】妊娠12、25和35 d，血清孕酮浓度在采食高水平组极显著低于采食中、低水平组（P＜0.01）。子宫分泌液孕酮浓度在妊娠12 d，采食低水平组极显著高于采食高水平组（P＜0.01），采食中水平组显著高于采食高水平组（P＜0.05），妊娠25 d各组差异不显著（P＞0.05）。妊娠12 d采食中水平组的活胚数显著高于采食高水平组（P＜0.05），采食高、低水平间差异不显著（P＞0.05）。妊娠各阶段，采食中水平组的胚胎FGFR2、RBP4以及子宫内膜RBP4、FBP、UF mRNA 的相对表达量显著升高（P＜0.05）。【结论】妊娠35 d，以中水平采食量饲喂初产母猪，具有较高的活胚数，采食高水平或者严重限饲，引起孕酮分泌过高或过低，降低胚胎FGFR2、RBP4及子宫内膜RBP4、FBP、UF mRNA的表达，降低活胚数。     

孕酮受体基因多态性及其与济宁青山羊产羔数关系

 【目的】寻找与产羔数相关的遗传标记，为山羊高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据。【方法】设计15对引物，采用PCR-SSCP技术检测孕酮受体（progesterone receptor，PGR）基因全部9个外显子在济宁青山羊、波尔山羊、辽宁绒山羊和安哥拉山羊中的单核苷酸多态性，同时研究该基因对山羊繁殖力的影响。【结果】只有引物P1、P8与P9扩增片段具有多态性。对于P1扩增片段，济宁青山羊中检测到AA、AB和BB型，其余山羊中均检测到AA和AB型;测序表明BB与AA型相比有一处突变（31G→A），并导致丙氨酸变为苏氨酸;BB基因型济宁青山羊产羔数最小二乘均值比AB基因型多0.52只（P＜0.05），比AA基因型多0.98只（P＜0.001），AB基因型济宁青山羊产羔数最小二乘均值比AA基因型多0.46只（P＜0.05）。对于P8扩增片段，济宁青山羊中只检测到CC型，波尔山羊中检测到CC和CD型，其余山羊中检测到CC、CD和DD型;测序表明DD型和CC型相比有一处突变（2810C→G），未导致氨基酸改变。对于P9扩增片段，济宁青山羊和波尔山羊中检测到FF和FG型，其余山羊中检测到FF、FG和GG型;测序表明GG型和FF型相比有一处碱基突变（60128T→A），未导致氨基酸改变;FF基因型济宁青山羊产羔数最小二乘均值比FG基因型多0.32只（P＞0.05）。【结论】本试验结果初步表明，PGR基因可能是控制济宁青山羊多羔性的一个主效基因或是与之存在紧密遗传连锁的一个标记。     

Molecular cloning of the chicken progesterone receptor

To define the functional domains of the progesterone receptor required for gene regulation, complementary DNA (cDNA) clones encoding the chicken progesterone receptor have been isolated from a chicken oviduct lambda gt11 cDNA expression library. Positive clones expressed antigenic determinants that cross-reacted with six monospecific antibodies derived from two independent sources. A 36-amino acid peptide sequence obtained by microsequencing of purified progesterone receptor was encoded by nucleotide sequences in the longest cDNA clone. Analysis of the amino acid sequence of the progesterone receptor deduced from the cDNA clones revealed a cysteine-rich region that was homologous to a region found in the estrogen and glucocorticoid receptors and to the avian erythroblastosis virus gag-erb-A fusion protein. Northern blot analysis with chicken progesterone receptor cDNA's indicated the existence of at least three messenger RNA species. These messages were found only in oviduct and could be induced by estrogens.     

葡萄糖对后备母猪繁殖相关基因表达的影响

为探讨用葡萄糖代替铬制剂调控母猪繁殖性能的可行性,将6头70~80 kg大约克后备母猪随机分为对照组和试验组,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加200 g/d剂量的葡萄糖,试验时间为21 d,采用ELISA方法测定血清中胰岛素、孕激素和雌激素分泌量,实时定量PCR检测繁殖相关基因表达量。结果表明,添加葡萄糖后,后备母猪血清中胰岛素、孕激素和雌激素分泌量显著增加,猪子宫中雌激素受体(ESR)、骨桥蛋白(OPN)、KISS1受体(GPR54)、孕激素受体(PGR)和视黄醇结合蛋白4(RBP4)等繁殖相关基因表达量均显著上调。以上结果提示,可以使用葡萄糖代替铬制剂,通过刺激胰岛素的分泌达到提高后备母猪繁殖性能的目的。     

3种猪孕酮受体基因(pgr)多态性分析

采用混合基因组DNA池PCR扩增和测序技术,对小梅山猪、枫泾猪、大白猪pgr基因的外显子区域进行扫描,共发现1个单核甘酸多态性位点(SNP)。外显子1序列中1 319 bp处发生C→T的碱基突变,即C1319T,未引起氨基酸的变化,属于同义突变;针对突变位点,建立错配PCR–限制性长度多态性(RFLP)方法进行检测,发现3种猪的pgr基因可以分为AA、BB、AB 3个基因型,小梅山和枫泾猪有AA、AB 2种基因型,大白猪中有BB、AB 2种基因型。     

不同孕激素发情栓剂对母羊发情调控效果的研究

通过三种孕激素发情栓剂在繁殖季节和非繁殖季节的发情调控效果比较,同时分析三种栓剂在使用中各自存在的优缺点,证明三种栓剂在有效调控母羊发情、妊娠,影响母羊发情率和受胎率方面差异不显著(P＞0.05),而由黑龙江省农科院畜牧中心自制的孕激素发情栓能够在繁殖季节和非繁殖季节有效调控母羊发情、妊娠,并以其制作成本低、易于操作的优点,便于在绵羊生产中大范围推广应用.     

绵羊Myostatin基因5′调控区的生物信息学分析及孕激素对调控区活性的影响

【目的】克隆并分析绵羊Myostatin基因5′调控区,并在细胞水平研究孕激素对该调控区活性的影响。【方法】利用PCR方法扩增绵羊Myostatin基因5′调控区,采用MatInspector等软件分析并比较其和牛、猪调控区的调控元件和转录因子。以EGFP为报告基因,构建表达载体,转染C2C12细胞,同时添加不同剂量的孕激素（0、10、100和1 000 nmol•L-1）,然后通过RT-PCR方法检测报告基因EGFP和内源性Myostatin的mRNA水平。【结果】获得绵羊约3.2 kb Myostatin基因5′调控区（MSTN5′regu）,预测了两个对双肌性状可能存在贡献的位点。在绵羊、牛和猪的相应调控区发现了许多可能对该基因转录调控起重要作用的调控元件和相应转录因子,包括E-box、MEF2、MTATA、MTBF、HOMF、PRE、ARE和GRE等。各种元件在不同动物间基本都有,但具体的序列、位置以及数量有所差异。成功构建了绵羊pMSTN5′regu-EGFP表达载体,且转染后100 nmol•L-1孕激素明显抑制了内源性Myostatin mRNA和报告基因EGFP mRNA的表达。【结论】绵羊Myostatin基因的转录受多种转录因子和相应调控元件的调控,适量孕激素可通过下调Myostatin基因5′调控区的活性而抑制该基因的转录。     

奶牛产犊胎次与乳中孕酮、雌二醇含量的关系

用放射免疫法测定了50头中国荷斯坦牛产后23d内及发情前后12d内乳中的孕酮(P)和雌二醇(E2)的含量。结果表明:产后23d内不同胎次的奶牛孕酮,雌二醇含量差异不显著,而产后不同天数之间的孕酮、雌二醇含量差异极显著(P<0.01)。不同胎次间发情前后12d内的孕酮、雌二醇含量差异不显著(P>0.05),而发情不同天数之间的孕酮、雌二醇含量差异极显著(P<0.01)。