水貂阿留申病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备

本研究利用PCR方法从水貂阿留申病毒相关病料中扩增出VP2蛋白部分基因,并进行原核表达,成功获得VP2重组蛋白;利用纯化的VP2重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,成功获得3株杂交瘤细胞:1F4F7D9、3E9G3D4和4B8B3F8;分别接种小鼠,间接ELISA检测结果表明,3组实验小鼠腹水的单克隆抗体效价均在106以上。     

水貂阿留申病毒（ADV）单克隆抗体的研制

以ADV-G为抗原,利用细胞融合技术,建立了5株特异的抗ADV单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞,其中Y_9、Y_(19)和Y_(13)酶印迹(Western Blot)阳性,均与ADV-G的85K和75K蛋白反应。B_4和Y_(21)单克隆抗体为间接ELISA阳性。     

水貂阿留申病毒部分VP2基因的克隆表达和重组蛋白的免疫学分析

根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列设计合成1对特异引物,利用PCR方法扩增ADV国内分离株部分VP2基因片段,将其克隆到原核表达载体pET-28a中.经酶切、PCR扩增和测序分析证实其已正确插入到表达载体中,构建了原核表达载体pET-28a-VP2.阳性重组质粒转化宿主菌BL21,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和免疫印迹分析.结果表明蛋白获得了表达,表达产物的分子质量为21 kD,与理论推测的分子质量一致;在终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导下,5 h时表达量达到高峰;Western blot分析表明表达蛋白能被兔抗水貂抗体所识别,具有相应的抗原性.     

水貂阿留申病

水貂阿留申疾病是目前全世界水貂饲养业中危害最严重的三大疫病之一。虽然疾病对非阿留申系列的水貂一般不致死亡,但对皮张却有严重损害,由此造成的损失估计每年可达几百万美元。本文对水貂阿留申疾病的发现,病原体特性,传染方式,疾病的症状和诊断,以及防治方法作了比较全面的介绍。最后,作者根据自己饲养水貂的经验,对我国应该如何防治水貂阿留申疾病提出了一些看法。     

水貂阿留申病诊断方法的研究进展

综述了水貂阿留申病诊断方法的研究进展,为有效检测水貂阿留申病提供可靠的理论依据,将有利于水貂养殖场对水貂阿留申病的防制工作。     

水貂阿留申病诊断技术的研究进展

水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的自身免疫性疾病,目前尚无有效疫苗,每年结合打皮期筛查淘汰病貂是该病防控的主要手段.目前,水貂阿留申病的主要诊断方法是依据临床症状和血清的对流免疫电泳检测.对流免疫电泳需要在实验室内进行,使用范围局限.综述了国外该病诊断的最新研究进展,以期为该病诊断技术的开发提供思路.     

水貂阿留申病毒VP2基因主要抗原表位区的原核表达

根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列分别设计合成两对引物,用PCR方法扩增ADV国内分离株VP2基因中主要抗原表位区的两个片段,分别将其克隆到原核表达载体pMAL-c2的多克隆位点中。经酶切、PCR扩增和测序分析证实其已正确插入到表达载体中,且阅读框是正确的,构建原核表达载体pMAL-VPa和pMAL-VPb。阳性重组质粒转化宿主菌TB1,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE检测和免疫印迹分析。结果表明两段蛋白均获得了表达,表达产物的分子质量分别约为63、65kD,与理论推测的分子质量一致;并在终浓度为1mmol/L的IPTG诱导下,4h时其表达量达到高峰;Western blot分析表明表达蛋白能被兔抗MBP抗体所识别,具有一定的抗原性。     

一株水貂阿留申病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析

为了对水貂阿留申病毒的诊断防治提供依据,验证水貂阿留申病毒在我国的遗传演化情况,研究了阿留申病毒的诊断抗原。将疑似阿留申病毒感染致死的送检水貂进行PCR初步诊断,并应用猫肾传代细胞系(CRFK)进行了分离培养。提取细胞培养物的DNA,经PCR检测呈阳性后,对分离前后的阿留申病毒VP2基因全序列进行克隆测序,其结果与GenBank上传的其它ADV亚型VP2序列进行了比较后证明:获得了一株可以在CRFK细胞中稳定生长的水貂阿留申病毒毒株(命名为ADV-ZYL1)。氨基酸分析发现,ADV-ZYL1毒株与美国强毒力毒株ADV-Utah-1的氨基酸同源性最高,为96.1%,与ADV-Far East的氨基酸同源性为92.7%,表明ADV-ZYL1的VP2蛋白氨基酸存在很高的突变率。     

阿留申病毒大连株非结构蛋白基因的克隆与序列分析

根据Genbank上发表的水貂阿留申病毒基因序列数据,设计了3对引物,采用PCR的方法分别对ADV-DL1、ADV-DL2株非结构蛋白基因进行扩增,将各片断克隆至pMD18-T载体,经PCR鉴定后进行了序列测定和分析。结果显示,ADV-DL1、ADV-DL2与GenBank上公布的ADV毒株相比,核苷酸序列同源率NS1为85.9%~90.0%,NS2为85.1%~92.7%,NS3为83.0%~95.1%。ADV-DL1与ADV-DL2同源率NS1为93.7%,NS2为95.6%,NS3为98.5%。氨基酸同源率NS1为82.8%~85.8%,NS2为80.7%~92.1%,NS3为72.9%~95.4%。ADV-DL1与ADV-DL2同源率NS1为90.3%,NS2为92.1%,NS3为95.4%。     

威海某地区水貂阿留申病的诊断与调查

选取威海某地区的两个水貂场作为抽样样本,取得疑似阿留申病毒致死的病死貂和2 000多个水貂的血液样品,检测该地区水貂阿留申病的阳性率。对病死貂的视诊和病理剖检,对病貂做出临床诊断。将血液样本进行碘凝集试验和对流免疫电泳试验,完成该地区水貂阿留申病的检测调查。结果显示,威海某地区阿留申病的阳性检出率为70%以上,表明威海地区水貂阿留申病的流行情况非常严重。     

水貂阿留申病分子生物学及防控技术研究进展

水貂阿留申病是由阿留申病毒引起的慢性、持续性传染病,是危害水貂养殖业的重要疫病之一,在世界各养貂国家均有分布。近几年来,国内外、学者在阿留申病毒的分子生物学、诊断等方面做了大量研究工作,本文将着重介绍国内、外学者在这两方面对阿留申病的研究情况,并对该病的预防提出几点建议,以供进一步研究参考。     

ADV感染阳性母貂产仔情况及幼仔分窝时ADV的感染率

用聚合酶链式反应（PCR）方法检测、筛选出19只ADV感染阳性的母貂作为试验组,跟踪观察母貂配种后的产仔情况,并与ADV感染阴性的11只母貂的产仔情况进行了对比分析。使用PCR方法对试验组母貂所产幼仔分窝时感染ADV的情况进行了检测。结论：试验组母兽产仔的数量少,死胎数及发育不良的幼仔数要明显高于对照组;试验组母兽所产幼仔分窝时感染ADV的比例为100％。     

水貂阿留申病碘凝集反应与对流免疫电泳对比试验

貂阿留申病是危害养貂业健康发展最严重的传染病之一.到目前为止,尚无有效防治办法,主要依靠定期的诊断、检疫,淘汰病貂,逐步净化貂群.随机采取辽宁某貂场一岁预留母貂血液样本,采用对流免疫电泳试验（CEP）和碘凝集试验（IAT）对所采集的46份血清样本进行检测.结果表明,水貂阿留申病IAT阳性率为67.39％,CEP阳性率为76.09％,CEP阳性率明显高于IAT检测结果.     

新城疫病毒F48E9株HN蛋白抗原结构域区段的原核表达

利用生物软件对新城疫病毒F48E9株的血凝素神经氨酸酶(HN)蛋白进行抗原特性分析,选定172～570位氨基酸区域作为多肽表位候选区域。以pUC18-F-HN为模板,设计引物通过PCR扩增,获得HN抗原结构域基因片段,SaⅠl、NoⅠt双酶切定向克隆到原核表达载体pET28a,获得重组质粒分别命名为pET28a-HNa。重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21,筛选出阳性克隆,诱导表达并取产物进行分析。结果表明,HN抗原结构域基因片段获得了融合表达,Western-blotting分析证实表达产物HN与NDV阳性血清具有免疫反应性。为进一步研究HN蛋白抗原结构域的免疫原性以及HN蛋白与F蛋白相互作用奠定了基础。     

水貂源犬瘟热病毒的分离鉴定

利用Vero传代细胞从病死水貂肝脏中分离获得1株病毒。该毒株可使培养细胞出现明显的细胞病变(CPE)。以提取病毒感染细胞总RNA为模板进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),结果扩增出的基因片段大小与预期值相符。根据病毒的致细胞病变特征和RT-PCR鉴定结果,确证该毒株为犬瘟热病毒。