烟草绿原酸生物合成途径关键酶基因的研究进展

绿原酸是重要的植物苯丙素类次生代谢产物之一,与植物的食品风味和药用生物活性等密切相关,其生物合成与调控研究一直是科研人员所关注的焦点。本文综述了烟草绿原酸生物合成途径中关键节点苯丙氨酸解氨酶基因、肉桂酸-4-羟化酶基因、对-香豆酸辅酶A连接酶基因、羟基肉桂酰辅酶A:奎尼酸羟基肉桂酰转移酶基因、羟基肉桂酰辅酶A莽草酸/奎尼酸羟基肉桂酰转移酶基因、对-香豆酸3′-羟化酶基因的研究进展,并进一步展望了烟草绿原酸生物合成代谢调控的研究方向,旨在为烟草绿原酸生物合成途径的深入研究和定向调控提供参考。     

番茄叶化学成分研究

利用各种色谱技术,结合波谱法鉴定番茄(Lycopersicon esculentum Mill)叶的化学成分结构。结果从番茄叶乙醇提取物中分离得到15个化合物,分别为β-谷甾醇、香草醛、对羟基苯甲酸、N-反式-对-香豆酰基酪胺、菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷、尿嘧啶、番茄碱苷、番茄碱-3-O-β-D-吡喃葡萄糖、蜀羊泉碱-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷、白英素B、蜀羊泉碱苷、槲皮素、α-菠甾醇、正丁基-O-β-D-吡喃果糖苷、芦丁,所有化合物均首次从该植物中分离得到。     

5个红色酿酒葡萄品种花色苷组成差异分析

以5个红色酿酒葡萄品种(‘美乐’‘赤霞珠’‘马尔贝克’‘小味尔多’‘马瑟兰’)为材料,利用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)检测各品种成熟期果皮的花色苷,并利用主成分分析方法对5个红色酿酒葡萄品种的花色苷组成进行差异分析。结果表明,‘美乐’的甲基花青素类花色苷的所有比例较高,‘赤霞珠’中的花翠素类和未酰化类花色苷的所有比例最高,‘马尔贝克’的特征花色苷是花翠素-3-香豆酰葡萄糖苷和甲基花翠素-3-香豆酰葡萄糖苷,‘小味尔多’含有较高的甲基花翠素类和花翠素-3-乙酰葡萄糖苷。另外,‘马瑟兰’含有较高的香豆酰类花色苷,尤其是二甲花翠素-3-反式香豆酰葡萄糖苷,且未检测到花青素类花色苷。     

鸡冠花种子的化学成分研究

采用溶剂法、硅胶柱层析、Sephadex-LH20凝胶柱层析及重结晶等方法对鸡冠花(Celosia cristata L.)种子进行成分分离及纯化,并利用IR、1H-NMR、13C-NMR、MS等波谱技术鉴定提取物的化学结构。结果表明:从鸡冠花种子乙醇提取物中共分得6种化合物,经鉴定分别为对羟基苯乙醇(4-hydroxyphenethyl alcohol,1)、山奈酚(kaempferol,2)、槲皮素(quercetin,3)、β-谷甾醇(β-sitosterol,4)、2-羟基十八烷酸(2-hydroxyoctadecanoic acid,5)、豆甾醇(stigmasterol,6)。化合物1,4～6均为首次从该植物中分离得到。     

一株苦槛蓝内生真菌Trichoderma sp.09抗植物病菌产物的研究

从一株苦槛蓝内生真菌Trichoderma sp.09中寻找有抗植物病原菌活性的化合物,利用硅胶柱层析分离到6个化合物,用波谱技术分别鉴定为N-2’-羟基-3'E-十八碳烯酰基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-9-甲基-4E,8E-sphingadiene (1),(4E,8E)-1-O-(β-D-吡喃葡萄糖)基-2-(2’-羟基-(E)-3’-十七碳烯酰胺)-3-羟基-9-甲基-4,8-十九碳二烯(2),麦角甾-7,24(28)-二烯-3β-醇(3),胆甾-4-烯-3-醇(4),正癸酸甲酯(5),正十六碳酸甲酯(6).化合物1、2为首次从Trichoderma sp.中分离得到,生测结果表明,在0.5μmol/mL浓度下化合物1对小麦赤霉、香蕉炭疽和柑橘青霉有中度抗菌活性,化合物2对小麦赤霉、香蕉炭疽有中度抗菌活性,对柑橘青霉具有轻度抗菌活性.     

考夫曼网柄牛肝菌子实体的化学成分

采用几种柱色谱技术和半制备高效液相色谱,对考夫曼网柄牛肝菌子实体中的化学成份进行分离纯化,根据波谱数据结合参考文献鉴定化合物的结构,并检测化合物乙酰胆碱酯酶(ACh E)与α-糖苷酶的抑制活性和DPPH自由基清除活性。结果从考夫曼网柄牛肝菌中分离得到19个化合物,分别鉴定为麦角固醇(1)、β-谷甾醇(2)、对羟基苯丙酸甲酯(3)、对羟基苯乙酮(4)、对羟基苯甲酸甲酯(5)、咖啡酸甲酯(6)、对羟基苯甲酸(7)、对甲基苯酚(8)、N-乙酰基酪胺(9)、3,4二羟基苯乙酮(10)、邻苯二甲酸2-乙基己基酯(11)、香草酸(12)、原儿茶酸(13)、5,6-二羟基苯并呋喃-2,3-二羧酸二甲酯(14)、对羟基肉桂酸甲酯(15)、5α,8α-过氧麦角固醇(16)、异麦芽糖(17)、2-羟基-4-甲基苯甲酸甲酯(18)和对甲氧基苯丙酸(19)。化合物1,3,4,6,7,10,13具有DPPH自由基清除活性,化合物1对乙酰胆碱酯酶具有一定的抑制活性,化合物6,8,10,13对α-糖苷酶具有一定的抑制活性。     

踝节菌属真菌Talaromyces wortmannii LGT-4化学成分及生物活性研究

将一株踝节菌属真菌Talaromyces wortmannii LGT-4活化并接种在改良马丁氏培养基上进行发酵,通过色谱技术分离纯化,运用酶标法及体外激酶检测试剂盒的方法对单体化合物的乙酰胆碱酯酶、磷脂酰肌醇3-激酶的抑制活性进行测定,并对次级代谢产物的生物活性进行研究。结果表明,共分离到10个已知化合物,分别鉴定为Cyclo-(Pro-Ile)(1)、Cyclo(L-Tyr-L-Leu)(2)、Cyclo-(L-Pro-L-Phe)(3)、Aspergillumarin B(4)、Deacetylisowortmin(5)、Chaetominine(6)、(E)-2-(Hydroxymethyl)-3-(2-Hydroxypent-3-enyl)phenol(7)、N-(2-Phenylethyl)acetamide(8)、4-Hydroxynaphthalide(9)、1,2-Benzenedicarboxylic acid,dibuty ester(10)。Cyclo-(Pro-Ile)(1)具有较好的抗乙酰胆碱酯酶活性,其IC50为11.76μg/mL。10个化合物均无明显抗磷脂酰肌醇3-激酶的活性。且化合物1、2、3、6、8为首次从该真菌中分离得到。     

苦瓜叶提取物对小菜蛾的拒食活性及有效成分研究

 【目的】从苦瓜叶乙醇提取物中分离鉴定活性成分苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ，测定其对小菜蛾幼虫的拒食和抑制生长发育活性。【方法】用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水依次对苦瓜叶片乙醇提取物进行萃取，结果发现乙酸乙酯萃取物的拒食活性最强。活性组分经柱层析和高效液相色谱等方法分离纯化，并通过核磁共振谱(NMR)和质谱（MS）鉴定出化合物的分子结构。【结果】苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ对小菜蛾2、3龄幼虫的取食有明显的抑制作用。其中，苦瓜素Ⅱ的活性最高，对小菜蛾2、3龄幼虫的拒食中浓度（AFC50）分别为76.69μg•ml-1和116.24μg•ml-1。苦瓜素Ⅰ的活性次之，对小菜蛾2、3龄幼虫的AFC50分别为144.08μg•ml-1和168.42μg•ml-1。同时，苦瓜素I和苦瓜素Ⅱ对小菜蛾幼虫体重增长和存活也有抑制作用。【结论】苦瓜素Ⅱ和苦瓜素Ⅰ对小菜蛾幼虫有很强的拒食作用和抑制生长发育的作用，这些化合物的阐明对理解植物与昆虫的相互关系及其对小菜蛾的控制潜力有重要意义。     

月腺大戟抑菌活性成分的研究

用乙酸乙酯对月腺大戟根进行提取,结合生物活性追踪对其抑菌活性成分进一步细分,通过反复的硅胶柱层析和HPLC分析,最终得到一种纯化合物,根据理化数据和光谱学分析,确定此化合物为3-乙酰基-α-香树脂醇。室内生物活性测定结果表明,3-乙酰基-α-香树脂醇对常见的植物病原真菌具有较强的抑制作用。     

丝毛瑞香化学成分分析

通过柱层析方法对丝毛瑞香的化学成分进行分离纯化,得到12个化合物。用波谱数据和理化常数进行化合物结构鉴定,分别鉴定为：β-谷甾醇（1）、1-hexadecanol（2）、丁香醛（3）、咖啡酸正二十脂（4）、β-谷甾醇丁酸酯（5）、芹菜素（6）、4-（ethoxy）benzoicacid（7）、（2R,3S）-2-hydroxy-2,3-bis（4-hydroxy-3-methoxyben—zyl）-4-butanolide（8）、P—hydroxy—benzal-dehyde（9）、P—anisicacid（10）、对羟基苯甲酸（11）、2-hexylidene-3-methylsuccinicacid（12）。     

硫酸香茅醛显色法测定莪术油微囊载药量与包封率

为评价莪术油/(麦芽糊精-Povacoat)微囊的质量,建立了硫酸香茅醛显色测定其载药量和包封率的方法。对莪术油乙醇溶液进行波长扫描,确定508nm为最大吸收波长,显色稳定性试验表明,反应液在150min内吸光度较稳定。莪术油检测浓度在0.199 2μg/mL~9.960μg/mL范围内线性关系良好(A=0.094 7C-0.001 2,r=0.999 3),微囊的载药量测定和包封率测定的方法回收率分别为99.6%和99.1%。经测定,3批微囊的载药量为51.5mg/g~53.2mg/g,包封率为88.2%~90.7%。     

稀土元素铽对蚕豆幼苗生长势的影响

试验以蚕豆为材料，研究了铽对种子生长势的影响。试验结果显示：低浓度下（3～6μg／mL）硝酸铽处理的蚕豆根、芽重量逐次增大，（12～48μg／mL）硝酸铽处理的蚕豆根、芽重量逐次减小。说明蚕豆种子的最佳浸种浓度为6μg／mL。     

红蓼拒食活性组分的分离及其对小菜蛾幼虫代谢酶活性的影响

为研究红蓼(Polygonum orientale L.)的杀虫活性及作用机理,通过萃取、柱层析方法,测定了红蓼提取物对小菜蛾(Plutella xylostella L.)3龄幼虫拒食活性及对其幼虫体内谷胱甘肽S-转移酶、羧酸酯酶、酸性磷酸酯酶、碱性磷酸酯酶系活性的影响.结果表明,乙酸乙酯萃取物比其他4种萃取物具有更高的拒食活性,在5.0 mg/ml的浓度下,24 h和48 h的拒食率分别为68.42%和62.55%.乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析后,得到13个组分,比较13个组分的拒食活性发现,组分8的活性较高,在浓度为2.5 mg/ml时,24 h和48 h的拒食率分别为77.13%和68.53%.同时,组分8对小菜蛾幼虫体内代谢酶存在不同程度的影响:对谷光肝肽-S-转移酶和碱性磷酸酯酶的活性具有明显的抑制作用;对羧酸酯酶和酸性磷酸酯酶的活性有一定激活作用.活性物质主要集中在组分8中,是进一步研究的重点内容.     

茼蒿素类似物对几种害虫的生物活性研究

对茼蒿素类似物的生物活性进行了研究。浸叶法处理小菜蛾 2龄幼虫 ,12号和 2 0号化合物 5d后的 LC50 值分别为 4 98.74μg· m L-1和 2 99.82μg· m L-1;对菜粉蝶 3龄幼虫处理后 6d的L C50 值分别为 655.79μg· m L-1、 4 65.74 μg· m L-1,处理后 8d的 L C50 值分别为 3 82 .12 μg·m L-1、 2 78.86μg· m L-1。以 5μg/头的 12号和 2 0号化合物注射处理菜粉蝶 5龄幼虫 ,2 4 h后试虫的校正死亡率分别为 4 5.3 4 %和 68.86%。 12号和 2 0号化合物对致倦库蚊 3龄幼虫处理后 2 4 h的 L C50 分别为 9.91μg· m L-1和 6.2 1μg· m L-1。     

PTP1B抑制剂1-（2,4-二羟基苯）-3-（萘-2-基）丙-2-烯-1-酮的合成及生物活性研究

以2,4-二羟基苯乙酮为起始原料,经过氯甲基甲醚保护、克莱森-施密特缩合和脱保护3步反应,合成了化合物1-（2,4-二羟基苯）-3-（萘-2-基）丙-2-烯-1-酮（3）。采用IR、^1H—NM R、^13C-NMR、MS等进行了结构表征。通过比色法对化合物1-（2,4-二羟基苯）-3-（萘-2-基）丙-2-烯-1-酮（3）进行蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B（protein tyrosine phosphatase1B,PTP1B）抑制活性测定,结果显示化合物3质量浓度为20μg／mL时,化合物3的PTP1B酶抑制率分别为93．45％,表明化合物3具有较好的PTP1B酶抑制活性。     

微红新月蕨的杀虫活性和活性组分的分离及鉴定

【目的】研究微红新月蕨（Pronephrium megacuspe）的杀虫成分并对其进行分离、鉴定。【方法】通过生物活性测定确定微红新月蕨提取物对几种害虫的杀虫活性及其作用方式,并在活性跟踪的基础上,通过萃取、柱层析、薄层层析制备、重结晶、核磁共振和质谱等方法对活性组分进行分离和鉴定。【结果】微红新月蕨甲醇提取物对家蝇成虫（Musca domestica）、白纹伊蚊4龄幼虫（Aedes albopictus）、桃蚜（Myzus persicae）具有较好的毒杀活性,对小菜蛾（Plutella xylostella）、亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）和菜粉蝶（Pieris rapae）3龄幼虫具有拒食活性。从微红新月蕨甲醇提取物中分离和鉴定了4种化合物,即7-羟基-5-甲氧基-6,8-二甲基黄烷酮、2'',4''-二羟基-3''-甲基-6''-甲氧基查尔酮、5,7-二羟基-6,8-二甲基黄烷酮和5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮。上述4种化合物在50 mg•L-1的浓度下,对亚洲玉米螟3龄幼虫都具有拒食活性;5,7-二羟基-6,8-二甲基黄烷酮对小菜蛾3龄幼虫具有较弱的拒食活性,24 h的平均拒食率为40.51%,另外3种化合物对小菜蛾3龄幼虫没有拒食活性;2 ?g/头的剂量下,这4种化合物对亚洲玉米螟3龄幼虫没有触杀活性,24和48 h的平均死亡率为0;1 ?g/头的剂量下,5,7-二羟基-6,8-二甲基黄烷酮对小菜蛾3龄幼虫48 h的平均死亡率为33.76%,另外3种化合物对小菜蛾3龄幼虫也基本没有触杀活性。【结论】微红新月蕨甲醇提取物对多种害虫具有较高的活性,从该植物中已分离鉴定出的4种化合物母体结构一致,但取代基不同或取代的位置不同,其活性也有明显的差异。因此,微红新月蕨中其它化学成分及其构效关系值得深入的研究。     

山石榴果实提取物对小菜蛾的拒食作用

以室温冷浸法，用石油醚、乙酸乙酯和甲醇等溶剂对山石榴Catunaregam spinosa果实进行提取，其提取率分别为0．44％、1．80％和17．10％．拒食活性测定结果表明：在10mg／mL的质量浓度下，甲醇提取物对小菜蛾Plutella xylostella幼虫的拒食活性最高，24h非选择性拒食率达82．49％．对甲醇提取物进行活性成分分离，初步确定活性成分主要存在于正丁醇萃取物和甲醇／水（体积比为10／3）的沉淀物中，质量浓度为10mg／mL时，正丁醇萃取物和甲醇／水沉淀物对小菜蛾幼虫24h拒食率分别为91．24％和96．77％．     

全氟辛烷磺酸酶联免疫检测方法的研究

以人工合成的全氟辛烷磺酸免疫原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体,选择包被抗原浓度为0.1μg/mL,抗体稀释度为1∶8 000,建立酶联免疫(ELISA)检测方法。交叉反应试验结果表明,除全氟癸烷磺酸和全氟己烷磺酸的交叉反应率偏高(16.2%,14.22%)外,与其他全氟化合物交叉反应率低于10%,即该抗体有较好的特异性。PFOS检测限为10μg/L,该ELISA方法的最佳工作范围在10~1 000μg/L之间,在此范围内平均回收率为101.62%,平均变异系数为2.4%,表明该方法准确度和精密度高,便于在线检测,可应用于对水体中全氟辛烷磺酸残留的酶联免疫检测。     

割手密AFLP分子标记技术体系建立与优化

【目的】建立和优化割手密AFLP分子标记技术体系,为割手密遗传多样性分析、遗传图谱构建提供技术支持。【方法】以广西割手密GXS87—16、GXS85．30、GXS79—9、GXS96、GXS112、GXS212为材料,利用改良SDS法提取DNA,并用EcoR I和Mse I酶切,连接接头后,采用正交试验设计对影响预扩增反应和选择性扩增反应的主要成分如Mg^2＋、模板DNA、引物、dNTP、Taq聚合酶浓度进行优化。【结果】样品DNA用限制性内切酶＆0RI和MseI各3u于PCR仪过夜可完全酶切。经正交设计优化,较佳的预扩增体系包含0．4μL dNTPs（20mmol／mL）,1．6μLMg^2＋（25mmol／mL）,2．0μL EcoRI—P（5pmol／mL）,2．0IxLMseI-P（5pmol／mL）,1UTaq酶（1U／μL）,DNA模板稀释10倍;选择性扩增体系包含0．4μL dNTPS（20mmol／mL）,0．8μLMg^2＋（25mmol／mL）,1．0μL EcoR I—AAG（6pmol／mL）,1．0μL Mse I-CAG（6pmol／mL）,3U Taq酶（1U／μL）,DNA模板稀释20倍。以对优化反应体系扩增获得的PcR产物用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染后,可获得清晰的多态性指纹图谱。【结论】建立的割手密AFLP分子标记技术体系具有扩增条带清晰、多态性丰富的特点,可为构建割手密高密度遗传图谱提供技术支持。     

澳大利亚厚皮海绵化学成分分离鉴定及其抗肿瘤活性研究

为进一步探求澳大利亚厚皮海绵Craniella australiensis在海洋药物研制中的作用,采用硅胶柱层析及Sephadex LH-20凝胶过滤层析等技术,从澳大利亚厚皮海绵乙酸乙酯层浸膏中分离纯化出两种化合物,并通过波谱数据与文献对照的方法对化合物进行了结构鉴定,采用CCK-8法对2个化合物进行体外抗肿瘤细胞活性试验。结果表明:从澳大利亚厚皮海绵分离得到的2个化合物分别为Aldisin和2-Bromoaldisin;体外抗肿瘤细胞活性试验显示,化合物Aldisin和2-Bromoaldisin对人克隆结肠腺癌细胞(Caco-2)、人结肠癌细胞(HCT116)、人肝癌细胞(7721)、人胶质瘤细胞(U251)和人肾癌细胞(A498)均具有抑制活性的作用,其中化合物Aldisin处理7721细胞的IC50为(67.56±3.06)μg/m L,抑制作用显著。研究表明,两种化合物属于天然产物,可作为潜在的抗肿瘤药物进行进一步研究。