RAPD技术在昆虫学中的应用

随机扩增多态DNA(RandomAmplifiedPolymorphicDNA,简称RAPD)是J.Williams和J.Welsh两个研究小组于1990年同时提出的一种随机引物扩增,寻找多态DNA片段的遗传标记技术,它是建立在PCR技术基础上,以随机的寡聚脱氧核苷酸作为PCR反应引物,对基因DNA进行扩增而显示DNA图谱和对物种进行亲缘关系、系统发育分子水平的鉴别,以及分子生物学、分子生态学的研究。RAPD标记的一个明显的特点是RAPD引物无特异性,可以用未知序列的基因组DNA作为模板,通过PCR扩增获得一组不连续的DNA片段,且RAPD所需引物较短,10个左右的寡核苷酸即可…     

CpG—DNA特征结构与其免疫刺激特性的关系

CpG-DNA是一些具有免疫激活功能的以未甲基化的CpG基序为核心的DNA序列,它包括含CpG基序的人工合成的寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)和自然界中细菌、病毒、无脊椎动物等低等生物的基因组DNA。CpG基序(CpG motifs)是指一类以非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤核苷酸为核心的寡聚脱氧核糖核苷酸,其碱基排列大多遵循以下规律:5’端为2个嘌呤,3’端为2个嘧啶。研究表明,这种序列可激活多种免疫效应细胞,其特征结构如CpG核心、侧翼序列、骨架长度等都对其免疫刺激特性有重要影响。本文就其特征结构与免疫刺激特性的关系作一介绍。     

CpG-DNA免疫佐剂作用研究进展

CpG-DNA是一些具有免疫激活功能的以未甲基化的CpG基序(CpGmotif)为核心的DNA序列,它包括含CpG基序的人工合成的寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)和自然界中细菌、病毒、无脊椎动物等低等生物的基因组DNA。随着对CpG基序的DNA和寡核苷酸免疫学特性的深入了解,人们对CpG特征结构在DNA免疫学中的重要作用有了逐步的认识,并在DNA疫苗、肿瘤免疫、病毒免疫等方面进行了临床应用。本文就CpG的特征结构、免疫活性、佐剂效应以及应用前景作一简要介绍。     

HIF-1反义核酸对金鱼HIF-1α及其靶基因VEGF表达水平的影响

金鱼是低氧耐受能力最强的淡水鱼类之一,低氧诱导因子-1(hypoxia induced factor,HIF-1)在动物低氧应答调节中发挥关键作用,目前尚没有关于鱼类HIF-1抑制剂的研究报道。试验分析了HIF-1反义寡聚核苷酸对金鱼肝脏组织HIF-1及其靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的基因表达差异。荧光定量PCR结果显示,低氧状态下,30,60 mg/kg剂量的反义核酸能有效抑制VEGF基因的表达,但对HIF-1αm RNA水平没有影响。制备金鱼HIF-1兔源多克隆抗体并进行Western Blot分析,结果显示,60 mg/kg剂量的反义核酸抑制低氧所诱导的HIF-1蛋白水平的上升,表明合成的反义核酸能够特异性地抑制金鱼HIF-1 m RNA的翻译。金鱼HIF-1抗体的合成及反义寡聚核苷酸的制备,可为进一步探索金鱼独特的低氧应答机制提供有效研究手段。     

RAPD标记技术及其在畜禽遗传育种中的应用

RAPD标记技术是1990年由Williams和welsh领导的两个实验室独立发展起来的一项DNA多态性检测技术[1,2].它是利用一系列碱基顺序随机排列的寡聚核苷酸作为引物,对目的基因组DNA进行扩增.这种特定的随机引物与作为模板的基因组DNA上特定的位点结合,当这些结合位点在模板DNA上的分布符合RAPD扩增反应条件,即在一定范围内模板DNA上有与引物互补的反向重复序列时,就可以扩增出该范围内的DNA片段.不同物种基因组DNA中这种反向重复序列的数目和间隔距离的长短不同,通过扩增产物的比较,可以识别出这些物种中基因组DNA的多态性片段.     

寡聚核苷酸保护的银纳米簇的生成及其在生物成像中的应用

文中以寡聚核苷酸、硼氰化钠(NaBH4)、硝酸银(AgNO3)为原料合成了寡聚核苷酸保护的银纳米簇,将寡聚核苷酸保护的银纳米簇与细胞结合进行成像分析,并采用荧光光谱、MALDI TOF MS、TEM及LSCM对寡聚核苷酸保护的银纳米簇进行了测试分析。质谱测试结果表明,寡聚核苷酸保护的银纳米簇中含有10个银原子。投射电镜观察发现寡聚核苷酸保护的银纳米簇颗粒大小基本小于2 nm。荧光共聚焦的细胞成像结果发现寡聚核苷酸保护的银纳米簇能进入细胞并进行原位标记成像。细胞毒性试验表明该银纳米簇无毒性。     

鸡的寡核苷酸探针DNA指纹研究

用人工合成的寡聚核苷酸（GT）10为探针产生8胪家系鸡的HaeⅢ酶切微卫星DNA指纹图谱。遗传距离分析结果表明：计算所得到的遗传距离与鸡的实际遗传背景一致，说明在缺少DNA指纹分析的小卫星探针或基因组探针的情况下，用合成容易，价格较低的寡核苷酸作为探针是可行的。     

5’——脱氧单核苷酸分离制备工艺的研究

5’——脱氧单核苷酸是DNA的组成单位，它及其衍生物不仅是生物化学研究中常用的重要试剂，而且也是遗传工程研究以及该类药物生产的重要原料。如遗传工程上用它来合成一级结构模拟药物，在临床上能控制一些遗传复制失调的疾病，用它还可以合成遗传密码子-脱氧单核苷酸的三联体或者基因片断；用它合成的脱氧低聚核苷酸，作为大肠杆菌脱氧核糖核酸的聚合酶的样板等，     

A型流感病毒NP基因小干涉RNA表达载体的构建

以A型流感病毒NP基因为靶标,设计并合成了3对编码发夹状siRNA寡聚核苷酸。将合成的序列互补的寡聚核苷酸退火形成双链,克隆至pSilencer 1.0-U6载体中,并转化DH5a菌株,氨苄抗性筛选阳性菌落,扩大培养后,提取质粒进行酶切鉴定,并进行测序分析。结果显示,酶切后得到预期长度的DNA片段;插入序列插入的位置与设计完全一致,无碱基缺失或突变。表明A型流感病毒NP基因小干涉RNA表达载体构建成功。     

柔嫩艾美耳球虫端粒DNA重复序列的South-ern印迹杂交分析

为进一步确定柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)端粒DNA的重复序列,为下一步端粒酶活性检测奠定基础,根据已克隆发表的E.tenella端粒DNA重复序列信息,设计了由4个端粒重复序列串联的寡聚核苷酸探针(TTTAGGG)4,并以生物素地高辛标记。将该探针与经BAL31-EcoRⅠ酶切后的E.tenella基因组DNA进行Southern印迹杂交分析。结果显示:E.tenella基因组DNA与探针杂交获得了清晰的杂交条带,随BAL31酶切时间的延长,杂交信号逐渐减弱,进一步证明了E.tenella端粒DNA重复序列为5-′TTTAGGG-3′,且此重复序列在E.tenella染色体的末端。