一株抗灰霉病解淀粉芽孢杆菌的筛选鉴定及抑菌蛋白的分离

【目的】为研究一株筛选自大黑山林间土壤下的生防细菌,以形态学、16S rDNA进行鉴定。同时对其抑菌蛋白进行分离。【方法】采用对峙平板法进行初筛、复筛,用抑菌圈法测定抑菌效果,并镜检菌丝效果。通过形态学观察,生理生化及16S rDNA基因序列分析研究其分类。以SephacryI S-200分离抑菌蛋白。【结果】生防细菌K1对灰霉病具有稳定的抑菌效果,抑菌直径达到45 mm;16S rDNA鉴定为解淀粉芽孢杆菌。无菌发酵液通过SephacryI S-200分离得到一种抗菌蛋白。SDS-PAGE显示其分子量为55k Da。【结论】筛选出一株生防解淀粉芽孢杆菌K1,分离得到一种分子量为55k Da的抗菌蛋白。     

拮抗菌B-001抗菌蛋白产生的最佳发酵条件和特性及其室内防效

分离得到1株抑制烟草青枯病菌的内生拮抗菌B-001菌株.为确定其抗菌蛋白产生的最佳培养基和培养条件,用硫酸铵沉淀法从发酵液中提取抗菌蛋白质,测定其对烟草青枯病菌抗菌活性,确定产生抗菌蛋白的最佳培养基为BPY液体培养基,最佳发酵条件为pH7.0,30℃,装液量100 mL,200 r/min振荡培养96 h;抗菌蛋白在pH5.0,pH8.0时抑菌活性仍分别保持90%,96%;pH6.0,pH7.0时抑菌活性仍保持不变;对酸、碱稳定;经40～100℃处理20 min后抑菌活性保持不变,具有良好的热稳定性;对蛋白酶有一定的耐受性.在温室内,抗菌蛋白粗提液对烟草青枯病可取得83.8%的防效.     

蛹虫草抗菌活性物质的初步研究

利用平板对峙法,从实验室保藏的20株蛹虫草菌株中筛选出抗菌效果较强的CF2菌株；采用蒸馏水和95％乙醇作为提取剂,提取液作用于指示菌,发现水溶性提取物抑菌效果明显优于脂溶性提取物；经Sevage法脱蛋白后抑菌效果消失,初步分析该活性物质为蛋白质.在90℃水浴10 min后抑菌物质才失去活性,表明该抑菌物质对温度不敏感.对芽孢杆菌和酵母菌的抑制率分别为97.1％、30.9％,对黑曲霉菌落生长抑制率为18.4％.     

生防细菌ML-3抗菌蛋白稳定性研究

为确定ML-3表达的抗菌蛋白在不同外部环境下的稳定性,本研究采用不同温度、p H、紫外光照时间、金属离子、蛋白酶处理,对ML-3抗菌蛋白抑菌性进行研究。结果表明:该抗菌蛋白在低于60℃、p H5～8、紫外光照24h下可以保持较高抑菌活性;对Cu2+和Mg2+敏感,对Na+、K+、Zn2+和Fe2+不敏感;对胃蛋白酶和胰蛋白酶敏感,对蛋白酶K不敏感。提示ML-3抗菌蛋白在田间生物防治中具有一定应用潜力。     

紫菜薹种子抗菌蛋白的分离纯化及其抑菌活性和稳定性研究

从紫菜薹种子中筛选和纯化抗菌蛋白,以促进未来新型抗菌药物的发展。通过SP-Sepharose阳离子交换层析柱、Mono S~(TM)5/50GL强阳离子交换层析柱和Superdex~(TM)75 10/300GL层析柱依次层析,从紫菜薹种子中纯化出一种分子质量约为13 ku的抗菌蛋白,其能够抑制8种植物病原真菌的生长。抗菌蛋白在40~80℃和pH值1~13条件下,抑菌活性不受影响;经200 mmol/L SDS溶液、2%吐温(Tween 80)溶液和20%有机溶剂处理后,仍具有抑菌活性;经Al~(3+)、Zn~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)、Pb~(2+)、Mg~(2+)、K~+、Cr~(3+)金属离子处理后,具有抑菌活性,而经Mn~(2+)、Ca~(2+)金属离子处理后,抑菌活性消失。综上,紫菜薹种子抗菌蛋白是一种抑菌活性稳定的广谱抗菌蛋白,具有潜在应用价值。     

哈密瓜内生拮抗细菌的筛选及其抑菌物质研究初报

通过测定菌体及胞外分泌物抑菌活性,从378个哈密瓜内生细菌中筛选出了对瓜类细菌性叶斑病菌、疫霉病菌具有较强拮抗活性的菌株。对抗菌活性显著的197菌株的胞外抑菌活性物质进行了初步研究。研究显示:197菌株胞外分泌物的抗菌效价可达80倍;其抗菌活性物质为蛋白质类物质,可通过15%-90%饱和度的硫酸铵盐析,其中75%硫酸铵饱和度提取的粗蛋白的抗菌活性最强;该抗菌蛋白具有一定的耐热性,温度高于40℃后抑菌活性逐渐下降,100℃下仍能保持部分抑菌活性,120℃时全部丧失。     

响应面法优化黄鲫蛋白抗菌液-葡萄糖美拉德反应的条件

[目的]利用美拉德反应提高黄鲫蛋白抗菌液与葡萄糖反应物对副溶血弧菌的抑菌作用。[方法]在前期单因素研究的基础上,采用Box-Behnken响应面分析法对黄鲫蛋白抗菌液-葡萄糖美拉德反应条件中葡萄糖添加量、反应初始p H、加热时间和加热温度进行优化。[结果]当葡萄糖添加量为3%,反应液初始p H为9.0,加热时间为100 min,加热温度为120℃,在此条件下黄鲫蛋白抗菌液—葡萄糖美拉德反应产物对副溶血弧菌的抑菌效果最强。[结论]美拉德反应能够提高黄鲫蛋白抗菌液的抑菌活性。     

花椒内生细菌Y-6抗菌蛋白抑菌活性及稳定性研究

为明确花椒内生细菌Y-6抗菌物质种类与特性,丰富生物农药开发源,采用生长速率法、硫酸铵沉淀及聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法对其抗菌物质种类、抑菌活性、最佳硫酸铵沉淀饱和度及稳定性进行研究。结果表明,菌株Y-6代谢物对番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌和梨黑斑病菌具有较好的抑菌效果,抑菌率分别为90.4%、95.2%和90.1%。抗菌物质为蛋白质,在70%硫酸铵饱和度下可完全沉淀,其对番茄早疫病菌和番茄灰霉病菌的抑菌圈直径分别为24 mm和26 mm。抗菌物质在p H值4~11、温度低于80℃和紫外照射12 h后仍表现出较好的抑菌活性。综上说明,花椒内生细菌Y-6抗菌蛋白具有一定的生物农药开发应用潜力。     

麸皮中阿魏酸体外抑菌作用及机理

明确麸皮阿魏酸体外抑菌活性及其作用机理。通过滤纸片扩散法测定麸皮阿魏酸对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑菌活性,筛选最显著菌株最小抑菌浓度,并分析在0MIC、MIC、3MIC下对该显著指示菌株生长曲线、胞外蛋白和碱性磷酸酶的变化以探讨抑菌机理。结果表明,麸皮阿魏酸对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最显著,抑菌圈直径为12mm,MIC为25μg/mL。经MIC、3MIC阿魏酸处理后,菌株生长潜伏期明显增长,胞外蛋白含量降低、AKP含量升高,且MIC条件下效果最显著。由此推测其抑菌机理与干扰蛋白质合成,破坏其细胞壁、细胞膜的通透性有关。该研究可为新型抗菌制剂提供理论支持。     

磷酸盐缓冲液的浓度和pH对革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽分级盐析的影响

[目的]探讨磷酸盐缓冲液的pH和浓度在分级盐析时,对革胡子鲶肠道各组分蛋白/肽的影响。[方法]以不同浓度和pH的磷酸盐缓冲液作为组织匀浆缓冲液,在硫酸铵饱和度为20%、40%、60%、80%和100%的条件下,对革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽进行分级盐析,并对盐析产物进行称重、电泳检测和抑菌活性分析。[结果]磷酸盐缓冲液的pH为6.0或7.4时,其浓度对盐析产物产量、蛋白沉淀和抑菌效果无显著影响。而pH为8.0、浓度为0.05 mol/L时,硫酸铵饱和度为60%和100%的粗蛋白/肽的产量显著高于浓度为0.02 mol/L的磷酸盐缓冲液粗蛋白含量;大分子蛋白能更好地在硫酸铵饱和度为20%和40%时沉淀下来,而在饱和度为60%、80%和100%能获得分子量相对较小的抗菌蛋白/肽。磷酸盐缓冲液的pH和浓度对抑菌效果无显著影响。[结论]pH8.0,浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液更适于革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽的提取。