复凝聚法制备苏云金杆菌微胶囊

[目的]探讨复凝聚法制备以明胶和阿拉伯胶为壁材的苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt）微胶囊的工艺.[方法]通过单因素试验,研究了明胶浓度、阿拉伯胶浓度、芯壁比、pH、反应温度和转速对微胶囊包埋效率的影响,再通过正交优化试验确定最佳制备条件.利用光学显微镜、扫描电子显微镜和粒径测微仪对苏云金杆菌微胶囊形态及粒径分布进行表征.[结果]复凝聚法制备苏云金杆菌微胶囊最佳工艺条件为明胶浓度1.0％,阿拉伯胶浓度1.0％,芯壁比1∶1,复凝聚反应pH 3.6,温度40℃,搅拌速度550 r/min.在此条件下的包埋率达82.32％,粒径分布均匀且平均粒径在28.29 μm左右流动性好的球型固体微胶囊.[结论]该微胶囊符合实际应用需求,为杀虫剂的研制提供了理论依据.     

抗紫外线降解苏云金芽胞杆菌微胶囊剂的制备工艺

选择邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)为囊材,以苏云金芽胞杆菌(Bt)原粉为囊芯,探讨添加紫外线吸收剂后制备Bt微胶囊剂的工艺条件,并用生物测定的方法进行Bt微胶囊剂抗紫外线降解能力比较.结果表明,Bt微囊剂加工的最佳工艺条件为:Bt原粉/CAP/紫外线吸收剂=100/40/3,pH值3.5左右,温度25℃.生物测定结果表明,经紫外线照射处理后,Bt原粉效价活性保留率为30.7%,以CAP为囊材包被的Bt微胶囊剂效价活性保留率为54.8%,抗紫外线降解能力比Bt原粉提高约24%;以CAP为囊材,添加2种不同的紫外线吸收剂包被的Bt微胶囊剂,其中防效最佳的配方组合效价活性保留率为86.9%,抗紫外线降解能力比Bt原粉提高约56%.     

Bt微胶囊制备技术探讨

本文采用不同材料不同方法制备苏云金杆菌Bt微胶囊制剂并进行了分析比较，结果发现，以明胶-阿拉伯胶为壁材用复凝聚相分离法制备的微胶囊包囊率、平均粒径、贮存稳定性等指标均高于其他方法。明胶-阿拉伯胶为壁材的最佳工艺配方为：1％浓缩菌液浓度、3％明胶、3％阿拉伯胶，50℃，转速200r/min。其包囊率为80．1％，平均粒径为53．6μm。     

苏云金芽胞杆菌微胶囊剂的制备及其抗紫外线降解活性研究

以邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)为囊材,以Bt原粉为囊芯,添加紫外线吸收剂,制备Bt微胶囊刺,并用生物测定的方法对Bt微胶囊剂抗紫外线降解能力与Bt原粉进行比较.结果表明,Bt微胶囊剂热贮(54±2℃,14d)后效价下降约5%;经紫外线照射处理后,Bt原粉效价活性保留率为24.30%,Bt微胶囊剂效价活性保留率为67.60%,抗紫外线降解能力比Bt原粉提高约43%.田间药效试验结果显示,在相同施药量5g·666.7 m-2处理下,Bt微胶囊剂药后3、5、7 d的校正防效均高于Bt原粉;Bt原粉的防效在药后5 d开始下降,而Bt微胶囊剂的残效期可达1周以上.     

苏云金杆菌制剂的研究与应用

苏云金杆菌制剂的研究与应用浙江省农业科学院情报所毛水莲一、概况苏云金杆菌制剂（即ＢＴ制剂），是微生物杀虫剂中应用最广泛的一类细菌性农药。世界上第一个ＢＴ制剂于１９３８年在法国研究成功，而作为商品、投放市场的ＢＴ制剂是１９５７年由美国太平洋酵母公司首次...     

苏云金杆菌液体剂型的研制

用凯松ＣＧ和尼泊金甲酯作复合防腐剂,吐温－２０作湿润展着剂,木质素磺酸钠和山梨醇作紫外光防护剂,人工甜味剂作昆虫食欲促进剂,油酸作杀虫增效剂,研制出了高效、稳定的苏云金杆菌液体剂型。在一年的正常存放试验中,液剂效价保持率８９％。加速降解试验表明,４５℃条件存放２５ｄ,液剂效价保持率为７３％。在紫外光照射下,当新研制的剂型效价保持率为９０．２％时,对照保持率仅为３６．６％。     

苏云金杆菌复配剂对小菜蛾和菜青虫的防治效果

将苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株20与生物杀虫剂Success混配制成复配剂,对2龄小菜蛾(Plutella xylostella L.)幼虫和菜青虫(Pierisrapae L.)的防治效果进行了田间药效试验.试验结果表明,该复配制剂可以有效防治菜青虫和抗性小菜蛾幼虫,其防治效果和杀虫速度均明显高于单独使用Bt菌株20和生物杀虫剂Success,表现出明显的增效作用.     

苏云金杆菌复配剂防治水稻纵卷叶暝

生物农药纯苏云金标菌（Bt）制剂与化学农药25％杀虫双水剂复配在水稻纵卷叶暝防治上的应用试验表明：采用Bt1500mL/hm^2 25%杀虫双1500mL/hm^2在水稻纵卷叶暝卵孵化高峰期喷施效果最好，4d防效达96．94％，8d防效达97．38％，白叶率防效达96．46％，同时对天敌影响很小，对环境影响也较纯化学农药大大减小，具有明显的经济效益和生态效益。     

苏云金芽胞杆菌剂型研究进展

苏云金芽胞杆菌是目前世界上应用最广的微生物杀虫剂,剂型加工与药效发挥有直接关系.综述了近十年来国内外剂型的研究进展.     

河北省部分地区苏云金芽孢杆菌菌株多样性的研究

选择河北省植被覆盖率高、生态系统典型且较完整的地区——白石山、雾灵山、满城灵山、清西陵、白洋淀、龙潭湖、顺平桃林采集土壤样品261份,分离出Bt菌株24株,其中雾灵山地区Bt出土率最高(17.8%)。分离的菌株产生的伴孢晶体形态各异,有长菱形、短菱形、球形、无定型,充分体现了河北省Bt资源的多样性。     

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的形成及降解

【研究目的】研究苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)伴孢晶体的形成及降解,为其生物学特性的系统研究和活性成分分析提供理论基础。【方法】将Bt菌株HD-1在牛肉膏蛋白胨固体培养基上30℃下培养24h,制成菌悬液后用日本电子JEM100-CX-II透射电子显微镜观察伴孢晶体的形成。采用五种溶解方法降解Bt菌株HD-1和LSZ9408伴孢晶体后,进行SDS-PAGE电泳。【结果】此研究的电镜观察表明BtHD-1在分裂过程中形成芽孢和晶体,晶体为大菱形。BtLSZ9408晶体含有130和65kDa的毒蛋白,HD-1晶体含有130、65和25kDa的毒蛋白。【结论】BtLSZ9408和HD-1伴孢晶体都包含CryI和CryII蛋白质毒素。     

苏云金芽孢杆菌质粒复制区的分离克隆

Bt-E.coli穿梭载体pHT315去除Bt复制区,构成了一个具有红霉素和氨苄抗性,同时具有多克隆位点的只能存E.coli中复制的载体,命名为pHT315-1。利用pHT315-1,通过部分酶切建库的方法,从近10 000个重组子中得到1个Bt复制区。序列测定结果表明,该复制区为5273bps,已在GentBank注册,Accession number为AY278324。GenBank核酸序列Blast表明,该复制区部分序列与Bt菌株HD263的复制区。ori43编码复制蛋白的宁列同源性为98％。30℃连续培养72h,复制区质粒在Bt无晶体突变株HD73cry-中稳定性达98％以上,30h生长曲线也表明,该复制区质粒对受体菌株无明显不良影响。     

苏云金杆菌制剂生物测定饲料防腐剂的选择

采用不同防腐剂处理苏云金杆菌制剂及进行毒力生物测定,结果表明,７＾＃（１００ｍＬ中含０．０５ｍＬ福尔马林和０．１５ｇ尼泊金）防腐剂处理苏云金杆菌制剂０－９６ｈ,抑制邪包萌发和菌体活性的效果最佳,其次为２＾＃（１００ｍＬ中含０．１５ｇ尼泊金）,８＾＃（１００ｍＬ中含０．１５ｇ尼泊金和０．０５ｇ土霉素）;毒力生物测定了７＾＃防腐剂最稳定,ＬＣ５０最小,灵敏度最高。     

苏云金杆菌和培养基氨基酸的比较分析

通过分析伴孢晶体、芽孢、培养基及发酵液等的氨基酸比例，初步得到一些有关氨基酸参与代谢的资料．在发酵过程中，氨基酸既有累积又有消耗，特别是谷氨酸明显地被消耗；不同原料的氨基酸比例相差很大．这很可能是培养基影响杀虫毒力的主要原因之一．同一出发菌株８０１０（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｖａｒｋｕｒｓｔａｋｉ８０１０，简称８０１０）分离得到的３号、５号和７２号菌株氨基酸比例稍有不同，它们与有关资料报道的其它菌株的氨基酸比例有较大不同．伴抱晶体和芽孢之间的氨基酸比例明显不同．Ｂｔ８０１０菌种发酵需要供给较多的谷氨酸．     

苏云金芽孢杆菌发酵培养基的筛选

采用正交试验对BtWB7菌株发酵培养基进行筛选,结果表明,不同原料对发酵液菌数影响相差较大,其中酵母粉和鱼粉影响最大.本试验获得的最佳摇瓶发酵配方为:玉米粉4%、黄豆饼粉1%、酵母粉2%、鱼粉2.5%和蛋白胨0.1%(质量分数).     

苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

[目的]研究来源于苏云金芽孢杆菌的几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的表达情况。[方法]以苏云金芽孢杆菌染色体DNA为模板,PCR扩增获取几丁质酶基因chiA,将其与枯草芽孢杆菌表达载体pHSG连接,构建重组菌,经IPTG诱导后,检测培养液中的几丁质酶活性。[结果]扩增得到几丁质酶基因chiA大小为2.5 kb。构建的重组菌对底物[4-MU-(GlcNAc)3]显示出一定的水解活性,培养液酶活约为2.8 U/ml,而pHSG空质粒转化子在同样条件下其培养液没有明显酶活。该重组酶的最适pH值为6.5,最适反应温度为50℃,与苏云金芽孢杆菌自身产生的几丁质酶性质一致。[结论]几丁质酶基因chiA能在枯草芽孢杆菌中成功表达,表达产物可成功分泌到细胞外。     

电转化法及其在苏云金杆菌中的应用

苏云金杆菌（ Ｂｔ）工程菌的构建,可以采用原生质体融合、接合转移和转化等方法,其中电转化法被公认为是最有效的手段之一,此技术已广泛地应用于 Ｂｔ的遗传改良．本文阐述了电转化基本原理及基本操作步骤．此外,还就存在的问题和应用前景进行探讨