沙门氏菌快速检测技术研究进展

沙门氏菌是食品中最常见的致病菌,是导致食物中毒的重要病原菌之一,严重危害人类的健康安全和食品安全。由于其血清型繁多,传统方法检测起来耗时耗力。近年来,随着生物学的发展,新的检测技术层出不穷,尤其是分子生物学检测技术和免疫学检测技术。该文介绍了近年来检测食品中沙门氏菌技术的研究进展以及其应用前景。     

饲料中沙门氏菌检测技术的研究

在现代畜牧业生产中,饲料内沙门氏菌的存在是严重威胁养殖业健康、可持续发展的一个主要因素,同时影响着社会公共安全.不同的沙门氏菌检测技术各有优点、缺点,应用范畴方面也存在一定差异,只有全面了解这些差异,才能够灵活、正确地采取相应的检测技术,最大限度地控制饲料中沙门氏菌的污染问题.笔者对沙门氏菌进行了简单的介绍,重点分析了...     

鸡蛋中沙门氏菌的快速检测

选择江苏省不同地区来源的鸡蛋296枚,分别取蛋黄蛋清混合液以沙门氏菌增菌液快速增菌.取增菌培养物100 μl,离心去上清后,重新悬浮于100 μl超纯水中;以煮沸法制备可能存在的细菌DNA模板.通过对沙门氏菌毒力岛SPI-3的mgtC基因的PCR快速检测,确定其中18.24%的鸡蛋为沙门氏菌阳性.通过与细菌分离检测结果对比,揭示该方法明显提高了沙门氏菌的检出率,表明PCR是一种快速、敏感和高度特异性的沙门氏菌检测方法,值得在畜产品沙门氏菌的检测中推广应用.     

水产养殖病害快速检测技术研究

病害防治是水产养殖的重中之重。通过论述免疫学检测技术和分子生物学检测技术在水产养殖病害快速检测中的应用,比较不同检测技术的优缺点,以期为水产养殖病害快速检测及防控提供参考。     

PCR技术检测熟肉制品中沙门氏菌的研究

进行了PCR技术检测熟肉制品中的沙门氏菌的试验。电泳扩增产物表明:人工污染沙门氏菌的熟肉制品检测呈阳性,而无菌去离子水对照呈阴性。该检测方法具有快速、特异性强、灵敏度高等特点,可快速、准确地检测熟肉制品中沙门氏菌,从而提高食品安全评估的效率。     

应用聚合酶链反应快速检测沙门氏菌

利用聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｃｎ，ＰＣＲ）技术检测沙门氏菌。根据沙门氏菌鞭毛素Ｉ相抗原基因，设计了一对各长２０个碱基的引物，扩增２６９ｂｐ的片段。并用８个标准标沙门氏菌株和３个阴性菌株检查引物特异性，结果完全相符。采用５０μＬ体积，ＮＴＰｓ２００μｍｏｌ，引物各１μｍｏｌ，ｍｇ＋＋３ｍｍｏｌ，Ｔａｑ酶２Ｕ。循环温度为９７℃７ｍｉｎ予变性后；９４℃１ｍｉｎ，６０℃１ｍｉｎ，３５个循环后再延伸７２℃７ｍｉｎ。经电泳分析，灵敏度可达每毫升检出１０４个细胞，经二次扩增后，灵敏度还可提高。实验共检查了３０个可疑样品，检出率明显高于生化检查和免疫学方法检查。     

沙门氏菌PCR快速检测技术研究

通过改良热裂解法提取沙门氏菌基因组DNA,设计特异性引物进行PCR扩增,并对热裂解的时间进行了比较试验,对PCR检测的敏感性和所用引物的特异性进行了试验.结果表明,煮沸时间为2 min即可获得满足PCR要求的基因组DNA;设计的引物特异性好,能专一性扩增出约500 bp条带;该引物灵敏度高,能进行有效检测的核酸最低起始量为129 pg.采用热裂解法提取沙门氏菌基因组DNA进行PCR快速检测技术大大缩短了沙门氏菌检测时间.     

食源性致病菌的快速检测技术研究进展

畜产食品引发的食源性疾病发病率正日益上升,而致病菌是引发食源性疾病的主要因素,有效地检测出食源性致病菌的存在是食源性疾病预防与控制的关键环节.对近几年发展起来的食源性致病菌的快速检测方法进行系统的综述,同时对今后食源性疾病的快速检测方法进行了展望.     

具毒性质粒沙门氏菌的快速检测

针对沙门氏菌毒性质粒spvR基因设计PCR引物,检测具有毒性质粒的沙门氏菌.6株常见具有毒性质粒的沙门氏菌均获得特异性扩增,11株常见的无毒性质粒的沙门氏菌均未获得特异性扩增,5株非沙门氏菌检测结果均为阴性.结果表明,所设计引物具有高度特异性,适用于具毒性质粒沙门氏菌的快速检测.     

畜产品中沙门氏菌的快速检测

以热裂解法快速提取DNA模板,应用PCR技术检测沙门氏菌,22种沙门氏菌的基因均获得特异性扩增(496bp),5种非沙门氏菌检测结果为阴性。试验结果表明,PCR是一种快速、敏感和高度特异性的沙门氏菌检测方法,值得在畜产品沙门氏菌的检测中推广应用。     

沙门氏菌常见H抗原特异相的PCR快速检测

运用PCR技术检测沙门氏菌常见的H抗原特异相,甲型副伤寒、猪霍乱、鼠伤寒等常见危害人和动物的沙门氏菌因H抗原差异而分别获得特异性扩增。此技术具有快速简便、敏感性高和特异性强等优点,值得在对常见危害人和动物的沙门氏菌的快速检测中推广应用。     

应用Taqman荧光定量PCR快速检测宠物食品中的沙门氏菌

[目的]建立快速检测宠物食品中沙门氏菌(Salmonella)的荧光定量PCR方法。[方法]根据Genbank中登录的沙门氏菌吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白invA基因序列设计合成引物和探针,检测该方法的特异性和敏感性。[结果]该方法具有良好的特异性,对沙门氏菌的检测灵敏度可达到17 CFU/反应(25μl/反应)。应用该方法检测人工污染宠物食品,样品经18 h增菌后,结果均为阳性。[结论]该研究建立的Taqman荧光定量PCR方法可以快速、准确地检测宠物食品中的沙门氏菌。     

沙门氏菌内标PCR快速检测试剂盒的研制与应用

 【目的】研制一种能有效指示假阴性的PCR检测产品,用于沙门氏菌快速、准确、灵敏的检测。【方法】针对沙门氏菌invA基因、stn基因序列分别设计引物与扩增内标,建立添加扩增内标的沙门氏菌PCR检测方法,组装试剂盒,并对试剂盒的各项性能进行评价。【结果】试剂盒对147株沙门氏菌和28株非沙门氏菌的检测结果显示,所有沙门氏菌均能扩增出362 bp的目标条带,非沙门氏菌仅扩增出520 bp的内标条带。试剂盒检测沙门氏菌基因组DNA的检测限为8.0 fg/PCR,检测染菌量为4—5 CFU/10 mL的牛奶样品,增菌8—10 h即得到阳性结果。反复冻融60次或-20℃下贮存1年,均不影响试剂盒的使用效果。对食品样品的检测结果显示,阳性检出率为2/30,与国标法的检测结果相符,比未添加扩增内标的PCR检测结果（阳性检出率为1/30）准确。【结论】采用添加扩增内标的PCR试剂盒检测沙门氏菌,特异性强、灵敏度高、稳定性好,并能有效指示假阴性,提高检测的准确性,适用于食品中沙门氏菌的快速筛检。     

3类食品中沙门氏菌PCR快速检测方法的建立

建立了3类食品中沙门氏菌快速、敏感、特异的PCR快速检测方法。选取invA基因作为靶序列设计1对引物,在沙门氏菌中能扩增出198 bp的预期片段,而大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌的扩增结果均为阴性,表现出极好的沙门氏菌种特异性。通过对沙门氏菌标准菌种纯培养液PCR方法灵敏性的检测,发现纯培养的检测极限为72个细菌。用该方法对3类共计56份食品样品进行检测,检测结果与传统分离鉴定方法完全相符,表明该方法适用于食品中沙门氏菌的快速检测。     

等温荧光定量沙门氏菌快速检测试剂盒的评价与应用

食源性致病菌的快速检测一直是保障食品安全的关键。沙门氏菌(Salmonella)是重要的食源性致病菌之一。本研究以沙门氏菌人工污染的3种样品为对象,对一种基于环介导等温荧光扩增技术的沙门氏菌快速诊断试剂盒进行了灵敏度和准确性评估;再以该试剂盒对市售食品样品和临床腹泻样品适用性进行验证。结果表明,该等温荧光定量沙门氏菌快速检测试剂盒的检测限为10~3 CFU/mL,准确性96.7%以上。所有不同样品的结果显示:阴性样本的假阳性率分别为0.0%、3.3%和3.3%;阳性样本检出率分别为97.9%、100.0%和65.7%(含低浓度细菌污染样品)。该试剂盒具有检测周期短、操作简便、适用性广等特点。