提取大白菜基因组DNA的几种方法比较

对用SDS法、尿素法、改良SDS法、氯化苄和CTAB法提取的大白菜基因组DNA进行了比较,结果表明,改良SDS法提取的DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点,其A20／A280为1．7－1．9,A260／A230为1．8－2．0,叶片的DNA产量为400μg/g。用该法提取的大白菜DNA适于进行RAPD分析。     

提取大白菜基因组DNA的几种方法比较

对用 SDS法、尿素法、改良 SDS法、氯化苄和 CTAB法提取的大白菜基因组DNA进行了比较。结果表明 ,改良 SDS法提取的 DNA具有典型的天然 DNA分子的标准紫外吸收光谱特点 ,其 A2 6 0 /A2 80 为 1 .7～ 1 .9,A2 6 0 /A2 30 为 1 .8～ 2 .0 ,叶片的 DNA产量为 40 0μg/g。用该法提取的大白菜 DNA适于进行 RAPD分析。     

石斛F1作图群体基因组DNA提取研究

选用PEX法、改良CTAB法、SDS法和尿素法对石斛F1作图群体基因组DNA提取进行研究。结果表明:前3种方法提取出DNA的A260/A280值在1.8～2.0之间,A260/A230值在2.0～2.2之间;最后种方法取出DNA的A260/A280值为2.75,A260/A230值为3.04;不同方法提取出DNA得率为PEX法>改良CTAB法和>SDS法>尿素法。结论:PEX法提取DNA质量好、得率高以及用时短,最适用于石斛F1作图群体基因组DNA提取。     

适合库尔勒香梨SCoT分析用的DNA提取方法研究

[目的]有效利用SCoT分子标记法对库尔勒香梨优良营养系中相关基因,获得高质量基因组DNA,对目前常用的3种提取植物基因组DNA的方法进行比较研究,研究最适合库尔勒香梨SCoT分析的DNA提取方法.[方法]采用改良CTAB法,改良SDS法和试剂盒法从库尔勒香梨优良营养系的叶片中提取基因组DNA.采用NANODROP 2000核酸仪检测DNA浓度和纯度,并用1.2;琼脂糖凝胶电泳检测其完整性.以3种方法提取的基因组DNA为模板分别进行SCoT-PCR.[结果]改良CTAB法提取的基因组DNA的浓度为600 ～1 600 ng/μL,A260/A280为1.8 ～2.0,A260/A230＜2.0,电泳结果显示:有一条清晰的带,有拖尾现象,点样孔发亮;改良SDS法提取的基因组DNA的浓度为600 ～ 900 ng/μL,A260/A280为1.8 ～2.0,A260/A230为1.9 ～2.2,电泳结果显示:一条清晰的带,无拖尾现象只有一个点样孔发亮;试剂盒法提取的基因组DNA的浓度为100 ～ 200 ng/μL,A260/A280为1.8 ～2.0,A260/A230为2.2 ～2.5,电泳结果显示:一条清晰的带,无拖尾,无点样孔发亮现象,蛋白、多糖、酚类物质、RNA等去除彻底;以3种方法提取的基因组DNA为模板进行SCoT-PCR,PCR产物电泳结果显示:试剂盒法提取的DNA可以扩增出7条清晰明亮的带,改良CTAB法提取的DNA只能扩增出4条清晰的带,改良SDS法提取的DNA只能扩增出2条带.[结论]比较目前常用的3种提取植物基因组DNA的方法,综合成本高低,毒性大小,步骤多少,时间长短,试剂盒法是最适合提取库尔勒香梨优良营养系叶片基因组DNA的方法.     

小麦不同部位DNA提取的比较研究

[目的]探讨小麦不同取材部位对DNA提取质量和产率的影响。[方法]分别以小麦的种子、根尖和幼嫩叶片为材料,采用改良CTAB法分别提取小麦3个部位的基因组DNA,用0．8％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,用紫外分光光度计分别测定3个部位的DNA在A260和A280下的吸光值,根据A260/A280的值检测DNA的浓度和纯度,并以3个部位提取的DNA为模版进行RAPD扩增。[结果]采用小麦叶片提取DNA的产率最高,种子次之,根尖最低。3个部位提取的DNA纯度均相近,提取叶片获得的DNA浓度最大,为756μg/ml;其次是种子,为233μg/ml;根尖获得的DNA浓度最低,为90μg/ml。小麦不同部位提取的DNA模板对RAPD扩增没有明显影响,DNA浓度都能达到扩增的要求。[结论]小麦3个部位提取的DNA质量均较好,可以进行后续的酶切和PCR扩增等实验。     

红掌基因组DNA提取方法的优化

[目的]采用改良的SDS法提取红掌基因组DNA。[方法]以4种不同花色的红掌品种为材料,分别采用改良SDS法和CTAB法提取红掌基因组DNA,用紫外分光光度计测定英DNA在A260nm和A280nm下的吸光值,根据A260nm/A280nm的比值检测DNA的纯度和浓度。[结果]用改良SDS方法提取的DNA透明且无杂质,A260nm/A280nm比值在1．6—2．0,DNA纯度较高,可满足红掌分子生物学试验的要求;用CTAB法提取的DNA呈褐色或淡黄色,A260nm/A280nm,比值小于1．6,DNA纯度较低并且浓度低,舍有大量蛋白,此方法不适于提取红掌基因组DNA。[结论J采用改良SDS法可以提取到高质量的红掌基因组DNA,所提取的DNA的纯度和浓度可以满足红掌分子生物学研究的要求。     

菊芋不同部位DNA提取的比较研究

分别以菊芋的茎段、叶片和块茎为材料,采用改良CTAB法分别提取菊芋3个部位的基因组DNA,用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,分别测定3个部位的DNA在A260和A280下的吸光值,根据A260/A280的值检测DNA的浓度和纯度,并以3个部位提取的DNA为模板进行ISSR扩增。结果表明：采用菊芋叶片提取DNA的产率最高,茎段次之,块茎最低。三个部位提取的DNA纯度均相近,提取叶片获得的DNA浓度最大,为163.2 ng·μL-1;其次是茎段,为137.4 ng·μL-1;块茎获得的DNA浓度最低,为95.5 ng·μL-1。菊芋不同部位提取的DNA模板对ISSR扩增没有明显影响,DNA浓度都能达到扩增的要求。菊芋3个部位提取的DNA质量均较好,可以进行后续的酶切和PCR扩增等实验。     

添加生物炭土壤中总DNA最佳提取方法的筛选

获得高纯度的总DNA是进行土壤微生物宏基因组学研究的基础,也是分析生物炭作为土壤改良剂对土壤菌群结构影响的关键。由于生物炭对DNA中磷酸骨架的吸附作用,从添加生物炭的土壤中提取总DNA较为困难。为了寻找合适的提取混有生物炭的土壤总DNA的方法,本研究分别采用E.Z.N.A.Soil DNA Kit法(方法 1)、改良的E.Z.N.A.Soil DNA Kit法(方法 2)、SDS-玻璃珠法(方法 3)、Mo-Bio Power Soil DNA Isolation Kit法(方法 4)和改良的Mo-Bio Power Soil DNA Isolation Kit法(方法 5)对两种类型的混有生物炭的土壤样品进行总DNA的提取,并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析以及浓度和纯度的测定。结果表明:5种方法均可从土壤中提取到DNA,并且DNA大小一致,条带也比较单一。同时,采用不同的方法从两种混合土样中提取的DNA浓度范围为3.22~37.80μg·g-1干土,且土样1的DNA提取量明显大于土样2的DNA提取量。但是不同方法提取到DNA的产量和质量存在明显差异,其中方法 3提取的DNA得率最高,两种土样分别为37.80μg·g-1干土和10.78μg·g-1干土,但是该方法提取的DNA纯度最低,两种土样DNA的A260/A230值仅为0.664和0.684,A260/A280值小于1.6,说明提取产物中存在严重的蛋白质和腐殖酸的污染,不能直接用于PCR扩增。而方法 2虽然提取的DNA得率相对较低,但纯度最高,两种土样的A260/A280值分别为1.854和1.844,A260/A230值分别为1.857和1.663,说明蛋白质和腐殖酸的去除较彻底,并且该方法是在商品化的试剂盒基础上进行的改进,操作简单、省时,重复性好。这些研究结果证明方法 2即改良的E.Z.N.A.Soil DNA Kit提取方法,提取到的DNA纯度最高,是较为理想的混有生物炭土壤的DNA提取方法,可以满足构建宏基因组文库的要求。     

沙枣植物基因组DNA提取方法的比较

为深入研究沙枣的药用价值,对比沙枣植物基因组DNA提取的方法,选取SDS法、CTAB法、酚—氯仿法以及试剂盒法4种提取方法,通过琼脂糖凝胶电泳对所提取DNA进行完整性检测,通过紫外分光光度法对DNA进行纯度、浓度检测。结果显示,试剂盒法提取DNA的A260/A280值嫩叶为1.83,标本叶为1.81,A260/A230值嫩叶为2.31,标本叶为2.26。研究认为,从纯度与完整度观察分析,试剂盒法为最优方法,经济有效,可在CTAB方法上进行改进。     

珠子参新鲜和干燥块茎DNA提取方法的比较研究

为探索提取新鲜和干燥珠子参根茎基因组DNA的最佳方法,分别采用CTAB法、改良CTAB法、改良SDS法和高盐低pH法分别提取新鲜和干燥的珠子参根茎DNA后,采用紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳和ISSR-PCR扩增检测DNA质量。结果表明,采用4种方法均可从珠子参根茎中提取出DNA,但提取效果差别较大。CTAB法提取的新鲜根茎DNA浓度最大为487.52 ng·μL~(-1),高盐低pH法提取的干燥根茎DNA浓度最低为92.63 ng·μL~(-1);改良CTAB法提取的DNA其A260/280值为1.92和1.76,其他方法提取的DNA其A260/280值均小于1.8。从新鲜根茎提取的DNA浓度高,纯度好,质量优于干燥根茎提取的DNA;对于干燥根茎采用改良CTAB法提取DNA效果最好,提取的DNA可用于后续ISSR-PCR实验。     

苹果黑星病菌DNA提取方法研究

采用CTAB法、SDS法、Parker法及改进的SDS法提取苹果黑星病菌的DNA,经紫外分光光度计测定,改进SDS法提取的DNA得率较其他3种方法高,约为Parker法的2倍。改进SDS法提取的DNAA260nm/A280nm值为1.700～1.900,DNA纯度较高,而其他3种方法提取的DNAA260nm/A280nm值均高于1.900,DNA中所含RNA的量较高。4种方法提取的DNA在230nm波长处的吸收值分别为0.658,0.257,0.926和0.208,说明DNA不同程度地被酚类物质所污染,但改进的SDS法提取的DNA受污染程度最小。     

狗牙根基因组DNA提取方法的比较

以狗牙根的嫩叶为材料,在传统CTAB法的基础上加以改良,建立了狗牙根基因组DNA的CTAB提取方法.得到的DNA经核酸蛋白质分析仪测得A_(260)/A_(280)值处于1.69～2.02之间、A_(260)/A_(230)集中处于1.82～2.08之间,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品具有一条明亮主带并无拖尾现象,经ISSR-PCR检测出现清晰稳定的条带,说明改良CTAB法提取得到的DNA完整性好,纯度高,适用于分子标记等分子生物学的研究.     

保存温度与时间对动物组织DNA提取质量的影响

［目的］研究不同保存温度、不同保存时间对蟹肉总DNA提取质量的影响，为同类研究提供借鉴。［方法］将样品在4、-20和-40℃下分别保存4、8和15 d，提取螯足内肌肉总DNA，测定总DNA的紫外吸收值，并设计引物扩增其mtDNA ND6基因，采用琼脂糖凝胶电泳分别对提取的总DNA及PCR结果进行检测。［结果］由鲜活蟹组织提取的DNA A260与A280的比值因蛋白污染而较低；15 d内4 ℃与-40 ℃条件下保存的DNA提取率和条带检出率均无明显差异，而-20 ℃下的保存效果受时间影响明显。各处理组合总DNA的 A260与A280比值在1.79～2.00；利用上述DNA作模板，扩增其特定基因mtDNA ND6均可获得预期长度的PCR条带。［结论］短期保存组织宜选择4 ℃，若需较长时间保存时则宜选择-40 ℃以下的低温。     

部分枣属植物硅胶干燥叶片DNA提取方法的比较

以硅胶干燥15 D和半年的3种野生枣属植物叶片为试材,分别采用简易CTAB法、高盐沉淀法和高盐低PH法3种方法提取基因组总DNA,通过A260/A280、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增分析对提取的基因组DNA进行了鉴定。半年内不同保存时期的材料对于DNA提取没有明显差异;高盐沉淀法所得DNA纯度最高。     

4种旱地耕作方法下不同覆盖形式对玉米产量的影响

秋深耕+秋施肥+春免耕(A1)、秋浅耕+秋施肥+春免耕(A2)两种耕作方法明显优于其他耕作方法,每公顷增产玉米1009.5～1182.0kg;玉米整秆覆盖(B2)、玉米碎秆覆盖(B3)、地膜覆盖(B1)3种覆盖之间无显著差异,但都比不覆盖(B4)显著增产,每公顷增产玉米1031.7～1281.7kg。16个处理中,A1B3(秋深耕+秋施肥+春免耕+玉米碎秆覆盖)、A1B2(秋深耕+秋施肥+春免耕+玉米整秆覆盖)两处理的玉米产量最高,公顷产量达6508.5和6381.0kg,是干旱地区可选择的保墒蓄水增产耕作栽培形式。     

A_1,A_2型高粱雄性不育性核质互作遗传方式研究

用A1,A2不育系与相应的恢复系杂交,再用A1,A2不育系、保持系与A1,A2杂交种交叉杂交,对获得的F1,F2,BC1F1,BC1F2群体进行了育性遗传分析。结果表明,A1,A2雄性不育性均由两对基因控制,但A1,A2基因互不等位。A1雄性不育系的完整遗传模式为S1N2(ms1ms1ms1'ms1'ms2ms2ms2'ms2'),相应的保持系基因型为N1N2(ms1ms1ms1'ms1'ms2ms2ms2'ms2'),A2雄性不育系的遗传模式为N1S2(MS1MS1ms2ms2ms2'ms2'),相应的保持系基因型为N1N2(MS1MS1ms2ms2ms2'ms2')。A1,A2相应的恢复系核基因型各有6种,其表达方式有明确的对应性,在相应的不育位点,只要有其中一对就可实现对不育系的恢复。分析认为,高粱细胞核、细胞质内均有多种育性基因存在,但是细胞质内的不育基因和细胞核内的不育基因有些是有关系的,有些则是没有关系的,保养有细胞质和细胞核同时具备同样性质的不育基因时,不育特性才能表达,如有一方有可育基因存在,则表现可育,呈对应互作关系。     

高粱A_3类型CMS利用的探讨

高粱A3类型细胞质雄性不育系可用于A1,A2保持系选育的测验种。A3类型高粱杂交草已应用生产。就高粱A3类型细胞质雄性不育系的利用问题进行了探讨。     

基因活化剂对甘薯蒸腾速率和水分利用率的影响

基因活化剂使用浓度(A)设3个水平:375×(A1),750×(A2),1 500×(A3)稀释液;使用时间(B)设4个水平:浸渍种苗基部1 h(B1)和1次(B2),2次(B3),3次(B4)叶面追肥。第3次追肥1个月后测定各处理的光合速率和蒸腾速率,计算水分利用率。结果表明:蒸腾速率A1比对照低1.36%,A2和A3比对照分别高18.10%和16.93%,水分利用率A1,A2和A3分别比对照提高28.30%,8.47%和5.94%;蒸腾速率B1,B2,B3和B4分别比对照提高13.84%,5.23%,11.27%和14.55%,水分利用率分别比对照提高9.85%,21.64%,11.19%和14.27%,与对照差异均达显著水平(P<0.05)。A1B2为最佳水平组合,蒸腾速率比对照降低9.79%,水分利用率比对照提高49.45%。即用375倍的基因活化剂浸渍种苗基部1 h再追肥1次,可显著降低紫色甘薯的蒸腾速率和提高其水分利用率。     

两个二倍体与一个四倍体人工合成三元新棉种

为了将野生比克氏棉的种子无腺体(无棉毒素),而植株上有腺体的珍贵特性,转育到栽培四倍体棉种上。先用栽培二倍体亚州棉(A_2A_2)与二倍体比克氏棉(G_1G_1)杂交成异源二倍体A_2G_1。将杂种染色体加倍,合成异源四倍体A_2A_2G_1G_1。再与栽培四倍体陆地棉杂交,组成三交种合成异源四倍体。并分析了三种杂种的性状遗传学及细胞学。为培育棉、油、蛋白质三位一体的抗虫新棉种,提供了种质。