番石榴叶水提取物抗对虾白斑综合征 病毒有效成分初探

利用有机萃取技术对番石榴叶水提取物进行了初步分离,得到石油醚相（S）、乙酸乙酯相（Y）,正丁醇相（Z）和水相（W）4个组分。然后通过人工感染试验,确定了各组分抗对虾白斑综合征病毒（WSSV）的效果,并通过体外试验研究了番石榴叶水提取物及各组分对WSSV的影响。人工感染的结果显示：用乙酸乙酯相与正丁醇相这两种组分分别处理WSSV后,对虾在用WSSV人工感染后未出现死亡,而用石油醚组分处理WSSV后,对虾在用WSSV人工感染后第5d开始出现死亡,第12d全部死亡,表明番石榴叶中影响WSSV致病性的有效成分的极性较强,与乙酸乙酯和正丁醇相近。用番石榴叶水提取液及其各萃取组分体外处理WSSV不同时间后,试验组和对照组中的病毒拷贝数随时间推移略有降低,但在第120h结束时,各组中的病毒拷贝数还维持在较高水平;之后,将WSSV核酸暴露,并在体外用番石榴叶水提取物及其各萃取组分处理,荧光定量PCR结果显示：随着孵育时间的延长,各组病毒基因拷贝数无显著性变化。     

番石榴叶与果止泻作用的比较研究

为比较研究番石榴叶与果的止泻作用,以小白鼠为研究对象,观察番石榴叶与果不同浓度提取物对硫酸镁致泻小白鼠的止泻作用,筛选出番石榴叶与果提取液止泻作用最有效的浓度。结果表明:与空白组相比,同浓度番石榴叶提取液与番石榴果提取液两者的潜伏时间和稀便率均有显著差异(P0.05),且番石榴叶A组(2 g/mL)潜伏时间为(136±6.17)min,稀便率为(62.97±11.56)%,番石榴果A组(2 g/mL)潜伏时间为(127±5.73)min,稀便率为(65.65±13.57)%,番石榴叶提取液止泻作用明显优于番石榴果提取液。这表明同剂量番石榴叶提取液对硫酸镁致泻小白鼠的止泻作用明显优于番石榴果提取液,其止泻强弱与提取液的浓度有一定关系,随提取液浓度的增大,止泻效果逐渐增大,为下一步研发新型的止泻药物提供理论基础。另外,番石榴叶提取物对硫酸镁致泻小白鼠的止泻效果很好,成为了新型止泻药的重要潜在来源。     

罗勒水提取物涂膜对珍珠番石榴耐藏性的影响

[目的]探究罗勒水提取物涂膜对珍珠番石榴耐藏性的影响,筛选出适合珍珠番石榴采后保鲜的罗勒水提取物最佳浓度,为番石榴的采后贮藏保鲜提供技术参考.[方法]以玉米粉、地瓜粉和罗勒水提取物制成3个浓度(2.5%、5.0%和7.5%)的涂膜液,分别浸泡番石榴果实3 min,以蒸馏水浸泡果实3 min为对照(CK),各处理果实置于室温条件(20~25 ℃、相对湿度40%~60%)下贮藏,每3d测定1次果实的生理指标、贮藏品质及果皮叶绿素,并统计好果率和失重率.[结果]2.5%、5.0%和7.5%的罗勒水提取物涂膜对番石榴采后贮藏期间的呼吸强度、质膜相对透性和过氧化物酶(POD)活性均有明显抑制作用,同时提高过氧化氢酶(CAT)活性,有效保持番石榴外观品质,减缓水分含量下降,以5.0%罗勒水提取物涂膜的保鲜效果最佳.番石榴果实贮藏至第12d时,CK果实的可溶性固形物(TSS)、维生素C(Vc)和蛋白质含量分别下降38.24%、34.57%和28.19%,好果率仅为52.00%,失重率达26.10%;而5.0%罗勒水提取物涂膜处理果实的TSS、Vc和蛋白质含量仅分别下降15.69%、16.05%和5.69%,好果率为88.00%,失重率为9.25%,比CK延长贮藏时间6d.[结论]罗勒水提取物涂膜能有效保持番石榴果实原有的风味品质,延长贮藏时间,且以5.0%罗勒水提取物涂膜的保鲜效果最佳.     

番石榴叶中番石榴苷、广寄生苷的提取及其大鼠脂肪细胞模型降糖活性研究

以番石榴叶为原料,番石榴叶中番石榴苷、广寄生苷总含量为指标,在单因素试验的基础上,采用响应面法优化番石榴苷、广寄生苷的提取工艺,同时测定不同月份番石榴叶中番石榴苷、广寄生苷总含量,确定最佳采集月份,并研究此月份的提取物对大鼠脂肪细胞的降糖活性及急性毒性.结果表明,最佳提取工艺为时间81 min、液料比11∶1、乙醇体积分数64.6％,此条件下番石榴苷、广寄生苷总含量可达3.40(±0.02)mg/g,重复试验表明该最佳工艺条件稳定可行.番石榴叶中番石榴苷、广寄生苷含量随季节变化较大,7月份的含量最高,达到6.74 (±0.13) mg/g,因此可选择7月份作为最佳采集月份,且1.6 mg/mL的7月份番石榴叶提取物促脂肪细胞摄取葡萄糖达1.66(±0.23) mmol/L,相比8 U/mL胰岛素具有更好效果.急性毒性试验结果表明,小鼠番石榴叶提取物最大耐受量大于10 g/kg.     

墨旱莲叶水提取物止血活性初探

[目的]探讨墨旱莲叶水提取物的止血和促凝血活性,为中草药在止血方面的应用提供依据。[方法]将不同剂量的墨旱莲提取物溶液与抗凝兔血混合,测定凝血时间。[结果]墨旱莲叶提取物为0.5%的最适浓度时具有最强促凝血活性,凝血时间为16 s,凝血时间缩短率为99.6%。[结论]墨旱莲叶水提取物有显著的止血和促凝血活性,具有较高的开发利用价值。     

18种中草药对大肠杆菌抑菌效果的研究

[目的]研究鹿蹄草(WINTERGREEN)、功劳叶(CHINESE HOLLY LEAF)、金樱子(CHEROKEE ROSE FRUIT)和大黄(RHEUMOFFICINALE)等18种中草药提取物的抑菌作用。[方法]采用水煎法提取中草药的有效成分,以大肠杆菌作为供试菌,利用滤纸片法测定中草药提取物的抑菌作用,并用2倍稀释法测定抑菌效果最好的4种中草药的最小抑菌浓度。[结果]18种中草药中有15种对大肠杆菌有抑制作用;其中鹿蹄草的最小抑菌浓度为31.25 mg/ml,功劳叶、金樱子和大黄的最小抑菌浓度均为62.50 mg/ml。[结论]鹿蹄草对大肠杆菌具有较好的抑制效果。     

VP28蛋白鸡源抗WSSV卵黄抗体的制备及性能分析

为了研制鸡源抗对虾白斑综合征病毒（WSSV）卵黄抗体（IgY）,利用WSSV毒株及其衣壳蛋白VP28制备成2种不同的疫苗,并分别免疫接种健康蛋鸡群,使鸡群产生不同的IgY,经病毒中和试验证实,2种IgY均有明显的抗WSSV效果,其中WSSV粗提液1∶1000倍稀释时,WSSV灭活苗免疫蛋鸡产生的IgY对南美白对虾的保护率为61.7%,重组VP28疫苗免疫蛋鸡产生的IgY保护率为48.3%;而WSSV粗提液1∶10000倍稀释时,WSSV灭活苗免疫蛋鸡产生的IgY保护率为85.0%,重组VP28疫苗免疫蛋鸡产生的IgY保护率为75.0%.     

亚硝基氮胁迫下WSSV对凡纳滨对虾致病性研究

为评价养殖水环境中亚硝基氮(NO_2~--N)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)危害性,开展NO_2~--N胁迫对凡纳滨对虾感染白斑综合征病毒(WSSV)后的死亡率、WSSV在患病对虾体内增殖速率和对虾主要免疫相关酶活性影响研究。试验设置NO_2~--N胁迫浓度为6.68 mg·L~(-1),分别注射10~(-4)和10~(-5)稀释度的WSSV提取液,结果显示,胁迫下感染10-4WSSV的凡纳滨对虾144 h死亡率达90.00%,显著高于无胁迫组(60.00%),相同试验条件下高浓度病毒感染组死亡率高于低浓度组。对虾鳃组织WSSV荧光定量PCR检测结果显示,NO_2~--N胁迫下凡纳滨对虾鳃组织内WSSV增殖加快,感染48 h后10-4攻毒浓度胁迫组病毒量是无胁迫组1.33倍,72 h时病毒量达到无胁迫组2.00倍。此外,免疫相关酶活性结果显示,NO_2~--N浓度突变导致对虾血清中酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性先升后降。由此可见,NO_2~--N胁迫会加快WSSV在患病凡纳滨对虾体内增殖,导致高死亡率,这可能是胁迫造成对虾免疫相关酶活性降低和抗病原感染能力下降所致。     

番石榴叶有机溶剂提取物清除过氧自由基能力及抑制酪氨酸酶活力研究

[目的]研究番石榴叶不同有机溶剂提取物对自由基清除能力以及对酪氨酸酶活力的抑制作用,可为番石榴叶在抗氧化抗衰老方面的应用奠定基础。[方法]采用乙醇、乙酸乙酯、石油醚和丙酮4种不同有机溶剂并采取超声、浸提及萃取的方法提取番石榴叶粗提物。采用邻苯三酚自氧化法和L-DOPA法分别测定粗提物对过氧自由基的清除作用和酪氨酸酶活性的抑制作用。[结果]乙醇、丙酮和乙酸乙酯番石榴叶提取物清除过氧自由基的IC_(50)值分别为47.1、35.5和21.2μg/mL;而丙酮提取物和乙酸乙酯提取物抑制酪氨酸酶活性的IC_(50)值分别为165.3和115.9μg/mL。[结论]番石榴叶提取物具有开发作为抗氧化抗衰老药物以及酪氨酸酶抑制剂的应用前景。     

7种中草药抑菌活性研究

采用生长速率法测定了7种中草药乙醇提取物对5种病原菌的离体抑菌活性.测定结果表明,在供试干样0.1 g/mL浓度下,鱼腥草、龙牙草、半边莲、丹参具有较好的抑菌活性,对多种供试菌种的抑制率达到100％;腺梗豨莶茎和叶的提取物的抑菌作用较差;接骨草茎和叶的提取物抑菌效果最差,对供试5种病菌的抑制作用均低于70％.     

白斑综合征病毒感染梭子蟹试验及组织病理学观察

利用对虾白斑综合征病毒WSSV，采用注射和投喂方式，对养殖三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）进行人工感染，以确定WSSV对养殖梭子蟹的易感性和可能存在的潜在危害。结果发现，在水温24—25℃条件下，病毒注射感染组全部发病，10-16d全部死亡；投喂组死亡率33％；对照组未出现死亡。采用荧光定量PCR对各试验组梭子蟹的肌肉和肝胰腺混合物进行WSSV检测，发现注射感染组阳性检出率为100％，均为强阳性；投喂组阳性检出率为50％；对照组的阳性检出率均为O。光镜下可观察到感染梭子蟹的肝胰腺、肌肉组织、鳃组织的靶细胞核肿大、变形，并出现以坏死为主的变质性病变；电镜下病变组织细胞中可见形态、大小与WSSV一致的病毒粒子。由此表明：对虾WSSV可以感染三疣梭子蟹，并表现出明显的病理症状，感染与病毒的数量以及梭子蟹自身的体质、环境条件密切相关。     

对虾白斑综合征病毒(WSSV)致病相关基因研究进展

介绍了最近几年白斑综合征病毒WSSV致病相关基因的研究进展,包括病毒囊膜蛋白基因、核衣壳蛋白基因、病毒复制过程的关键酶基因、细胞因子受体基因、潜伏相关基因和抑制宿主细胞凋亡机制的基因等。     

白斑综合征病毒感染梭子蟹试验及组织病理学观察

利用对虾白斑综合征病毒WSSV，采用注射和投喂方式，对养殖三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）进行人工感染，以确定WSSV对养殖梭子蟹的易感性和可能存在的潜在危害。结果发现，在水温24—25℃条件下，病毒注射感染组全部发病，10-16d全部死亡；投喂组死亡率33％；对照组未出现死亡。采用荧光定量PCR对各试验组梭子蟹的肌肉和肝胰腺混合物进行WSSV检测，发现注射感染组阳性检出率为100％，均为强阳性；投喂组阳性检出率为50％；对照组的阳性检出率均为O。光镜下可观察到感染梭子蟹的肝胰腺、肌肉组织、鳃组织的靶细胞核肿大、变形，并出现以坏死为主的变质性病变；电镜下病变组织细胞中可见形态、大小与WSSV一致的病毒粒子。由此表明：对虾WSSV可以感染三疣梭子蟹，并表现出明显的病理症状，感染与病毒的数量以及梭子蟹自身的体质、环境条件密切相关。     

WSSV单抗的制备及其在红螯螯虾病毒病检测中的应用

将提纯的感染红螯螯虾的WSSV,免疫BALB／c小鼠,三次免疫后取其脾细胞与SP2／0融合．间接ELISA筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,共获得7株针对WSSV的特异性单抗,分别命名为E2、C2、E3、G3、C4、D5以及F10．细胞上清ELISA效价为1：1600—1：6400．抗体亚类鉴定结果表明：E2、G3、C4属于IgG1,C2、D5、F10属于IgG3,E3属于IgG2a亚类;单抗热稳定性试验表明7株单抗均是热稳定的．选取单抗G3和F10进行病毒中和试验,结果表明：在适宜的抗原浓度下,两株单抗均有较好的中和能力．选取单抗G3作为一抗建立了间接ELISA方法,通过对人工感染红螯螯虾WSSV的测定,初步证实该单抗可用于WSSV的检测．     

白斑综合征病毒在养殖克氏原螯虾中感染流行研究

2007年,在从南京采集的患病养殖克氏原螯虾样品超薄切片中发现大量类似对虾白斑综合征病毒(WSSV)颗粒,结合初步的流行病学调查、人工回感实验及PCR检测结果确定导致此次养殖克氏原螯虾大规模死亡的病原为WSSV。利用建立的特异性引物PCR方法,在江苏省内扬州邵伯湖、淮安白马湖、盱眙、南京禄口等多处养殖克氏原螯虾体内均检测到该病毒,且在鳃、心肌、神经、肝脏、肠道、肌肉等多处组织中被检出;未检测到另外两种常见对虾病毒:桃拉病毒(TSV)和传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)。     

白斑综合征病毒（WSSV）和血卵涡鞕虫多重PCR检测方法的建立

根据对虾白斑综合征病毒（WSSV）和血卵涡鞕虫在GenBank中已发表的基因序列分别设计2对引物,建立了一种同时检测WSSV和血卵涡鞕虫的多重PCR方法,即通过一次PCR反应,同时扩增WSSV和血卵涡鞕虫2种病原的核酸。应用该方法分别对已知WSSV和血卵涡鞕虫阳性的样品进行PCR扩增,分别扩增出了2条特异性带———467 bp（WSSV）和168 bp（血卵涡鞕虫）,与实验设计相符,且与常规PCR检测结果一致。特异性实验结果也表明,该方法对WSSV和血卵涡鞕虫的检测均具很好的特异性,而对三疣梭子蟹其它常见病原、梭子蟹DNA样本的PCR扩增结果均为阴性。10份临床样品检测结果表明该检测结果与常规PCR检测结果符合率达到100%,说明所建立的多重PCR方法可以用于三疣梭子蟹2种病原的快速检测和鉴别诊断,对养殖三疣梭子蟹的疾病及时防控具有重要意义。     

番石榴生殖生长期土壤和叶片氮磷钾含量变化特征

【目的】研究番石榴生殖生长期土壤和叶片中主要养分的变化特征,为番石榴施肥管理提供理论依据。【方法】测定红香1号、彩红和珍珠3个番石榴品种果园土壤和叶片的氮磷钾含量,利用相关分析和方差分解分析土壤养分及叶片营养间的关系。【结果】红香1号、彩红和珍珠3个番石榴品种生殖生长期的果园土壤pH变化趋势有所差异,其中,彩虹番石榴果...     

中国对虾与日本对虾对白斑综合征病毒耐受力的比较

[目的]比较中国对虾与日本对虾对白斑综合征病毒的耐受力,为WSSV的病害防治提供参考。[方法]在盐度30‰和(24±2)℃下,将体长约8~9 cm的中国对虾(Fenneropenaeus chinensi)与日本对虾(Marsupenaeus japonicus)停食48 h后,投喂感染白斑综合征病毒(WSSV)的死亡对虾,观察其摄食及感染情况,比较这2种虾的对WSSV耐受力。[结果]中国对虾的平均死亡率为63.33%,发病高峰期为4~5 d,而日本对虾的平均死亡率为54.44%,发病高峰期为5~7 d,中国对虾的发病率于日本对虾,发病时间也较日本对虾早。[结论]中国对虾对WSSV的耐受能力要强于日本对虾。