病毒 REV 与 ALV-J 经鸡胚垂直传播共感染对雏鸡的协同致病性

【目的】J 亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）和禽网状内皮组织增殖病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）均可通过鸡胚垂直传播,且两者在鸡胚中的自然共感染已有报道,但两者经鸡胚共感染的致病性未有研究。建立 ALV-J 与 REV 垂直传播共感染的实验动物模型,研究 ALV-J 与 REV垂直传播共感染的致病作用及其对禽白血病净化检测的影响,以期为推动多病原协同净化提供参考。【方法】通过鸡胚接种方式构建分别携带 ALV-J、REV 及两者共感染的雏鸡感染模型,通过孵化率、死亡率、体重、胎粪 ALV-p27 抗原检出率、病毒血症阳性率等指标分析 REV 与 ALV-J 在垂直传播中共感染的致病性。【结果】ALV-J+REV 共感染组鸡胚孵化率为 65.71%,低于单感染组和空白组（CK）;共感染组死亡率高于单感染组和CK。7 日龄时 CK、ALV-J 组、REV 组、ALV-J+REV 组雏鸡平均体重分别为 59.25、50.83、49.67、43.78 g,共感染加重了对雏鸡生长的抑制。ALV 血浆病毒分离结果显示,ALV-J 组、ALV-J+REV 组阳性率在各日龄均为100%,CK 均为 0%。采集肛拭子检测 ALV-p27 抗原结果显示,ALV-J+REV 组雏鸡阳性率在 1、3、7、14 日龄分别为 91.30%、94.12%、90.90% 和 100%,肛拭子的 ALV-J p27 阳性检出率低于血浆病毒分离。比较免疫器官发育指数结果显示,ALV-J 和 REV 单感染均导致雏鸡免疫器官萎缩,共感染加重免疫器官萎缩程度。免疫器官病毒载量显示,REV 与 ALV-J 共感染促进了 ALV-J 在免疫器官中的增殖,同时 ALV-J 也促进了 REV 在免疫器官中的增殖。【结论】相对于 ALV-J 和 REV 单感染,两者共感染降低了鸡胚孵化率、增加了雏鸡死亡率、增强了对雏鸡生长的抑制作用,对诱导胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官萎缩的影响更加显著,且两者在共感染过程中对彼此复制均有促进作用。     

地方品种皖南黄肉种鸡ALV-J与REV的共感染 及其分子变异分析

 【目的】探讨地方品种皖南黄肉种鸡群中禽白血病病毒（ALV）与禽网状内皮增生病病毒（REV）的感染状态,同时对J亚型ALV（ALV-J）分离株的囊膜糖蛋白基因（env）和非编码区3′UTR序列进行分子变异分析,并对近十年的分离株非保守序列区段进行统计比较,探讨ALV-J分子变异趋势。【方法】取7只300日龄皖南黄肿瘤病鸡分别进行病理组织学观察、IFA检测肝脏组织切片后激光共聚焦观察、细胞培养后的IFA以及PCR方法检测。【结果】7只皖南黄肉种鸡有6只同时感染ALV-J与REV,而且ALV-J和REV已经共感染同一个肝细胞。取2个ALV-J分离株进行env基因与非编码区3′UTR扩增与序列分析,两分离株的env全长均为1 704 bp,3′UTR全长均为400 bp,3′UTR区段rTM和E元件同发生双缺失;3′UTR-E元件与近十年国内来自白羽肉鸡的ALV-J分离株比较,基因缺失表现为共性,但3′UTR-rTM基因缺失呈现多样性;5′LTR作为保守序列较之前所有国内外毒株有11 bp缺失。【结论】研究发现,地方品种皖南黄肉种鸡群存在ALV-J与REV的共感染,且呈现普遍性（6/7）,表明地方品种鸡高肿瘤发生率与ALV-J、REV共感染密切相关;ALV-J的基因缺失主要集中于3′UTR-E与3′UTR-rTM, 3′UTR-E元件基因缺失显示,皖南黄肉种鸡群ALV-J分离株与近十年国内来自白羽肉鸡的ALV-J分离株有共同的来源。     

鸡病防治中网状内皮组织增殖病病毒(REV)的有害作用

本文报道对禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)进行的一些研究,电镜观察表明REV是典型的RNA肿瘤C型病毒,具有“苯环状结构”,动物感染试验表明REV与火鸡疱疹病毒(HVT)之间可产生协同作用来危害鸡群。作者采用了冰冻切片结合荧光抗体或酶标抗体技术来检测组织中的REV抗原,采用间接荧光抗体试验对广东10个鸡场进行了血清学调查,结果表明只有2个鸡场是REV抗体阴性的,其余8个场均呈不同程度的抗体阳性,特别值得提到的是,其中1个场两批鸡因注射不同来源的HVT疫苗而表现出REV抗体阳性率的显著差异,这显示了“HVT疫苗失效”一个很可能的原因是REV污染了HVT疫苗。     

肉种鸡MDV和REV人工共感染的动态病理学与抗原定位研究

 【目的】深入了解MDV与REV人工共感染肉种鸡后疾病的发生、发展状况,为二者临床复杂的混合感染提供确实的鉴别诊断方法和明确的诊断时间。【方法】MDV和REV强毒株人工共感染1日龄肉种鸡,定期剖检,进行病理组织学、细胞凋亡、免疫组化和肿瘤组织的超微结构观察。【结果】肝、胰腺、腺胃、盲肠扁桃体、心肌在感染后1周出现以小淋巴细胞浸润为主的炎症,2～9周时,大部分实质器官出现以幼稚淋巴细胞、大中小淋巴细胞为主的渐进性增生灶,部分增生灶中可见原始网状细胞和马立克氏病细胞;10周后免疫器官实质细胞出现明显的凋亡;免疫组化显示,肝、脾、法氏囊、胸腺等在2周时呈双抗原阳性;电镜下,肝脏肿瘤组织中可见多形态淋巴细胞,核分裂相和细胞凋亡同时存在,同一细胞中可见MDV和REV两种病毒粒子。【结论】MDV与REV共感染对病程起协同和促进作用,发病早,病变明显;免疫酶及荧光方法可用于共感染的早期诊断（2周以前）;而后期（4周以后）可通过病理组织学进行鉴别诊断,两种病毒粒子、马立克氏病细胞、原始网状细胞、多形态和幼稚淋巴细胞可作为诊断依据。     

金针菇菇脚对肉鸡T、B淋巴细胞免疫功能的影响

为探索不同含量金针菇菇脚(Flammulina velutipes stembase,FVS)添加到肉鸡饲粮中对肉鸡生产性能以及T、B淋巴细胞免疫功能的影响,采用1日龄健康AA肉鸡270只,随机分为5组,每组3个重复,每个重复18只。试验分为:对照组(基础日粮);抗生素组(基础日粮+0.05%黄霉素);低剂量组(基础日粮+2%FVS);中剂量组(基础日粮+4%FVS);高剂量组(基础日粮+6%FVS)。试验为期42d,检测指标为:生产性能,免疫器官指数,外周血T、B淋巴细胞增殖率(MTT法测定),血清细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ含量测定(ELISA法测定),血清免疫球蛋白IG-A、IG-G、IG-M效价测定(ELISA法测定)。结果显示:各剂量FVS均能提高肉鸡饲喂前期平均日增重,平均日采食量,降低料肉比,提高肉鸡成活率;2%FVS组21日龄胸腺指数及42日龄法氏囊指数显著高于对照组(P0.05),4%FVS组胸腺指数显著高于对照组(P0.05),6%FVS组在42日龄胸腺指数及脾脏指数均显著高于对照组(P0.05);在第22~28、29~35、36~42日龄,各剂量FVS组T、B细胞增殖率显著高于对照组(P0.05);在第22~28、36~42日龄,各剂量FVS均可显著提高细胞因子IL-2的含量(P0.05);各剂量FVS能显著提高22~28、36~42日龄肉鸡血清免疫球蛋白IG-A效价(P0.05)以及7~14、22~28日龄IG-G效价(P0.05)。表明日粮中添加FVS可提高肉鸡生产性能、免疫器官指数,增强肉鸡的T、B淋巴细胞免疫功能。     

ALV-J相关的鸡急性纤维肉瘤发病模型的建立

【目的】证明纤维肉瘤病料中含有的ALV-J相关病毒能够诱发急性纤维肉瘤。【方法】将含ALV-J相关病毒的病料过滤液经不同部位接种1日龄817肉杂鸡;将该过滤液不同倍数稀释后接种1日龄SPF鸡和817肉杂鸡;将该过滤液接种细胞培养后的上清液接种1日龄817肉杂鸡,连续动态观测30 d。【结果】颈部皮下、胸肌、腹腔3个部位攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%（20/20）、95.2%（20/21）、100%（20/20）。病料过滤液未经稀释接种817肉杂鸡和SPF鸡的肿瘤发生率均为100%（10/10）,10倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为80%（8/10）和100%（10/10）,100倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%（10/10）和80%（8/10）,1 000倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为40%（4/10）和50%（5/10）,更高倍数稀释后攻毒鸡没有肿瘤发生。接种病料的细胞培养上清也能使33.3%（2/6）的鸡只发生肉瘤。病理组织学检测显示：诱发的急性肿瘤系典型的纤维肉瘤。【结论】817肉杂鸡肉瘤病料中含有ALV-J相关的急性致肿瘤病毒,不论是病料过滤液本身还是其接种DF-1细胞培养后的上清液都能在不同品种鸡复制出急性纤维肉瘤,最快在接种后7 d出现,且肿瘤发生的时间、动态和肿瘤发生率与接种量密切相关。     

14株网状内皮组织增生症病毒中国分离株gp90基因的分子特征

[目的]研究十四株网状内皮组织增生症病毒中国分离株gp90基因的分子特征。[方法]对分离于我国不同商品蛋鸡场的14株REV的表面囊膜基因gp90进行了扩增和序列测定。[结果]序列分析表明,这14株REV不同于我国早期分离毒株与亚型3毒株亲缘关系较近。另外发现,这14株REV与美国和我国台湾的流行毒株同源性较高。[结论]本研究对深入研究我国REV的流行和遗传演化意义重大。     

蛋鸡网状内皮组织增生病病毒分离鉴定

山东某鸡场饲养的10000只父母代海兰蛋种鸡于育成前期出现进行性消瘦、生长发育不良等症状;剖检以腺胃肿胀、淋巴器官萎缩为特征,至70日龄发病率达90%;经ELISA方法检测抗体及间接免疫荧光原位病原检测证明该病与网状内皮组织增殖病病毒(REV)感染有关。取7只病鸡肝脏研磨处理后接种鸡胚成纤维细胞(CEF),用REV单抗11B118进行间接免疫荧光检测,结果均呈阳性;根据REV-HA株前病毒基因组DNA env囊膜糖蛋白基因序列设计引物,提取阳性CEF基因组DNA作为模版,PCR扩增后得到438 bp的目的片段;PCR产物测序结果比对显示,该毒株与其他中国野毒株的同源性高于与REV-HA株的同源性。综合诊断判定该病可能与鸡群早期感染致病力较强的REV有关。     

鸡J亚群白血病病毒与网状内皮增殖病病毒混合感染发病机理的研究

通过人工感染建立了ALV—J、REV单独感染和混合感染1日龄肉仔鸡的病理模型。初步研究表明混合感染使试验鸡的生长发育障碍、免疫器官萎缩、对细菌易感性及死亡率等指标显著升高。 动态病理学研究表明：REV感染主要引起骨髓网状细胞及淋巴样细胞弥漫性或灶状浸润,ALV—J感染主要引起骨髓髓系细胞灶状或弥漫性显著增生,混合感染时骨髓病变与REV感染基本一致,但相对较严重,并见ALV—J感染病变。各病毒感染组免疫器官均发生了严重的实质萎缩性病变,病变以混合感染组最重,REV组次之。在某些组织器官ALV—J组见嗜酸性粒细胞样的瘤细胞浸润增生,REV组见网状细胞及淋巴细胞样瘤细胞浸润增生,而混合感染组见以上两种瘤细胞增生。从混合感染组的病变来看,在致病性上ALV—J与REV之间的确存在明显的协同促进作用,导致机体的免疫抑制加重,但混合感染早期尚未发现REV对ALV—J致瘤的促进作用。     

四君子汤及加味四君子汤对商品肉鸡免疫功能的影响

【目的】为开发优质高效的中药免疫增强剂提供参考依据。【方法】选用420只1日龄AA肉鸡,随机分成Ⅰ~Ⅶ7个处理组,每组设3个重复,每重复20只。试验鸡在新城疫Lasota系冻干苗免疫时分别用四君子汤和加味四君子汤煎剂按2.5,5.0,7.5 mL/L 3个添加量兑水自由饮用,连用4 d。于14,28和42日龄分别在鸡翅静脉采血,进行白细胞、淋巴细胞计数,α-醋酸萘酯酶染色(ANAE)和β-微量血凝抑制试验检测各项免疫指标,研究四君子汤及加味四君子汤对商品肉鸡免疫功能的影响。【结果】新城疫疫苗免疫时以2.5 mL/L剂量添加四君子汤或加味四君子汤,在14,28和42日龄均可极显著提高鸡的淋巴细胞数和血液中新城疫的抗体水平(P<0.01);四君子汤以5.0mL/L剂量或加味四君子汤以2.5 mL/L剂量添加均能显著提高白细胞数和T淋巴细胞百分率(P<0.05)。【结论】四君子汤和加味四君子汤均能有效提高鸡的特异性免疫和非特异性免疫水平。     

Influence of REV and ALV-J Co-Infection on Immunologic Function of T Lymphocytes and Histopathology in Broiler Chickens

The aim of present investigation is to study the effect of single- and co-infection with REV and ALV-J on T lymphocytes bioactivities and histopathology in broiler chickens. The bioactivities of blood and spleen T lymphocytes including lymphoproliferation responses, cytotoxicitic responses, and histopathology of spleen were detected in broiler chickens singly- or co-infected with REV and ALV-J at different days post inoculation and the virus expressions in spleen of infected broiler chickens were detected with immunofluorescence assay （IFA）. The results indicated that blood and spleen T lymphocytes proliferation responses and cytotoxicity in broilers infected with REV or/and ALV-J were inhibited in the whole observed period compared with controls. In the co-infected chickens they were highly inhibited than in the single-infected. The histopathology of spleen in infected chickens at 17 and 37 d post inoculation （dpi） indicated that cell interium increased, the numbers of lymphocytes decreased, and the regrowth were destroyed or decreased, especially more significantly at 17 than at 37 dpi. The different numbers of virus were detected in spleen lymphocytes in REV- infected and/or ALV-J-infected chickens. In the spleen of co-infected chicken, both REV and ALV-J were detected and the total numbers of viruses were more than in chickens singly-infected with REV or ALV-J. Thus, the co-effect of REV and ALV-J caused more immunosuppression on T lymphocytes bioactivities in broiler chickens than single-effect of ALV-J or REV, which contributed to the sever histopathology and the product of tumor cells. This study will be helpful for understanding the effect of co-infection with many viruses and control them in poultry.     

纳米羟基磷灰石的制备及其在肉鸡饲养中的应用

为了降低肉鸡养殖污水中总磷含量,本文利用湿法制备了一种纳米尺寸的羟基磷灰石,并应用其替代了原有饲料中的添加剂—磷酸氢钙。实验中分别对该材料进行了X射线衍射、透射电镜和能谱测试。测试结果显示,制备的该类材料为纳米尺寸的羟基磷灰石。此外,本工作通过对肉鸡喂养含有两种添加剂的饲料的饲养结果及排泄物总磷含量进行测试,实验结果表明:应用含有纳米羟基磷灰石的饲料饲养肉鸡可以保证肉鸡的正常生长及按期出栏,同时大大降低了排泄物中总磷的含量。通过上述实验结果说明应用纳米尺寸的羟基磷灰石替代饲料中原有的添加剂磷酸氢钙后,可以减轻肉鸡养殖排泄物对水体的污染。     

环境温度和日粮能量水平对肉鸡腹水综合征发生的影响

以不同的环境温度（低温和常温）与日粮能量水平（高能量和常规能量）处理商品代肉仔鸡,以探讨这2种因素对肉鸡腹水综合征发生的影响。所用监测指标为学术界公认的反映腹水综合征发生发展的3个参数,即红细胞压积（PCV）,腹水心脏指数（AHI）和腹水阳性率。结果表明环境低温处理组,其PCV,AHI和腹水检出率显著高于常温处理组;而日粮的能量水平对这3项指标无显著影响。本试验说明寒冷因子是肉鸡腹水综合征的重要诱发因素,而口粮能量水平在本试验条件下不影响肉鸡腹水综合征的发生发展过程。     

稻草菌糠对AA肉鸡生长性能及内分泌代谢的影响(英文)

通过选取1日龄192羽健康AA肉鸡(公母各半),随机分为4组:对照组(饲喂基础日粮)、试验1组、试验2组和试验3组,各试验组分别在基础日粮中添加0.5%、1.0%和2.0%的稻草菌糠,研究不同添加剂量对AA肉鸡生长性能和内分泌代谢的影响,并确定最适添加比例.结果表明:①与对照组相比,49日龄时,试验1组体增重提高6.24%(P0.05),采食量提高6.74%(P0.01);②血清中T3、T4、胰岛素水平试验组不同程度的显著性高于对照组.说明在基础日粮中添加0.5%的稻草菌糠能有效地提高AA肉鸡的生长性能和调节其内分泌代谢.     

The Change of Plasma very Low Density Lipoprotein Concentration Pre-orPost-Feeding and in Conrrelation with Body Fatness Traits in Broiler Chickens

Blood samples were taken from birds,from a commercial line of broiler chicken,being in a fully fed state and in fasting state for 2,4,6 hours respectively at 49d of age and plasma very low density lipoprotein (VLDL) concentration was measured with turbidimetric assay.The experiment results showed that the variation coefficients of plasma VLDL concentration mersured at four different times were 58.11%,74.39%,69.70%,47.83%,respectively for male broilers,and 41.82%,60.87%,59.26%,50.0% for female broilers respectively.Plasma VLDL concentration decreased with the fasting time.There was a significant positive phenotypic correlation between abdominal fat weight,percentage of abdominal fat and plasma VLDL concentration for the birds being in fully feeding state,and the correlation decreased or no longer existed for the bired being in fasting state.The conclusion was that for practically application of plasma VLDL content selected in broiler chicken breeding,blood samples should be collected from birds being in feeding state.     

ALV-J人工感染鸡病毒血症和抗体反应动态

 【目的】了解J亚群白血病病毒（ALV-J）感染鸡后抗体反应和带毒排毒的规律,以便为制定鸡群中 ALV-J感染的预防控制和净化措施提供可靠的流行病学依据。【方法】1日龄和49日龄SPF鸡分别通过注射、口服和接触感染ALV-J,对各感染组的病毒血症、泄殖腔排毒及抗体反应进行动态检测。【结果】不同日龄感染ALV-J后的病毒血症和抗体的动态有很大差异。1日龄SPF鸡注射感染ALV-J后,自2周起开始可检出泄殖腔p27抗原和病毒血症。注射感染组有71%（5/7）鸡在26周内持续带毒排毒,其中有3只鸡在感染后45周仍带毒排毒。其中一只鸡在16周时产生一过性抗体,另两只鸡完全没有抗体。口服感染组仅11%（1/9）鸡呈持续带毒排毒,44%（4/9)鸡仅呈短暂性带毒排毒,且自第8周起即可检测到较高的抗体水平。同笼接触组既不带毒排毒,也无抗体水平,表明未发生传染。49日龄SPF鸡即使注射攻毒后,在19周内的5次检测中,p27抗原和病毒血症均为阴性。攻毒后1周开始出现抗体反应并维持一段时间。49日龄SPF鸡经口服和接触感染,病毒血症和泄殖腔p27均为阴性,也无抗体反应。【结论】1日龄SPF鸡感染ALV-J很容易发生免疫耐受,感染鸡持续带毒排毒而不产生抗体;49日龄SPF鸡感染后,1周可产生高水平的抗体,但不带毒排毒。不同接种方式对ALV-J感染的动态有很大影响,注射感染诱发的病毒血症和耐受性病毒血症显著高于口服感染。     

慢性湿度应激对肉仔鸡生产性能及血液生理生化指标的影响

为研究慢性湿度应激对肉仔鸡生产性能和血液生理生化指标的影响,选择生长均匀的21日龄健康A A 雄性肉仔鸡144只,随机分成3个处理,即对照（相对湿度60％）、处理1（相对湿度35％）、处理2（相对湿度85％）。试验在智能人工气候舱内进行,试验期为3周。42日龄时,测定肉仔鸡生产性能及血液生化指标。试验结果显示：与对照组相比,高湿度（85％）条件下,试验末鸡体质量、日采食量和日增体质量显著降低,料重比降低,肉仔鸡血清乳酸脱氢酶活性和谷草转氨酶活性显著升高;低湿度（35％）下,肉仔鸡生产性能降低,肉仔鸡血清谷草转氨酶活性显著升高;处理1和处理2中,肉仔鸡血清钾离子含量降低,磷、氯离子含量升高。     

高钴负荷对肉仔鸡血液粘度的影响及其与肉鸡腹水综合征发生发展的关系

300只AA肉仔鸡平均分成两组,一组为对照组,另一组为高钴负荷组（从5日龄起饮含钴80mg／L的水）。于5,30和45日龄每组随机抽取20只鸡,分别检测红细胞压积（PCV）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白浓度（HB）、全血比粘度（BRV）和腹水心脏指数（AHI）;45日龄时扑杀所有试验鸡,观察腹水综合征发生情况。结果为：（1）高钴负荷鸡在30和45日龄时其PCV,RBC和HB显著高于对照鸡（P＜0．05）;（2）30和45日龄时高钴负荷鸡的BRV极显著高于对照鸡（P＜0．01）;（3）30和45日龄时高钴负荷鸡的AHI显著大于对照鸡（P＜0．05）,45日龄时高钴负荷鸡的腹水检出率倍增于对照鸡。本试验表明高钴负荷可诱发肉仔鸡红细胞增生,进而使血液粘度升高,最终导致右心肥大－腹水综合征。     

(冷应激对伊褐红公雏鸡外周血淋巴细胞数目变化的影响

本实验采用80只5日龄雄性伊褐红雏鸡进行急性(24 h以内)、慢性冷应激(3 d ,10 d)实验(比常温低8 ℃),通过脂酶染色法观察外周血T淋巴细胞数目的变化和甲苯胺蓝改良染色法观察法氏囊中肥大细胞数目的变化。结果表明:急性冷应激期间,T细胞数目明显减少(P<0.01),在应激12 h后,细胞数量最低(0.30±0.04 个/视野),应激24 h后,淋巴细胞又有所升高,但还是明显低于对照组。 淋巴细胞总数明显升高(P<0.01),在应激24 h后数值最高(1.29±0.08个/视野);冷应激3 d后,T细胞减少不明显,淋巴细胞总数明显增加。冷应激10 d后淋巴细胞数目极显著减少(1.12±0.12个/视野对1.65±0.09个/视野,P<0.001)、T淋巴细胞数目也极显著增加(0.65±0.08个/视野对0.44±0.02个/视野,P<0.001)。结果提示较正常饲养温度低8 ℃冷应激使雏鸡细胞免疫水平增加。     

复合氨基酸螯合锌、锰对肉鸡生产性能的影响

选用1200只7日龄商品代AA肉用仔鸡,随机分成6个处理,每个处理4个重复,每个重复50只鸡,用3D复合氨基酸螯合锌、锰分别替代基础日粮中相应无机元素水平的0%,20%,40%,60%,80%,100%,研究其对肉用仔鸡生产性能、腿病发生率和死亡率的影响以及适宜替代比例。试验结果表明:饲粮添加复合氨基酸螯合锌、锰对肉仔鸡生产性能、腿病发生率和死亡率有一定的改善作用,与相应无机元素相比,饲养全期和相对增长率提高,其中试验组4(60%)和试验组5(80%)的体重增长率明显提高(P<0.05),其饲料转化率分别较对照组增加11.8%和11.0%。从本试验各项指标综合考虑,肉仔鸡饲料中3D复合氨基酸螯合锌、锰替代相应无机微量元素的适宜比例为60%。