牛蛙腐皮病病原菌分离鉴定及药敏试验

[目的]明确浙江嘉善某养殖场引起牛蛙腐皮病的致病菌,并探究益生菌与牛蛙腐皮病病原菌间的相互作用,为今后利用益生菌防控牛蛙腐皮病的发生提供技术支持.[方法]通过常规的细菌分离纯化、人工回归感染试验、生理生化特性鉴定及16S rDNA序列扩增,确定引起牛蛙腐皮病的致病菌;根据药敏试验筛选抗菌药物,并从生物防控的角度探究枯草芽孢杆菌等益生菌与致病菌间的相互作用.[结果]从患病牛蛙的内脏及体表溃烂处共分离获得9株疑似致病菌株,经人工回归感染试验确定菌株NWt-2为引起牛蛙腐皮病的致病菌;综合其形态学特征、生理生化特性及分子生物学鉴定结果,可确定菌株NWt-2为布韦不动杆菌(Acinetobacter bouvetii).菌株NWt-2对丁胺卡那、庆大霉素、哌拉西林、头孢氨苄和硫酸阿米卡星等5种抗菌药物高度敏感,对青霉素、复方新诺明、诺氟沙星、氟苯尼考、复方磺胺嘧啶、盐酸林可霉素和盐酸大观林可霉素等7种抗菌药物不敏感(耐药).浓度为105 CFU/mL的枯草芽孢杆菌和紫色杆菌对菌株NWt-2有一定的抑制作用,抑菌圈直径分别为1.45±0.46和0.97±0.38 mm.[结论]布韦不动杆菌是引起浙江嘉善养殖牛蛙发生腐皮病的致病菌,可选用丁胺卡那、庆大霉素、哌拉西林、头孢氨苄和硫酸阿米卡星等抗菌药物进行防治.鉴于枯草芽孢杆菌对布韦不动杆菌具有一定的抑制效果,在当前病原菌对抗菌药物普遍存在耐药性的情况下,选择枯草芽孢杆菌等益生菌进行生物防控具有可行性.     

香猪肺源性枯草芽孢杆菌的分离鉴定及体外抑菌作用

为获得猪呼吸系统的益生菌,以对疾病具有较强抗性的从江香猪为对象,从肺组织中分离到1株细菌Bp-1并对其进行形态学观察和生理生化特性鉴定,经克隆测序分析16SrDNA核苷酸序列和二级结构的相似性,利用琼脂扩散法和混菌拮抗培养法研究Bp-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和猪链球菌3种致病菌的抑制作用。结果表明:菌株Bp-1与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)位于同一分枝,相似性达100%;与已知枯草芽孢杆菌菌株168的16SrRNA可变区二级结构相比无明显差异,因此将Bp-1鉴定为枯草芽孢杆菌。枯草芽孢杆菌Bp-1的液体培养物对3种致病菌均有抑制作用;对大肠杆菌的拮抗作用较强,对金黄色葡萄球菌的拮抗作用较弱。枯草芽孢杆菌Bp-1可作为猪呼吸系统的益生菌对其深入研究。     

辣椒枯萎病主要致病菌的分离鉴定及农用拮抗菌筛选

[目的]分离鉴定辣椒枯萎病主要致病菌,探寻能够有效抑制该致病菌的生防菌株.[方法]采用植物病害组织致病菌划线分离方法分离致病菌,经形态学以及ITS区域PCR检测,确定菌株属性,通过平板拮抗筛选,确定对该致病菌具有拮抗作用的农用生防菌株.[结果]初步鉴定该致病菌为尖孢镰刀(Fusarium oxysporum),将该致病菌与11株农用微生物芽孢杆菌和3株农用微生物木霉菌进行拮抗试验,发现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、海洋芽孢杆菌(Bacillus marinus)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)6株芽孢杆菌对该致病菌拮抗效果明显,长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)与哈茨木霉(Trichoderma harzianum)2株木霉菌对该致病菌具有明显的拮抗效果.[结论]筛选到了8株能够有效抑制该病原菌的生防菌株,为以后研究生防肥料奠定了基础.     

益生芽孢杆菌的筛选与鉴定

［目的］筛选具有益生作用潜力的芽孢杆菌。［方法］经高温处理从鸡肠道分离芽孢杆菌，通过抗逆性、抗菌活性等性能检测筛选菌株，通过生理生化分析鉴定菌种。［结果］筛选到2株具有益生作用潜力的芽孢杆菌LBS53和LBS8；经过生理生化试验，鉴定LBS53为枯草芽孢杆菌，LBS8为蜡样芽孢杆菌。［结论］筛选到的2株菌基本具备作为饲用芽孢杆菌制剂菌株的条件。尤其LBS53的优良生物学特性使其在饲料工业中具有良好的应用前景。     

鲫鱼肠道中枯草芽孢杆菌的分离鉴定及药敏试验

从鲫鱼肠道中分离纯化获得1株革兰氏阳性菌,编号为CB-1,通过细菌形态学观察、理化特性等研究,初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌株能利用葡萄糖产酸,β-半乳糖苷、明胶液化试验为阳性,葡萄糖酸盐、硫化氢、吲哚试验等为阴性;药敏试验结果表明,CB-1菌株对头孢噻吩、卡那霉素、阿奇霉素等抗生素敏感,对洁霉素、甲硝唑、制霉菌素等不敏感。为进一步研究枯草芽孢杆菌与鱼类健康养殖关系提供参考。     

鹅鸭疫里默氏杆菌RC株的分离鉴定及药敏试验

［目的］为防治鸭疫里默氏杆菌所致鹅群传染病提供理论依据。［方法］对染病鹅群进行流行病学调查，从病鹅中分离鉴定致病菌并通过药敏试验研究其防治方法。［结果］待检菌的纯培养物涂片经革兰氏染色为阴性小杆状，瑞氏染色后呈两端浓染的细小球杆菌。该菌在半固体培养基上沿穿刺线生长，因而被鉴定为鸭疫里默氏杆菌。动物回归试验表明：用病鹅分离菌接种雏鹅、雏鸭后，发病雏鹅和雏鸭的临床、解剖症状与自然病例一致，且能回收到鸭疫里默氏杆菌。该菌对庆大霉素、卡那霉素和壮观霉素敏感，对林可霉素、环丙沙星等中敏，对链霉素、青霉素、磺胺嘧啶和四环素不敏感。［结论］该致病菌为鸭疫里默氏杆菌，其所致鹅群疫病可用庆大霉素、卡那霉素和壮观霉素进行防治。     

烟草青枯病拮抗菌TBWR1的筛选鉴定及防病促生能力

【目的】分离对烟草青枯病菌具有拮抗作用的细菌并对菌株进行分类、鉴定，以丰富烟草青枯病生防菌菌种资源。【方法】从健康烟株根际土壤中筛选拮抗菌株，测定其形态、生理生化特征及16S rDNA序列等，并对菌株进行分类鉴定，通过盆栽试验验证拮抗菌对烟草青枯病菌的拮抗活性及其对烟株的促生作用。【结果】在烟株根际土壤中分离获得1株对烟草青枯病有明显抑制作用的菌株TBWR1,序列基因登录号为EF562603,菌株TBWR1与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis KC849252和Bacillus subtilis MN062963在同一分支上且同源性达85%,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株对烟草青枯病的生防效果达71.1%,并能显著促进烟草株高、叶长、茎围生长和根系生物量增加。【结论】枯草芽孢杆菌TBWR1可作为烟草病害生物防治的候选菌株，在烟草青枯病防治中具有潜在价值。     

鸡致病性大肠杆菌的分子与生物学特性研究

［目的］调查安徽省某种鸡场发生的以心包炎、肝周炎及腹膜炎为主要症状的疾病的病原，为临床用药提供依据。［方法］采集病料，对病原菌进行分离培养，通过形态学观察、生理生化试验和16S rRNA序列分析对病原菌鉴定，并做药敏试验，根据药敏试验结果进行临床用药治疗。［结果］分离培养得到的病原菌其形态、生理生化特性、16S rRNA序列均与大肠杆菌相符。药敏试验结果显示，该致病菌对菌必治、阿米卡星、壮观霉素等高度敏感；对头孢拉定表现为中度敏感；对呋喃妥因、庆大霉素表现低度敏感。采用菌必治进行治疗，3 d后病情得到控制。［结论］对病原菌分离、鉴定及药敏试验是临床上治疗控制鸡大肠杆菌病的有效途径。     

鸡肠道枯草芽孢杆菌的分离鉴定及生物特性研究

为研究和开发动物新型微生态制剂,最大程度的提高经济效益,改变抗生素滥用、药物残留等现状,从健康鸡肠道中分离出1株芽孢杆菌,并命名为W,且对其进行形态观察、生化试验鉴定和16S rRNA序列分析及同源性比较。结果表明,本菌株与Bacillus subtilis strain CICC 10023(GU980947.1)的同源性达99.5%,最终确定该菌株为枯草芽孢杆菌,对该菌株进行药敏试验和安全性试验。结果表明,该菌对青霉素、杆菌肽耐药,对小鼠无致病性。     

芽孢杆菌在促进番茄生长和控制青枯病上的比较优势

在离体条件下对47个芽孢杆菌分离物进行了抑制番茄青枯病菌测定,其中12个表现良好的抑菌能力,通过细菌学和Biolog分析将其中5个代表性拮抗菌分别鉴定为枯草芽孢杆菌,解淀粉芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌,其中枯草芽孢杆菌菌株的抑菌能力最强,解淀粉芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌菌株其次.同时在温室条件下测定这5个芽孢杆菌拮抗菌促进番茄生长和诱导番茄对青枯病的抗性效果.用芽孢杆菌处理番茄种子能够有效地控制番茄青枯病,通过测定种子萌发,植株生长高度以及鲜重和干重表明芽孢杆菌的大多数分离物能够促进植物生长,同时这5个芽孢杆菌拮抗菌比对照显著地减少了青枯病的发病率,然而, 促生和病害抑制的效果因不同的菌株而异.其中枯草芽孢杆菌拮抗菌株不仅是良好的促生剂,也是有效的抗性诱导剂,它能减少青枯病80%,充分显示了芽孢杆菌在番茄青枯病治理上的潜在重要性.     

林蛙皮活性肽对小鼠免疫功能影响的试验研究

[目的]探讨林蛙皮生物活性肽对正常小鼠免疫功能的影响。[方法]将小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、林蛙皮活性肽低、中、高剂量组,每组10只,连续灌胃给药28 d后,采用ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,检测T淋巴细胞增值,并通过溶血空斑试验和血清溶血素试验检测林蛙皮活性肽对小鼠体液免疫功能的影响。[结果]林蛙皮生物活性肽可明显促进ConA诱导的淋巴细胞增值,增加抗体生成细胞数量,增强血清溶血素抗体效价水平。[结论]林蛙蛙皮生物活性肽对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能均具有增强作用。     

中国林蛙与黑龙江林蛙血清蛋白比较分析

[目的]为林蛙种属的科学划分提供依据。[方法]以中国林娃和黑龙江林娃为材料，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对其血清蛋白进行比较分析。[结果]从中国林蛙血清中共分离出25条蛋白带，从黑龙江林娃血清中共分离出23条蛋白带，其中迁移率为0．552、0．524、0．400、0．375、0．331、0．241、0．076、0．062、0．048的9条蛋白带为中国林蛙特有；迁移率为0．517、0．269、0．228、0．214、0．127、0．069、0．041的7条蛋白带为黑龙江林娃特有，迁移率为0．621、0．469、0．434、0．359、0．317、0．297、0．200、0．172、0．159、0．145、0．124、0．103、0．090、0．055、0．028、0．014的16条蛋白带为两者共有。[结论]中国林娃与黑龙江林娃应归于2个独立的蛙种。     

长白山林蛙肉酶解条件的研究

[目的]优化林蛙肉酶解工艺。[方法]以长白山雄性林蛙肉为原料,选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶对其进行水解。通过单因素试验和正交试验筛选最佳酶解条件。[结果]酶解效果最好的是中性蛋白酶,其最适酶解条件为pH值6、加酶量7%、底物浓度55%,水解时间110min、温度50℃。在此工艺条件下,水解度达55.02%。[结论]该酶解工艺用酶少、分解快,适合长白山林蛙肉的酶解 更多还原     

高良姜叶枯病病原菌的分离和鉴定

[目的]明确高良姜叶枯病病原菌.[方法]病原菌从高良姜感病组织上分离并依据柯赫氏法则进行致病性测定,病原菌的鉴定主要通过形态鉴定和ITS序列分析.[结果]高良姜叶枯病病原菌确定为可可毛色二孢（Lasiodiplodia theobromae）,属子囊菌门（Ascomycota）,座囊菌纲（Dothideomycetes）,葡萄座腔菌目（Botryosphaeriales）,葡萄座腔菌科（Botryosphaeriaceae）,毛色二孢属（Lasiodiplodia）.[结论]首次报道高良姜叶枯病病原菌为可可毛色二孢.     

以海蛙作为红树林环境监测指示物种的初步研究

[目的]研究将唯一栖息于红树林的两栖动物——海蛙(Rana cancrivora)作为红树林环境质量监测指示物种的可行性。[方法]于2009年7月和8月在海南东寨港红树林国家级自然保护区的码头和红树林核心区(简称红树林)2个不同微生境中采集海蛙,检测分析其肝脏和肌肉中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、乙酰胆碱脂酶(AChE)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活性及丙二醛(MDA)含量,同时测量计算其肝体指数、肾体指数和脾体指数,以综合评估海蛙所受环境胁迫大小,并用以评估红树林不同生境质量好坏。[结果]红树林生境中海蛙的肝脏、肾脏和脾脏系数均低于码头,但仅肾脏系数差异显著(p<0.05);该生境中海蛙组织的4种酶活性均高于码头,且SOD和CAT活性均表现出差异显著(p<0.05);同时MDA含量也显著低于码头(p<0.05)。结果表明红树林生境中海蛙的抗氧化酶活性高于码头个体,相应地脂质过氧化程度低,所受环境胁迫程度低于码头。[结论]由于人类干扰和旅游开发等因素使码头生境质量明显低于红树林核心区,而红树林生境中海蛙个体所受环境胁迫小于码头个体,与这2个微生境中的生境质量相一致,表明海蛙可作为红树林环境质量评价的指示物种。     

粤北山区东北林蛙人工养殖的越冬情况

[目的]了解东北林蛙在粤北山区4种不同越冬模式下的越冬情况。[方法]在粤北山区设置室外水陆越冬、室外水越冬、室内旱越冬与室内冷冻箱水越冬4种越冬模式,将东北林蛙分别放在这4种越冬模式下进行越冬管理。记录时间、温度以及东北林蛙的越冬情况;同时,对越冬前后的各组东北林蛙分别进行数量统计与体重测量,计算林蛙在越冬期的体重消耗率和成活率。[结果]室外水陆越冬模式与室外水越冬模式中林蛙成活率仅有40.0%与41.5%,室内旱越冬与冷冻箱水越冬模式中林蛙成活率达到了82.0%与84.5%。[结论]温度、越冬模式以及东北林蛙自身的肥满度是影响东北林蛙在粤北山区安全越冬的重要因素。     

哈蟆油药材产地加工研究

[目的]为哈蟆油产地加工确定哈士蟆的最佳捕捉时间与生长年限以及针对在产地加工过程中经常出现红油、黑油、冻油的现象，采取相应措施，提高哈蟆油药材的优级品率。[方法]在9月下旬～11月上旬选择哈士蟆集中回河冬眠时，捕捉不同体重的商品蛙进行产地加工，并观察不同质量状况的商品蛙、不同干燥条件对哈蟆油质量的影响。[结果]哈士蟆的捕捉时间、体重对哈蟆油的出产率有不同程度的影响，对哈蟆油的膨胀度无影响。[结论]哈蟆油药材产地加工过程中出现的“红油”、“黑油”、“冻油”问题，是由商品蛙自身质量状况、干燥条件不当引起的。     

紫花苜蓿根腐性病害生防放线菌的分离与筛选

[目的]分离筛选出对苜蓿根腐病病原具有高拮抗作用的生防放线菌。[方法]利用梯度稀释分离法从来自内蒙古赤峰地区的10个土样中分离得到91株放线菌。以3株苜蓿根腐病菌为靶标菌,采用平皿对峙培养法,对分得菌株进行皿内拮抗作用测定。[结果]获得5株对供试苜蓿根腐病菌有较强抑制作用的拮抗菌株,编号为1-3-6、4-4-2、6-2-25、6-2-27、7-2-13,分别来自1号、4号、6号及7号土样,占分离菌株的5.50%。[结论]该研究可为苜蓿根腐病生物防治奠定一定基础。     

银龙鱼烂鳃病病原的分离和鉴定

[目的]对患烂鳃病银龙鱼开展病原分离和鉴定。[方法]采用人工回归感染试验确定分离菌株的致病性,利用生理生化试验和16S r DNA基因序列分析对病原菌进行鉴定。[结果]分离菌株YY-2017-3对斑马鱼具有致病性,其生理生化试验结果与柱状黄杆菌相一致;YY-2017-3菌株的16S r DNA基因序列与柱状黄杆菌聚为一支,对多种药物显示耐药。[结论]菌株YY-2017-3被鉴定为柱状黄杆菌,这是柱状黄杆菌引起银龙鱼烂鳃病在国内的首次报道。