茶树花药愈伤组织诱导及增殖研究

以茶树花药为外植体,以MS培养基为基本培养基,探究适合花药愈伤组织诱导的花药发育时期,不同光照时间对花药愈伤组织诱导的影响,不同植物生长调节物质对花药愈伤组织诱导及增殖的影响,为建立茶树组织培养体系提供依据。研究结果表明：利于花药愈伤组织的形成的处于单核中期的花蕾直径在0.7～0.8 cm,黑暗条件下较12 h/d光照条件下茶树愈伤组织的诱导率高,茶树花药经过低温预处理24 h后,在培养基MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.4 mg/L+2,4-D1.0 mg/L上愈伤组织诱导率最高,诱导率为84.6%,茶树花药愈伤组织增殖率最高的培养基为MS+NAA1.0 mg/L+6-BA0.5 mg/L+2,4-D0.2 mg/L。     

茶树愈伤组织诱导

以茶树[Camellia sinensis (L.) O. Ktze.]种子在无菌条件下萌发的根和叶为外植体,探究在MS培养基中不同种类植物生长调节剂对茶树根和叶愈伤组织诱导的影响。结果表明,以幼根为外植体诱导愈伤组织的最适培养基为NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L,诱导率为85.1%;培养基NAA1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L为幼叶诱导愈伤组织的最适培养基,诱导率为87.0%。     

枣树组织培养养愈伤组织诱导的研究

将枣树不同品种的不同器官及其部位的外植体接种含有不同激素的培养基中培养，对其愈伤组织诱导条件进行了条件，结果表明，灌阳长枣（中国）和普通枣（日本）为较适宜组培的品种，胚，嫩枝顶部，芽为适宜组培的器官；以ＭＳ（１／２ＮＯ＾－３）的作基本培养基，并添加３μｍｏｌ左右Ｚｅａｔｉｎ和约３０μｍｏｌＮＡＡ或ＩＡＡ可以获得数量较多，质量较好的愈伤组织，叶所产生的愈伤组织颜色较深，数量也较少，并在初代培养时易产     

茶树愈伤组织诱导与共培转化的初步研究

以福鼎大白无性系茶树大田种子胚为材料，切取子叶、胚芽、胚轴和胚根进行培养，诱导形成愈伤组织。选用较致密的愈伤组织切块与带ＮＰＴⅡ和ＧＵＳ基因Ｔｉ质粒的根癌农杆菌共培养，通过卡那霉素抗性选择，得到了抗性愈伤组织并得到了芽的分化。抗性愈伤组织的诱导率在５％左右。共培过程中发现茶树愈伤组织能较强烈地促进农杆菌生长，表现在农杆菌在茶树愈伤组织周围的聚结。这可能是由于茶树多酚类含量较高，而通常酚基复合物有利于农杆菌对植物细胞的附着和转化。     

长春花愈伤组织诱导

长春花(Catharanthus roseus (L.)G.Don.)是夹竹桃科植物,全草入药,据报道有抗癌作用,其主要抗癌成分为长春碱和长春新碱[1].由于含量甚微[2],价格昂贵,人工栽培远远满足不了人们的需要.诱导愈伤组织是组织培养的第一步,是进行工业化生产的基础.曾有人先后在B5[3]、White[4]、Wo-L[5]、WoNiKo5-L[6]培养基上诱导出长春花愈伤组织,且在其上的继代培养也获成功.笔者在MS培养基上对于是否能诱导出长春花茎的愈伤组织进行了的探索.     

杨树湿地松组织培养愈伤组织耐盐性

对杨树无性系ＮＬ－８０１０５，ＮＬ－８０１０６，ＮＬ－８０１１７和湿地松组织培养愈伤组织的耐盐性进行了研究。结果表明：以ＭＳ为基本培养基，添加２，４－Ｄ２．０ｍｇ·ｋｇ－１和ＫＴ０．５ｍｇ·ｋｇ－１，诱导这些树种愈伤组织效果好；在含氯化钠的培养基上，杨树不同器官外植体的愈伤组织诱导能力和耐盐程度有差异，外植体茎、叶比根强；杨树继代愈伤组织的耐盐能力显著高于湿地松，这与植株水平的耐盐性相一致，表明用愈伤组织鉴别这些植物耐盐性的方法是可行的     

除虫菊愈伤组织的诱导和继代

以除虫菊茎尖为外植体,MS培养基为基本培养基,对除虫菊愈伤组织的诱导和继代进行了系统研究。结果表明:外源激素2,4-D与KT的9种配比中,1.0与0.4mg/L的激素组合对除虫菊愈伤组织的诱导率可达88.0%;当蔗糖质量浓度为10～40g/L时,蔗糖质量浓度的大小与愈伤组织增长量成正比,与褐变开始时间呈负相关关系,当质量浓度为25g/L时,愈伤组织日平均生长量可达0.127g;适宜的光照时间可延长愈伤组织保存期并维持良好的组织结构,光照时间为4h/d时,愈伤组织褐化开始时间保持在27d左右。     

臭柏愈伤组织的诱导

在离体培养条件下,取当年生臭柏（Ｓａｂｉｎａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）茎尖、茎段、叶及根尖为外植体,在ＳＨ、ＭＳ培养基上获得愈伤组织。结果表明：在试验的４种外植体中,以茎尖脱分化能力最强,并筛选出愈伤组织最佳培养基为：ＳＨ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ。植物本身的生态生物学特性与臭柏的愈伤组织的诱导成功与否有很大关系。     

不同品种茶树愈伤组织的培养与茶氨酸的积累

通过对福鼎大白、福云595、福安大白、福鼎大毫、福云六号5个茶树品种愈伤组织的继代培养,研究其愈伤组织生长与茶氨酸积累规律,建立Logistic数学模型.结果表明:愈伤组织生长量与茶氨酸含量呈显著正相关(P<0.01);福鼎大白的愈伤组织生长量与茶氨酸质量分数最高,分别是2.26g·瓶-1、176.143mg·g-1;愈伤组织生长量与茶氨酸含量的大小顺序均为福鼎大白茶、福云595、福安大白、福鼎大毫和福云六号;茶氨酸的最佳收获时间为培养后24-28d.     

花粉管通道法对茶树进行dsTCS基因转化的初步研究

以祁门槠叶群体种茶树植株为受体材料,采用花粉管通道法将茶树咖啡碱合成酶dsRNA (dsTCS)注射到茶花子房中.试验共处理茶花500朵,收获T0种子43粒,加温催芽后出苗38棵,随机选取15棵处理后的茶株和5棵对照茶株,剪取相同部位幼叶,用HPLC测定其咖啡碱含量.检测结果为,处理后的15棵茶株,其平均咖啡碱含量均低于对照茶株,初步表明经花粉管通道法导入的dsTCS部分抑制了茶树体内咖啡碱的合成.     

茶树组织与器官培养研究进展

收集了自20世纪60年代以来茶叶研究者在国内和国际刊物上发表的重要论文,对茶树组织与器官培养研究工作做了简要的介绍.近40年来茶树组织与器官培养研究取得了较大的进展,但仍然还有不少难题未攻克.利用离体培养作为技术平台运用于茶树育种,还有一段艰难的路程要走,期待着茶叶研究者在今后的研究中取得更大的成果.     

茶树炭疽菌的鉴定及致病力分析

通过PCR扩增并测定福建省不同产地茶树上分离的炭疽病菌的β-Tub2、ITS、GDPH和ACT 4段基因序列,采用多基因系统发育分析,结合其纯培养、分生孢子、附着孢等形态特征对分离菌进行鉴定,并采用离体法测定菌株的致病力.结果表明:5株供试病原菌分离物均为Gloeosporium cingulata f.sp.camelliae,为茶树炭疽病病原菌,它们的培养性状和形态特征都相似.致病力测定表明,所有分离物均对茶树叶片致病,但其中一株致病力明显强于其余菌株,且致病力强的菌株与其余菌株的基因序列存在差异.     

茶树CsCBF1基因表达载体的构建及其转基因烟草的抗寒性分析

【目的】通过转基因烟草验证茶树CsCBF1基因抗寒性功能,为发掘、筛选茶树重要功能基因提供理论依据。【方法】 利用根癌农杆菌介导法将构建的表达载体pBI121-CsCBF1导入烟草,通过PCR、RT-PCR和GUS活性染色鉴定外源CsCBF1基因是否导入并整合到烟草基因组上转录表达。然后将转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草分别置于25,4和0 ℃下处理48 h后,检测其膜质通透性、丙二醛（MDA）含量和叶绿素荧光参数Fv/Fm,并将0 ℃处理3 d的转pBI121-CsCBF1型和野生型烟草置于25 ℃下培养1周后观测恢复表型和统计死亡率。【结果】 成功构建表达载体pBI121-CsCBF1,PCR、RT-PCR和GUS活性染色证明,CsCBF1已整合到烟草基因组中并转录表达。25 ℃处理下,转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草的膜质通透性、丙二醛含量和Fv/Fm均无显著差异,而在4和0 ℃处理下,转pBI121-CsCBF1型烟草的膜质通透性和丙二醛含量均显著低于转pBI121型和野生型烟草,但Fv/Fm显著高于转pBI121型和野生型烟草。生长恢复试验中,转pBI121-CsCBF1型的存活率为66.7％,而野生型仅为23.3％。【结论】 茶树CsCBF1基因能够显著增强非低温驯化植物烟草的抗寒性,说明茶树CsCBF1基因存在于细胞抗寒的分子调控途径中,从而提高植物细胞的低温防御能力。     

茶树多酚氧化酶基因的SNP分析

选取有代表性的40个茶树品种(系)为材料,先采用PCR-SSCP-银染检测技术,对供试材料的多酚氧化酶(PPO)基因进行SSCP分析,对PPO基因作初步基因分型;根据分型分析结果,对每一类型选择典型品种的PPO基因作进一步的DNA序列分析,用DNASTAR Program进行单核苷酸多态性(SNP)搜寻.结果表明,茶树PPO基因存在丰富的SNP,其类型包括:转换(AG,CT)、颠换(AT,GC,G→T,A→C)与杂合子(C/T,A/G,G/T,A/T,A/C,G/C).在发现的37个SNPs中,有13个SNPs发生在核酸内切酶酶切位点,有10个错义SNPs位点导致氨基酸的改变.在PPO基因的保守序列区,出现SNP的频率较低.     

单叶铁线莲Clematis henryi愈伤组织诱导与植株再生

以单叶铁线莲老枝、嫩茎、叶片和叶柄为外植体,在附加各种激素的MS培养基上进行诱导培养,以探讨愈伤组织诱导和植株再生的条件。结果表明,嫩茎为最佳外植体,适用于愈伤组织的诱导,在MS+1.2 mg·L -1 6-BA+0.35 mg·L -1 NAA培养基中,嫩茎的出愈率为88.6%;MS+4.0 mg·L -1 KT+0.4 mg·L -1 NAA为最佳不定芽诱导培养基,不定芽发生率为90.0%;MS+0.04 mg·L -1 NAA为最佳生根培养基,生根率达95.0%。     

茶树组织培养研究进展

对茶树组织培养技术在茶树种苗快速繁殖、辅助育种、次生代谢产物生产等方面的应用进行综述,阐述了以茶树根、茎、花、种子等为外植体开展的组织培养的培养基研究,并提出组织培养过程中产生褐化、污染的原因及控制对策。     

PPM在甘薯试管苗炼苗期应用的防污染效果

为了保证甘薯试管苗的移栽成活,试管苗必须经过一段时期的驯化炼苗过程。试管苗生长培养基被污染或炼苗时被污染都可影响到试管苗的移栽成活率,而试管苗开封炼苗时培养基不可避免地要被微生物感染,因而控制试管苗开封炼苗期培养基不受污染,有利于提高试管苗移栽成活率。美国最新研制出一种广谱性植物防腐剂PPM（plant preservative mixture）,对空气、水中及内生微生物均有抑制作用,被广泛用于植物组织培养的外植体消毒和添加到培养基防污染。经与PPM的研制者联系获得少量样品,本试验观察了甘薯试管苗炼苗时用PPM处理防止培养基污染的效果。     

不同植物生长调节剂对莴苣愈伤组织的诱导与植株再生的影响

探讨了莴苣组织培养中不同植物生长调节剂对莴苣愈伤组织的诱导及植株再生的影响.试验结果表明,采用下胚轴为外植体进行愈伤组织诱导,MS 2,4-D 1.0 mg/L 6BA 0.5 mg/L NAA 0.1 mg/L有利于下胚轴愈伤组织的生成,诱导率达95%;MS 6BA 1.0 mg/L NAA 0.2 mg/L培养基有利于从愈伤组织上诱导出芽,诱导率可达100%;幼苗经1/2MS NAA 0.5 mg/L培养基诱导生根后成为完整的植株.