枳、富民枳与枳橙RAPD分析与分类（亲缘）关系探讨

 对枳、富民枳与枳橙进行了RAPD分析。17个引物对3个材料PCR扩增得52条谱带,从相似系数、多态性比较和聚类结果看:各材料之间具有不同的遗传距离,供试材料聚为2个类群(富民枳和枳橙聚为一群,枳单独聚为一类)。从分类（亲缘）关系看:作者认为富民枳与枳橙的亲缘关系更近,而与枳的关系较远。     

不同砧木对云柠1号柠檬叶片养分含量的影响

以云柠1号柠檬(Citrus×limon‘Yunning No.1’)为研究对象,在相同管理条件下研究红橘(Citrus reticulata Blanco)、酸柚(Citrus grandis Osbeck)、香橙(Citrus junos Lsieb)、富民枳(Poncirus polyandra S.)、小香橼(Citrus medica V.)、枳橙(Poncirus trifoliata L.Raf.×Citrus.sinensis L.Osb.)、枳类(Poncirus trifoliata)7种砧木对云柠1号柠檬叶片养分含量的影响。试验结果表明,不同砧木接穗组合对云柠1号柠檬叶片养分含量影响显著。大量元素中,以小香橼为砧木处理的云柠1号柠檬叶片N含量最高,比7种处理的平均含量高出0.80个百分点;以富民枳为砧木处理的云柠1号柠檬叶片K含量为0.91%,为7种处理中含量最高。微量元素中,以红橘和香橙为砧木处理的云柠1号柠檬叶片Ca和Mg含量最高;以富民枳和小香橼为砧木处理的的云柠1号柠檬叶片Fe、Mn含量最高,各处理间差异显著。结合叶片养分诊断指标适宜范围,综合评价得出以富民枳为砧木处理的叶片中矿质元素养分含量最佳,当地适宜推广富民枳为云柠1号柠檬砧木以达到养分的高效吸收利用。     

柑橘砧木枳橙和香橙BOR2基因的克隆与缺硼胁迫下的表达分析

以耐缺硼胁迫的枳橙(Citrus sinensis(L.)Osb.×Poncirus trifoliata(L.)Raf.)和不耐缺硼胁迫的香橙(Citrus junos Sieb.ex Tanaka)为材料,克隆了拟南芥硼运输基因AtBOR2的同源基因枳橙CpBOR2和香橙Cj BOR2,进行相关生物信息学分析和缺硼胁迫下的表达分析。结果表明,CpBOR2和CjBOR2的ORF长度分别为2 133 bp和2 073 bp,CpBOR2和CjBOR2蛋白都具有7个跨膜区域,且具有细胞膜极性定位和内吞降解的保守氨基酸位点;缺硼胁迫下,CjBOR2表达量与对照相比无显著变化,在前期降低,后期升高。     

福建柑桔种质的RAPD分析

从100条随机引物中筛选出21条能扩增出清晰的具有多态性DNA谱带的引物,通过RAPD分析,在分子水平上对福建54份柑桔种质进行鉴定、分类和亲缘关系分析。结果表明:这些种质的相异系数为0.01493-0.48172,说明它们之间的亲缘关系较近;在遗传相似系数为0.45的水平上,54份柑桔种质被分为三大类,其中,太田芦柑(C itrus reticulataB lanoocv.Tiantian lugan)和晚熟芦柑(C itrus reticulataB lanoo cv.W anshu lugan)的亲缘关系最近,柠檬(C itrus lim onBurm.F.)与枳(Poncirus trifoliateRaf.)的亲缘关系最远,与形态学观察及传统分类结果相吻合。此外,还对福建引进的一些杂柑品种的遗传多样性进行了探讨。     

云南特有茶组植物遗传多样性的ISSR研究*

 以云南茶组植物为材料，利用ISSR技术对云南茶组植物进行了遗传多样性分析。从所筛选出的12个引物对25份供试材料进行ISSR扩增反应后，共产生141条谱带，其中多态性谱带为139条，其多态条带比率(PPB)高达98.5%,表明25份材料具有丰富的多态性。并根据遗传距离利用UPGMA构建了云南茶组植物亲缘关系树状聚类图。25个材料可分为6个类群(取值水平GD=0.378 )，20个茶组植物分为2个类群。从DNA分子水平探讨了云南茶组植物的遗传多样性，突出了种间的遗传差异，种间的遗传距离为0.151~0.580,表明25份材料间遗传基础较宽。PCA分析与聚类分析结果基本一致。结果显示，ISSR作为一种信息量高、重演性好的分子标记，应用于茶树品种鉴别和亲缘关系分析是非常有效的。     

香蕉种质资源亲缘关系的ISSR分析

利用ISSR标记对3个基因型(AAA,AA和ABB)共35份香蕉种质资源的遗传多样性和亲缘关系进行了分析,筛选出的6条ISSR引物共扩增出38条带,扩增片段长度为200～2 000bp,27条具有DNA多态性,多态性为71.05%,遗传距离为4.30%～33.33%。用UPGMA聚类分析结果显示,以遗传距离25%为阈值,35份香蕉种质可分成6个类群,除贡蕉(AA)和金粉1号(ABB)分别归为Ⅲ和Ⅳ两个类群之外,其余33份种质分为4个类群,其中Ⅰ类群包含着来自不同地方的基因型为AAA和ABB的22份香蕉种质。基因型为AAA和ABB的香蕉种质并不被简单地划分成两类,部分基因型相同的香蕉种质之间没有表现出紧密的亲缘关系。本研究所用的6条引物能把香蕉种质区分开,ISSR分子标记对研究香蕉种质资源的亲缘关系是有效的。     

荷花遗传多样性的ISSR标记分析

【目的】探讨荷花(Nelumbo nucifera Gaertn.)资源的遗传多样性和亲缘关系,为荷花资源的保护利用、品种鉴定及育种效率提高提供参考。【方法】利用ISSR分子标记技术,对6份野生半野生荷花品系和27份荷花栽培品种进行遗传多态性分析,从40条引物中筛选扩增效果较好的5条引物用于试验。采用POPGEN32软件计算供试材料的等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Nei’s基因多样度(He)和Shannon多态性信息指数(I),利用UPGMA方法进行聚类分析。【结果】用筛选出的5条引物(UBC807、UBC811、UBC836、UBC840、UBC880)分别对33份荷花材料基因组DNA进行扩增,共扩增出54条清晰条带,其中多态性条带25条,多态性条带比例为46.3%。应用引物UBC811、UBC840和UBC880的15个特异性位点绘制了33份荷花的DNA指纹图谱,这些位点组合后可以将33份荷花材料逐一区分开。33份荷花资源的Ne为1.276 6,He为0.192 0,I为0.323 7,且野生半野生品系的各项参数值均低于栽培品种。利用UPGMA法将供试荷花资源分为4个类群,6个野生半野生荷花品系均在第Ⅰ类群,3个中、美杂种莲种系和13个中国莲种系的品种聚在第Ⅱ类群,藕莲和花莲分属于第Ⅰ类群和第Ⅱ类群,第Ⅲ和第Ⅳ类群分别仅包括1个和2个品种。【结论】供试33份荷花资源的遗传多样性水平较低。聚类结果显示,荷花资源间的亲缘关系与地理分布距离相关,中、美杂种莲种系品种与中国莲种系品种的亲缘关系较近。加强对全国各地荷花资源的调查与保护,是荷花遗传多样性保护的重要工作。     

新疆梨种质资源亲缘关系的ISSR和RAPD分析

【目的】探讨新疆梨种质资源亲缘关系以及遗传多样性,旨在为供试梨资源的分类提供科学依据。【方法】采用ISSR和RAPD分子标记对48份梨种质资源进行聚类分析和遗传关系研究。【结果】14条ISSR引物共扩增出113条清晰的谱带,其中101条显示多态性,平均每个引物扩增出7.2条多态性谱带。19条RAPD引物共扩增出163条清晰的谱带,其中多态性谱带138条,平均每个引物扩增出7.2条多态性谱带。基于ISSR和RAPD两种标记,利用UPGMA分别构建了48份梨资源的聚类树状图。ISSR和RAPD分别聚类以及两种标记混合聚类均将48份梨种质分为3类:第Ⅰ类群中包括1份种质;第Ⅱ类群中包括23份种质;第Ⅲ类群中包括24份种质。【结论】两种标记适合于梨种质资源亲缘关系和遗传多样性分析,可为梨资源的开发利用及新品种的选育提供科学依据。     

福建泰宁野生铁皮石斛ISSR亲缘关系分析

利用ISSR分子标记技术对158份福建省泰宁县野生铁皮石斛(Dendrobium officinale)单株进行亲缘关系分析。结果显示,11条ISSR引物在158份样本中共扩增条带189条,多态性比率达91.7%,表明泰宁野生铁皮石斛样本间存在极为丰富的遗传多样性;UPGMA树状图分析显示,样本总体遗传距离介于0~0.58,在遗传距离0.43处,158份福建省泰宁野生铁皮石斛样本被分为4个类群,具有较高的物种多样性。     

基于SSR分析的富民枳样本量对其遗传多样性指标的影响

为了对极小种群野生植物富民枳(Poncirus polyandra)采取合理有效的保护措施,采用SSR分子标记作为遗传完整性检测标记,研究不同梯度的有效样本量对微卫星分析中遗传多样性指标的影响。本研究利用5对SSR引物,对65份富民枳种质材料进行遗传完整性检测,并对富民枳种植资源遗传多样性的微卫星数据进行分析。结果表明:随着有效样本量的增加,有效等位基因数、观测杂合度、期望杂合度、多态性信息量和Shannon信息指数等遗传指标均随之增加,有效样本量与遗传多样性指标呈显著正相关。当以有效等位基因数、多态性信息量(PI,C)和Shannon多样性指数等来衡量时,有效样本量29株为曲线的拐点,此时代表了95%以上的遗传多样性水平;而以观测杂合度和期望杂合度来衡量时,有效样本量为25株时,便达到了该总体遗传多样性水平的95%以上。综合分析表明,富民枳的有效样本量以25~29株较为合适,目前富民枳的种质保存是合理有效的。     

砧木品种与茎尖嫁接成活率关系的研究

[目的]明确砧木品种与茎尖嫁接成活率的关系。[方法]分别以枳(Poncirus trifoliata)、枳橙(Ruta"Citrange")和甜橙[Citrussinensis(L.)Osbeck]作为茎尖嫁接砧木,采用倒"T"字法对黄果柑、长泰芦柑、玉环高橙以及玉环柚进行茎尖嫁接脱毒。[结果]黄果柑和玉环高橙用甜橙作砧木成活率最高分别为75.0%和60.0%,长泰芦柑和玉环柚用枳橙作砧木成活率最高分别为46.7%和18.2%。[结论]茎尖嫁接成活率的高低与砧木和脱毒品种的亲和性有关,同一品种选用不同的砧木其茎尖嫁接成活率有差异。     

硼对两种不同砧木‘纽荷尔’脐橙叶片硼形态影响的差异

 【目的】阐明不同硼处理下枳橙砧木与枳壳砧木‘纽荷尔’脐橙细胞水平上的硼利用能力差异。【方法】采用水培试验,通过测定叶片中不同形态硼(自由态硼、半束缚态硼、束缚态硼)含量并分析其相互关系,研究两种砧木脐橙叶片硼形态的差异。【结果】在缺硼B0(B 0 mg?L-1)、正常硼B05 (B 0.5 mg?L-1)、高硼B50 (B 5.0 mg?L-1)条件下,枳橙砧木的自由态硼含量相对较低,半束缚态硼含量相对较高,枳壳砧木的正好相反;枳橙砧木在B0、B05、B50条件下的R值(半束缚态硼/自由态硼)分别为2.31、1.23和1.06,都远大于相同处理下枳壳砧木的1.80、0.57和0.82;高硼(B 5.0 mg?L-1)条件下,枳橙砧木的自由态硼和半束缚态硼分别为16.39、17.38 mg?kg-1, 都远大于枳壳砧木的8.60和7.02 mg?kg-1;对于束缚态硼,枳橙砧木的脐橙正常供硼与高硼条件下分别为7.34、7.43 mg?kg-1, 已没有显著差异,而枳壳砧木的则是高硼条件下最高,为9.20 mg?kg-1。【结论】与枳壳砧木相比,枳橙砧木脐橙体内硼的跨膜能力更强,细胞水平上的硼利用能力较高,在相对较低硼水平下就能满足细胞壁的需求。     

枳NLP转录因子克隆及其在不同水分条件下的表达

【目的】分析柑橘砧木枳(Poncirus trifoliata(L.)Raf.)参与氮素吸收与同化的重要转录因子NLP在干旱胁迫下的表达模式,为柑橘在干旱胁迫条件下对氮素吸收与同化的调控机理提供研究参考。【方法】以柑橘砧木枳为试验材料,在甜橙(Citrus sinensis(L.)Osb.)基因组数据库的基础上,利用生物信息学筛选获得甜橙NLP,并以此设计引物扩增枳NLP的CDS全长并测序。利用Clustal X和MEGA程序进行序列比对和系统发育分析,利用实时荧光定量PCR技术分析不同水分条件下的枳NLP的表达模式。【结果】筛选并克隆获得了4条枳NLP序列,为Pt NLP2、Pt NLP4、Pt NLP7和Pt NLP8。序列比对分析表明枳NLP之间的蛋白质序列一致性为45.13%,均具有明显的RWP-RK和PB1结构域。枳与甜橙的NLP蛋白质序列的一致性极高,分别为97.57%、96.47%、99.0%及97.33%。系统发育分析表明枳NLP可分为4个进化类型,与拟南芥的NLP分类一致,即Pt NLP2与At NLP1/2一类,Pt NLP4与At NLP4/5一类,Pt NLP7与At NLP6/7一类,Pt NLP8与At NLP8/9一类。在不同水分条件下,枳NLP的表达模式在叶与根中存在差异。随着基质水分含量的减少,枳叶NLP呈现先上升再下降的趋势。与对照(相对持水量为61.0%)相比,叶Pt NLP2、Pt NLP4、Pt NLP7及Pt NLP8的表达量在相对持水量为15.4%时上调至最高水平,分别上调了2.9、3.5、5.9及2.8倍,之后持续下调;到相对持水量为9.4%时,其表达水平低于对照但无显著差异。而枳根NLP的表达量在对照中最高,后随着水分的散失呈总体下降趋势且差异显著,与对照相比,根Pt NLP2、Pt NLP4、Pt NLP7及Pt NLP8的最大下调倍数分别为6.7、2.8、4.8及2.3。复水后,枳叶与根NLP的表达量低于复水前,且与对照差异显著。【结论】枳NLP的表达与土壤的水分条件密切相关。枳叶片NLP的表达水平在干旱胁迫前、中期上调,后期下调;而枳根NLP的表达水平在干旱胁迫下持续下调。其中,Pt NLP2和Pt NLP7的表达量在枳根响应干旱胁迫中变化较大。     

2种不同中间砧/基砧组合的纽荷尔脐橙树体特征和营养特性

通过连续2a田间试验，比较纽荷尔脐橙高接在2种不同基砧／中间砧组合上的树体特征和营养特性差异，表明锦橙／红桔组合投产显著地晚于国庆1号温州蜜柑／枳组合(对照)。锦橙／红桔组合比国庆1号温州蜜柑／枳组合树势生长强旺，枝条较直立，树冠郁闭；2种组合树体生长势和新梢生长量存在不同的年际间差异特点。2种组合叶片的单叶光合潜力无明显差异，叶绿素a/b值分别存在年际间差异且具有相同的相对大小趋势。锦橙／红桔组合叶片可溶性糖有低于国庆1号温州蜜柑／枳组合的趋势，而淀粉含量有高于国庆1号温州蜜柑／枳组合的趋势；2种组合的3种糖份指标存在年际间差异且分别具有相同的相对高低关系。锦橙／红桔组合叶片N、P含量比国庆1号温州蜜柑／枳组合低，Fe、Ca、K含量和C／N水平比国庆1号温州蜜柑／枳组合高；2种组合的C／N值、N、P、Ca和Fe含量年际间差异特点分别相同，而K含量则具有相反的年际间差异趋势。     

不同磷水平下4种柑橘砧木的生长状况、根系形态和生理特性

【目的】探索不同磷水平对柑橘砧木生长和根系形态及其相关生理特性的影响,为发掘磷高效柑橘砧木提供科学依据。【方法】以贵州喀斯特山地分布的野生宜昌橙(Citrus ichangensis Swingle)、酸橙(C.aurantiumL.)、白?檬(C.limonia Osbeck)和栽培种枳(Poncirus trifoliata Raf.)为材料,采用砂培方法研究不同磷水平(5、25和45 mg·L-1)下4种柑橘砧木的生长及生物量大小、根系形态特性、叶片和根系的酸性磷酸酶(Apase)及硝酸还原酶(NR)活性、根系分泌性酸性磷酸酶(SAPase)活性和根系的磷吸收动力学参数。【结果】在5 mg·L-1磷水平下,宜昌橙生长发育受到的抑制较小,其次为白?檬和酸橙,对枳的抑制最强。当营养液中磷浓度达到25mg·L-1时,宜昌橙和白?檬的株高、基径及鲜重和干重生物量、根系总长、总表面积、总体积和根尖数达到最大,5 mg·L-1的处理次之,45 mg·L-1的处理最小。随营养液中磷浓度的提高,酸橙和枳的上述指标和根冠比随之增大,宜昌橙和白?檬的根冠比则随之变小。在低磷条件下,宜昌橙的侧根粗度、二级侧根数量及密度和根冠比最大,叶片NR活性强弱顺序为宜昌橙白?檬酸橙枳,根系的NR活性强弱顺序为酸橙白?檬宜昌橙枳。不同砧木叶片和根系NR活性随供磷水平降低而明显减弱。在低磷胁迫下,砧木叶片及根系的APase活性和根系的SAPase活性响应强弱顺序为宜昌橙白?檬酸橙枳。在低磷条件下,宜昌橙的Imax大于白?檬、酸橙和枳,而Km和Cmin比白?檬、酸橙和枳的小。【结论】宜昌橙忍耐低磷胁迫的能力强,在低磷条件下根系形态和生理的适应性机制响应比其他3种柑橘砧木更加明显,表现出较强的磷吸收动力学特性。     

基于不同传感器的纽荷尔脐橙叶片叶绿素含量检测技术评价

【目的】研究基于不同传感器的叶片叶绿素含量监测方法,探索建立轻简、高效的柑橘叶绿素含量监测技术。【方法】以枳砧纽荷尔脐橙当年生春梢叶片为试材,采用便携式地物光谱仪Field Spec4、数字图像技术、荧光及多酚含量测量仪Multiplex?Research和SPAD 502分别获取叶片光谱反射率、图像信息、荧光值和叶绿素含量,分析各数字化指标、叶片光谱指标、荧光值与叶绿素含量(SPAD值)的相关性。基于不同指标采用偏最小二乘法(partial least squares regression,PLS)及内部交叉验证构建叶绿素含量定量反演模型,并进行模型精度检验以及各传感器监测叶片叶绿素含量的可行性评价。【结果】基于地物光谱仪Field Spec4、荧光及多酚含量测量仪Multiplex?Research、数字图像技术获得参数信息与叶片叶绿素含量均呈极显著相关,模型拟合度较好,相关系数均在0.7以上。其中,通过地物光谱仪获取的532 nm、586 nm与705 nm特征波段光谱数据经一阶导数(FD)预处理建立的偏最小二乘法(PLS)预测模型效果最优,MRE=1.80%,RPD=3.801。其次为基于数字图像分析技术以G-B作为特征参数建立一元二次回归模型,MRE=1.98%,RPD=3.946。以及基于荧光及多酚含量测量仪Multiplex?Research获取的特征荧光参数建立PLS模型,MRE=2.37%,RPD=4.807。【结论】地物光谱仪、Multiplex?Research、数字图像技术均可应用于纽荷尔脐橙叶片叶绿素含量的估测。其中,以地物光谱仪Field Spec4预测精度相对最优,Multiplex?Research便捷程度最高,数字图像技术用于大批量样品的测定操作性相对较强。     

柑橘LEAFY同源基因片段的克隆及分析

在提取大三岛脐橙(Citrus sinensis(L)Osbeck)基因组DNA的基础上，利用Uneven PCR的方法克隆了脐橙中的LEAFY(LFY)同源基因片段。经对该基因片段的核苷酸序列分析表明，它和烟草中的LFY同源基因NFY基因在结构上高度保守，同源性高达90%以上。     

矿质营养与砧木对447锦橙裂果的影响

喷施尿素加剧４４７锦橙裂果，其裂果率显著高于对照，极显著高于喷施ＫＣｌ，Ｃａ－Ｃｌ２处理。喷施ＫＣｌ和ＣａＣｌ２的裂果率较对照降低３７％和３５％，裂果率与叶片含Ｎ量呈正相关，与含Ｋ量呈负相关，枳砧４４７锦橙的裂果率极显著地高于红桔砧。本试验还研究了不同处理及砧木对果实品质的影响。     

生草栽培对柑桔丛枝茵根形成及果实品质的影响

试验以枳砧锦橙(CitrussinensisOsbeck.)初结果树为试材。试验设4个处理,分别为柑桔园间作百喜草(Bahiagrass)(PaspalumnotaturnFlugge)、白三叶草(Whiteclover)(TrifoliumrepensL.)、紫花苜蓿(Alfalfa)(MedicagosativaL.)和多年生黑麦草(Perennialryegrass)(LoliumperenneL.),以清耕为对照。单行小区,随机区组排列,3次重复。结果表明,在干旱季节,所有生草处理区都显著改善了根际土壤水分和温度状况,而百喜草和白三叶草生草区土壤丛枝菌根真菌孢子数和柑桔根系菌根侵染率显著高于清耕区和其它生草区。表明在干旱季节,百喜草和白三叶草生草栽培促进了果园土壤丛枝菌根真菌的生长和柑桔根系菌根的形成,从而促进了柑桔根系对水分和磷素营养的吸收利用。试验结果表明果园管理中宜选择菌根侵染率高的草种如百喜草、白三叶草在柑桔园进行生草栽培,促进柑桔根系菌根形成,改善植株生理代谢,提高果品质量。