白僵菌的分离鉴定及ITS序列分析

从我国13个省市43个地区采集263份土壤样品及感染白僵菌的昆虫样品58份．采用稀释平板法和组织分离法进行白僵菌的分离及形态学鉴定,分离出白僵菌菌株154株,鉴定为白僵菌属2个种,分别是球孢白僵菌和布氏白僵菌,对其中的疑问菌株进行了核糖体DNA—ITS测序分析．所测菌株均为球孢白僵菌。     

白僵菌研究与应用的现状及展望

白僵菌是一类寄主范围广、致病性强、适应性强的昆虫病原真菌.白僵菌对至少包括鳞翅、鞘翅、膜翅、同翅、双翅、半翅、直翅等15目、149科、521属、707种昆虫有寄生作用;特别对于鞘翅目及鳞翅目昆虫具有较强毒力.此外,还包括至少6科、7属、13种蜱螨目寄主(李增智等,1996).在多种农林害虫的生物防治中都取得了明显成效.由于其能长期、有效地控制虫口,且不伤害其他天敌昆虫和有益生物,从而可以有效地与其它杀虫因子协同作用并维持物种的多样性,完全符合有害生物综合治理的宗旨,同时由于其容易大量生产,防治成本较有竞争力,因而其研究成果具有广泛的应用前景.     

内蒙古西部虫生真菌调查研究初报

在对内蒙西部地区昆虫病原微生物资源调查中,从甜莱象(虫甲)等六种病死虫体上,分离到四属六种虫生真菌,即绿僵菌、白僵菌、蝗虫霉和干尸虫霉等。接种试验表明,所分离到的绿僵菌和白僵菌对其原来寄主昆虫都有一定的感染致病能力,有希望用于这些害虫的生物防治。     

四株马铃薯甲虫白僵菌菌株的鉴定

[目的]通过形态学特征明确四株马铃薯甲虫致病菌分类地位,探讨利用18S及ITS核酸序列鉴定四株致病菌的可行性.[方法]通过传统形态学特征及18S、ITS序列分别对四株马铃薯甲虫白僵菌1572、1573、1576和1577进行鉴定.[结果]孢子形态、产孢结构、菌落等形态学特征表明四菌株均为球孢白僵菌.四菌株18S rDNA序列分析获得1 665个共同碱基,在GenBank比对,从结果中选择相似度大于98;的序列与四菌株一起构建系统发育树I,发现白僵菌属归于一个分支,四菌株均归属于白僵菌属球孢白僵菌.剔除遗传关系比较远的、冗余的属外菌重新构建18S系统发育树Ⅱ,结果四菌株都与Beauveria bassiana(登录号为EU334676.1)分到一个枝上.ITS核酸序列分析获得513个共同碱基,在GenBank比对,显现的序列均属白僵菌属,下载这些序列与四菌株构建ITS系统发育树I,发现球孢与布氏白僵菌归属在一个分支.选取Stephen A.Rehner注册的白僵菌属六个分支的代表种及数据库中部分球孢和布氏白僵菌与四菌株一起构建ITS系统发育树Ⅱ,四菌株与代表种Cordyceps bassiana(AY532041.1)分到一个枝上,但在该枝上有三株布氏白僵菌,球孢与布氏白僵菌不能完全区分开.[结论]利用18S和ITS核酸序列均可将白僵菌鉴定到属,根据ITS序列可以确定四株白僵菌归属于球孢白僵菌的分支.     

球孢白僵菌对昆虫致病机理的研究进展

从白僵菌的侵染途径、侵染过程及侵染过程中昆虫的形态学、生理学、生物化学方面的变化对白僵菌的致病机理进行了概述。     

白僵菌及其在农业生产上的应用

白僵菌(Beauveria)是一类致病性强、寄主范围广的昆虫病原真菌,已广泛应用于农林害虫的生物防治系统中.白僵菌可寄生于700余种害虫中,而且具有良好的生物相容性,对环境没有污染作用,将是生物农药的重要组成部分.文章介绍了白僵菌的致病机理,并对白僵菌与化学农药的生物相容性、白僵菌在农业生产上的应用以及利用植物内生性白僵菌进行生物防治的研究进展进行了综述.     

云南澜沧县思茅松林虫生真菌多样性研究

【目的】探究云南澜沧县思茅松林虫生真菌多样性组成，为进一步开发、利用和保护思茅松林虫生真菌资源提供理论依据。【方法】 2019—2020年，采用踏查法对云南省澜沧县思茅松林内被虫生真菌感染的罹病虫体进行采集，采用划线法和弹射法对虫生真菌进行分离培养，结合形态学方法对虫生真菌进行种类鉴定。【结果】从物种组成看，云南省澜沧县思茅松林虫生真菌有5属9种，分别为白僵菌属球孢白僵菌和布氏白僵菌、绿僵菌属黄绿绿僵菌和金龟子绿僵菌、棒束孢属细脚棒束孢和环链棒束孢、虫草属高雄山虫草、线虫草属下垂虫草和蜂头虫草，其中球孢白僵菌和细脚棒束孢为优势种，相对多度分别为44.09%和33.33%。从物种多样性分析来看，澜沧县思茅松林下虫生真菌物种多样性丰富，分布均匀，垂直地带分布特征明显。从侵染寄主昆虫种类看，球孢白僵菌的寄主范围最广，共16种，其中鞘翅目昆虫占侵染个体总数的41.46%，叶甲被侵染的数量最多，占29.27%；细脚棒束孢和环链棒束孢的侵染寄主主要为松毛虫和鳞翅目蛹，其中细脚棒束孢的侵染寄主中鳞翅目蛹数量最多，占58.06%；白僵菌、棒束孢和高雄山虫草均可感染松毛虫，白僵菌和绿僵菌均可感染金龟子和膜翅目蚁科。【结论】云南澜沧县思茅松林虫生真菌物种多样性丰富，优势种为球孢白僵菌和细脚棒束孢，在松林害虫生物防治中具有良好潜力，应加强对球孢白僵菌和细脚棒束孢的保护和利用。     

分子生物学技术在检疫性昆虫鉴定中的应用前景

综述了几种分子生物学技术的特点及其近年来在昆虫分类中的应用。分析了形态学分类方法在检疫性昆虫鉴定中所存在的问题,并探讨了分子生物学技术在检疫性昆虫鉴定中的应用前景。     

绿色杀虫剂——BM白僵菌1号

白僵菌是一种广谱性的昆虫病原真菌,对700多种有害昆虫具有寄生性,致病性强、适应性强,能快速、有效地控制虫口,同时不伤害其他天敌昆虫和有益生物。BM白僵菌1号(地下害虫防治型)是经过多重筛选、诱变、复合优化而成的绿色杀虫剂。     

绿僵菌属分类的研究进展

绿僵菌属真菌是一类广泛用于生防制剂的昆虫病原真菌,其分类历史长达上百年,分歧比较大.为完善绿僵菌属真菌的分类提供参考,对近年来绿僵菌属系统分类的研究现状以及分类方法进行综述,并总结了现行研究中存在的问题,展望了绿僵菌系统学的研究前景.     

29株虫生真菌的鉴定及对烟粉虱的毒力

【目的】对29株虫生真菌菌株进行分类学鉴定并筛选出对烟粉虱Bemisia tabaci具有高毒力的菌株。【方法】采用形态学及ITS区、TEF区、Bloc区基因序列相似性分析鉴定菌株,并采用浸渍法测定真菌对烟粉虱的毒力。【结果】29株虫生真菌有26株符合白僵菌Beauveria的特征,菌株SB003、SP665和SP670被鉴定属于棒束孢属Isaria;利用TEF区序列、Bloc区序列、TEF-Bloc联合序列构建的系统发育树,结果显示29株菌株共包括24株球孢白僵菌B. bassiana、2株假性球孢白僵菌B. pseudobassiana和3株环链棒束孢I. cateinannulata。烟粉虱2龄若虫的死亡率随孢子浓度的增加而增加,不同菌株致病力不同;用1×108 mL-1的孢子悬浮液处理烟粉虱2龄若虫7 d,致死率最高的菌株为SP433,其次为SB009,分别为87.37%和82.93%。【结论】本研究可为虫生真菌的分类提供理论基础,筛选出的高致病力菌株SP433和SB009可为烟粉虱的生物防治提供参考。     

致病链霉菌毒素多样性及马铃薯疮痂病综合防治研究进展

马铃薯疮痂病是由致病链霉菌引起的一种土传病害,随着深入研究,在其病原、毒素和防治等方面取得较大的研究成果,并表明毒素是其主要致病因子。本文系统概述致病链霉菌的组成、传播方式及其致病毒素的种类和作用机理,包括thaxtomins、concanamycins、COR类植物毒素和borrelidin等,阐述马铃薯疮痂病的抗病育种、传统防治和生物防治等综合防治方法,并对研究重点进行展望,拟为马铃薯疮痂病的深入研究和绿色防控提供依据。     

丁香假单胞菌的分子生物学研究进展

丁香假单胞菌是好氧、腐生性强的革兰氏阴性菌,所引起的植物病害发生率位居十大细菌性植物病害之首,尤其引发的疫病在各农业大国爆发并有在世界范围扩散的趋势,给各国农业生产造成巨大的经济损失。基于国内外学者最新的分子生物学研究报道,对丁香假单胞菌的致病变种、病原菌鉴定、植物检疫、早期快速检测技术、致病机制及生物防治等方面进行综述,并探讨现阶段该病害研究存在的问题以及未来的研究方向与防治方案。     

枸杞根腐致病菌及拮抗菌的分离鉴定

旨在探索枸杞根腐病发生地根际土壤生防细菌资源,为该病的防治提供理论依据。采用组织分离法分离枸杞根腐致病菌,对其进行形态学、分子生物学鉴定和柯赫氏法则验证;再利用平板对峙法,以分离出的病原菌为靶标,筛选具有拮抗效果的菌株,对其进行鉴定。结果表明：从青海省海西蒙古族藏族自治州主要栽培枸杞林中分离鉴定出4种致病菌,分别为黄色镰刀菌（Fusarium culmorum）、三线镰刀菌（F.tricinctum）、尖孢镰刀菌（F.oxysporum）、木贼镰刀菌（F.equiseti）;经筛选,有8株生防细菌对4种病原菌具有不同程度的拮抗效果,其中,抑菌效果最好的是QH-588菌株,其抑制率在36.09%~51.79%;经形态学和16S rDNA/Gyr B基因分析鉴定,其中1株为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）,5株为枯草芽孢杆菌（B.subtilis）,2株为短小芽孢杆菌（B.pumilus）。在国内首次报道了三线镰刀菌为枸杞根腐病病原菌,筛选出的生防细菌在室内对枸杞根腐病的4种病原均具有较好的拮抗效果,可作为防治青海省枸杞根腐病的候选菌株。     

溶杆菌属细菌鉴定及生防机制概况

溶杆菌属的大部分细菌具有重要的生防前景,因而受到了高度关注。为了明确目前溶杆菌属细菌的研究现状,分析了已报道的26种溶杆菌属细菌的分布环境及典型的生化特征,基于16SrDNA序列相似性和脂肪酸组成构建了26种溶杆菌属细菌的系统进化树,并辅以DNA-DNA杂交结果进行佐证,阐述了溶杆菌属细菌对病原菌、线虫病害的生物防治物质及其作用机理,并对其生物安全和应用前景进行了展望。     

苜蓿根腐病的病原分离、鉴定与杀菌剂毒力测定

为了解河北苜蓿根腐病病原种类,以便有目的地加以防治,对从河北采集的苜蓿根腐病样品进行了病原分离、鉴定以及致病性和室内毒力测定。根据形态学和核糖体内转录间隔区ITS4和ITS5、延伸因子EF-1H和EF-2T序列作为引物鉴定,分离出的71株致病菌株均为镰孢菌属(Fusarium),其中,木贼镰孢(F.equiseti)55株,尖孢镰孢(F.oxysporum)7株,层出镰孢(F.proliferatum)6株,变红镰孢(F.incarnatum)2株,茄镰孢(F.solani)1株。尖孢镰孢菌株D19-2、层出镰孢菌株S45和茄镰孢菌株Q1的致病性最强。通过含毒介质法测定,结果表明,40%腈菌唑可湿性粉剂(WP)、50%多菌灵WP、嘧环·咯菌腈(37%嘧菌环胺和25%咯菌腈)水分散粒剂(WDG)、50%福美双WP、70%甲基硫菌灵WP和10%苯醚甲环唑WDG对这3个菌株菌丝生长均有较好抑制作用,而80%代森锰锌WP、99%恶霉灵WP、40%菌核净WP的抑制作用较弱。     

一株生防木霉的鉴定及环境pH与对羟基苯甲酸对其防病效果的影响

旨在明确西瓜枯萎病生防真菌M3菌株的分类地位及环境pH与对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid, PHBA)共同作用对其防病效果的影响。采用形态学和分子生物学方法分类鉴定,确定M3菌株为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)。平板试验结果表明,PHBA对M3菌株和病原菌尖镰孢菌西瓜专化型的菌落生长均具有“低浓度促进、高浓度抑制”的作用,强酸和强碱环境均不利于2种菌的生长;M3菌株和病原菌的最适生长环境pH和最适PHBA质量浓度不同,前者为6和400 mg·L^-1,后者为8和200 mg·L^-1。pH和PHBA共同作用下,M3菌株的抑菌率无显著变化。在pH 6和PHBA质量浓度400 mg·L^-1的土壤环境中,M3菌株的防病效果达到最高水平(85.72%)。总之,M3菌株的防病效果主要受土壤pH影响,其能够在PHBA积累环境中有效发挥防病作用,具有较好的生防应用潜力。     

烟青虫高毒力白僵菌菌株筛选及其感菌后 体内保护酶活性的变化

从烟田烟青虫(Helicoverpa assulta)自然感病虫体上新分离鉴定一株球孢白僵菌Bb062,将其与已有的不同来源地和寄主的10株白僵菌(Beauveria spp.)一起,分别测定其对烟青虫3龄幼虫致病力以及烟青虫3龄幼虫感染高毒力白僵菌后体内保护酶活性的变化。结果表明,在供试的11个白僵菌菌株中,Bb062对烟青虫3龄幼虫毒力最高,10 d累计校正死亡率达91.07%,LT50(致死中时)为4.67 d,且与其他菌株差异显著。以孢子1.0×106、1.0×107和1.0×108个·m L-1悬浮液处理时,烟青虫3龄幼虫累计死亡率随菌液浓度的提高和接菌后时间的延长而增大,LC50(致死中浓度)为孢子1.82×107个·m L-1。烟青虫3龄幼虫感染球孢白僵菌后72 h,其体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性均表现出先急剧升高,再急剧下降的变化过程。在所测试的菌株中,Bb062菌株对烟青虫毒力最高,且能够显著抑制其体内保护酶活性,因此,该菌株具有作为烟青虫生防菌的应用潜力。     

重庆地区玉米黏虫僵虫体内虫生真菌的分离鉴定

玉米黏虫(Mythimna separata)是一种常见的鳞翅目害虫,具有暴发性和迁飞性,对农作物危害严重.虫生真菌是昆虫病原微生物中的最大类群,可以有效地控制自然界中害虫的种群数量.为了防治玉米黏虫和与玉米黏虫相近的草地贪夜蛾,丰富虫生真菌菌种资源,以采自重庆江津高粱地中的玉米黏虫僵虫为实验材料,运用传统培养方法分离鉴定了6株真菌.经过形态学观察和分子生物学鉴定将这6株真菌归类于3个属,分别为镰刀菌属(Fusarium)、青霉属(Penicillium)以及鬼伞属(Coprinellus).虫生真菌能够引发昆虫感染发病,将害虫的种群数量长期控制在较低水平以下,在生物防治方面很有意义.此次分离纯化得到镰刀菌属(Fusarium)和青霉属(Penicillium)的真菌均有潜在的杀虫能力,鬼伞属(Coprinellus)真菌具有防治线虫的潜力,这些真菌对玉米黏虫和草地贪夜蛾的杀虫效果还有待于进一步的实验研究.     

苹果树腐烂病生防链霉菌A144的鉴定及其代谢产物的抑菌活性

旨在明确菌株A144的分类地位及其代谢产物的抑菌活性。基于形态学观察、生理生化特征以及16S rDNA序列分析将菌株A144鉴定为娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)。采用含药平板法测定菌株A144的抑菌谱,结果表明其发酵滤液对苹果树腐烂病菌(Valsamali var.mali)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、水稻恶苗病菌(Fusarium moniliforme)以及番茄早疫病菌(Alternaria solani)均有抑菌活性,抑菌率分别为68.15%±2.62%、28.90%±1.79%、33.77%±2.59%和11.43%±0.81%。以苹果树腐烂病菌为指示菌,从12种不同培养基中筛选出ISP2培养基为菌株A144的最佳发酵培养基,其发酵滤液的抑菌率达85.06%±0.86%。平板涂抹法和平板对扣法试验结果表明,其脂肽粗提物、蛋白粗提物和挥发性物质对苹果树腐烂病菌均有抑菌活性,抑菌率分别为81.44%±0.92%、47.92%±2.25%和22.87%±4.40%。可见,菌株A144在苹果树腐烂病的生物防治中具有良好的开发潜力。