乌贼墨多酚氧化酶的部分特性

以乌贼墨为材料，用0.05mol/L pH7.2的磷酸盐缓冲液提取多酚氧化酶（PPO），30%-80%的硫酸铵分级沉淀后通过DEAE-Sepherose CL-6B层析柱分离，合并具有较高酶活性的洗脱液，透析、浓缩后用于酶的特性研究。通过金属离子对该酶活性影响的研究表明，在mmol/L水平，铜离子和铅离子对该酶具有强烈抑制作用，但铜离子在20μmol/L浓度时，对酶却有显著激活作用。在mmol/L水平，Na^ 、K^ 、Mg^2 和Ca^2 对PPO活性无显著影响。在无机阴离子中HSO3^-对酶活性有强烈抑制作用，在10mmol/L时抑制效率达100%，而Cl^-、Br^-、I^-和SO4^2-则对PPO活性无显著影响。     

L-半胱氨酸及金属离子对马铃薯、苹果、甘薯多酚氧化酶活性的影响

以马铃薯、苹果和甘薯为研究对象,研究L-半胱氨酸和金属离子对上述3种作物多酚氧化酶(PPO)活性的影响。结果表明,L-半胱氨酸对马铃薯、苹果和甘薯PPO活性抑制作用明显,随着L-半胱氨酸浓度增大,酶活性降低幅度越大,作用于马铃薯、苹果的IC_(50)(导致酶活性下降50%的抑制剂浓度)为0.05 mmol/L,甘薯为0.10 mmol/L。0.20 mmol/L L-半胱氨酸,使马铃薯、苹果和甘薯中PPO活性抑制率在90%以上,随着时间的延长,最大抑制率变化不大。无论是马铃薯、苹果还是甘薯,Mn~(2+)和Fe_(3+)对它们的PPO活性有不同程度的激活作用,而Ca~(2+)、Na~+和Cu~(2+)对PPO活性有一定的抑制作用。抑制作用最强的是Cu~(2+),3.0 mmo L/L Cu~(2+)对马铃薯PPO活性抑制率为49.1%,对苹果PPO活性抑制率为60.8%,对甘薯PPO活性抑制率为69.7%。     

二氯化钴对NaCl胁迫下甘草幼苗叶片活性氧水平及抗氧化酶活性的影响

[目的]研究二氯化钴(CoCl2)对NaCl胁迫下甘草幼苗叶片活性氧水平、抗氧化酶活性及脂质过氧化程度的影响.[方法]抗氧化相关酶的活性测定.[结果]在80 mmol/L NaCl胁迫下,随胁迫时间延长甘草幼苗叶片抗氧化酶活性、活性氧水平发生显著变化且脂质过氧化程度逐步加重.在NaCl胁迫前期,幼苗叶片细胞内除过氧化物酶外,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶及抗坏血酸过氧化物酶活性显著升高,而活性氧水平和脂质过氧化程度无显著变化.随着胁迫时间的延长,即当80 mmol/L NaCl胁迫延长至30～ 35 d时,活性氧水平与脂质过氧化程度的显著提高;在80 mmol/L NaCl溶液中加入40 μmol/L CoCl2,在胁迫的整个过程中相对提高抗氧化酶的活性,在胁迫延长至30～ 35 d时显著抑制脂质过氧化水平的上升.[结论]40 μmol/L CoCl2可以相对提高80 mmol/L NaCl胁迫后期(30～35 d)甘草幼苗叶片抗氧化酶的活性,并显著抑制活性氧的产生和脂质过氧化的程度.     

玫瑰花多酚氧化酶的酶学特性研究

采用紫外分光光度法测定玫瑰花(Rosa rugosa)多酚氧化酶(PPO)的酶活性,分析了pH值、温度、热稳定性、底物结合能力、底物浓度、抑制剂以及金属离子对PPO活性的影响。结果表明,PPO最适pH值为7.0,最佳反应温度为40℃,PPO在80℃及以上加热12min后酶活性基本完全丧失。玫瑰PPO与焦性没食子酸亲和力最强,底物最佳浓度为0.04mol/L,PPO催化的酶促褐变反应符合米氏动力学方程,相应动力学参数Km和Vmax分别为0.351mol/L和76.335U/min。L-抗坏血酸、亚硫酸氢钠、L-半胧氨酸和柠檬酸4种抑制剂均能抑制PPO活性,抑制剂在相同浓度下的作用由强到弱的顺序为:L-抗坏血酸亚硫酸氢钠L-半胧氨酸柠檬酸,L-抗坏血酸的抑制作用较明显。Mg~(2+)、Fe~(2+)、K~+对玫瑰花PPO活性具有一定的促进作用,Mn~(2+)、Cu~(2+)对PPO活性具有双向作用,Ca~(2+)、Zn~(2+)、Ba~(2+)对玫瑰花PPO活性具有不同程度的抑制作用。     

黄冠梨果皮多酚氧化酶的酶学特性

[目的]研究黄冠梨果皮中多酚氧化酶(PPO)的酶学特性,为黄冠梨的贮藏保鲜和加工提供理论基础。[方法]采用分光光度法分别测定在不同反应pH值、不同反应温度、不同底物和抑制剂条件下的PPO活性。[结果]该酶的最适温度为25℃,50℃以上PPO活力明显受抑制;最适pH值为6.0;以邻苯二酚为底物时,Km=0.031 7 mol/L;以绿原酸作为底物时,Km=0.018 9 mol/L;在选定的浓度范围内(0.2~1.0 mmol/L),所用抑制剂的抑制能力从强至弱排列为L-Cys>Vc>Na2S2O3>NaHSO3>EDTA-Na2。较高浓度的CaCl2、NaCl也可对黄冠梨果皮PPO产生抑制作用。Cu2+能提高黄冠梨果皮PPO活性。[结论]绿原酸在黄冠梨果皮酶促褐变中的作用值得重视;采取调节pH值、热烫、添加安全抑制剂可以明显控制该PPO活性。     

金属离子·有机溶剂对黄鳝碱性磷酸酶的影响

[目的]探讨ALP的作用机理,促进黄鳝水产养殖。[方法]研究多种金属离子、有机溶剂等效应物对黄鳝内脏碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。[结果]Na＋、K＋离子对酶活力影响不大,Mg2＋和Ca2＋离子对ALP有激活作用,Li＋、Cu2＋、Zn2＋对ALP的酶活力则有抑制作用;酶催化磷酸苯二钠的产物HPO42-及产物类似物WO43-对酶均有较强的抑制作用,其中9.5 mmol/L的HPO42-使酶活力降低13%,而9.5 mmol/L的WO43-使酶活力降低34%,它们对酶活性的抑制类型均为竞争性抑制;有机溶剂甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇对ALP均有一定抑制作用,其抑制作用强弱顺序为异丙醇〉乙醇〉甲醇〉乙二醇。[结论]该研究从动力学角度探讨各种效应剂对黄鳝内脏ALP活性的影响,为进一步阐明ALP作用机理提供了依据。     

金属离子·有机溶剂对黄鳝碱性磷酸酶的影响

[目的]探讨ALP的作用机理,促进黄鳝水产养殖。[方法]研究多种金属离子、有机溶剂等效应物对黄鳝内脏碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。[结果]Na+、K+离子对酶活力影响不大,Mg2+和Ca2+离子对ALP有激活作用,Li+、Cu2+、Zn2+对ALP的酶活力则有抑制作用;酶催化磷酸苯二钠的产物HPO42-及产物类似物WO43-对酶均有较强的抑制作用,其中9.5 mmol/L的HPO42-使酶活力降低13%,而9.5 mmol/L的WO43-使酶活力降低34%,它们对酶活性的抑制类型均为竞争性抑制;有机溶剂甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇对ALP均有一定抑制作用,其抑制作用强弱顺序为异丙醇>乙醇>甲醇>乙二醇。[结论]该研究从动力学角度探讨各种效应剂对黄鳝内脏ALP活性的影响,为进一步阐明ALP作用机理提供了依据。     

龙井43号多酚氧化酶同工酶酶学性质研究

以龙井43号[Camellia sinensis(L.)O.Ktze.cv.Longjing 43]鲜叶为材料,经分离纯化获得多酚氧化酶-同工酶(PPOⅡ),对其部分酶学性质进行了研究。结果表明,PPOⅡ最适反应pH为6.0;抑制剂抗坏血酸、亚硫酸钠和L-半胱氨酸对PPOⅡ的抑制作用随抑制剂浓度的增加而增强;Cu~(2+)浓度在0.25×10-7mol/L时,PPOⅡ活性最高;PPOⅡ的Km为13.05 mmol/L,v_(max)为0.019 OD_(460)/min。     

根霉A03α-半乳糖苷酶的分离及其酶学性质初步研究

根霉（Rhizopus sp.A03）发酵豆渣产α-半乳糖苷酶,粗酶液依次经过三相分离、Sephadex G-100凝胶过滤获得了电泳纯的α-半乳糖苷酶,纯化了2.3倍,总酶活回收率达到25.9%,SDS-PAGE显示其相对分子质量为168.8 kDa。该酶水解对硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷的最适pH值为4.5,最适温度为45℃,表观Km值为0.340±0.026 mmol/L,表观kcat/K_m值为2.866×10⁴ mol-1/（L·s）;水解蜜二糖和棉子糖的表观速率均为10.0μmol/（h·mg）;水解活性受Fe³⁺、Cu²⁺、Mn²⁺和Hg⁺等离子的强烈抑制,但Fe²⁺对酶活性具有显著的激活作用。该酶活性在pH4.0～8.9保持稳定,在45℃时保温60min,残余酶活达到了77.4%。     

镉对金鱼藻植株生长和抗氧化酶活性的影响

研究了镉对金鱼藻(Ceratophyllum demersum L.)植株生长和抗氧化酶活性的影响,用不同浓度的氯化镉溶液(镉离子浓度分别为0、2、5、10μmol/L)处理金鱼藻植株,并分别于处理后1、2、4、8 d测定金鱼藻植株的生物量和抗氧化酶活性。结果表明,低浓度镉促进金鱼藻的生长,而高浓度镉抑制金鱼藻的生长,且随着时间的延长,胁迫程度加重,镉离子浓度为10μmol/L的处理最终导致植株死亡;抗氧化酶系统对镉胁迫具有应激反应,当镉离子浓度小于5μmol/L时,超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性和过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性均上升,而当镉离子浓度达到10μmol/L时,二者酶活性均下降。因此,当镉离子浓度小于5μmol/L时,可以诱导金鱼藻抗氧化酶活性增加,抵御氧化胁迫,使植株不受伤害。     

几种抑制剂和金属离子对桑尺蠖多酚氧化酶活性的影响

为给开发环境友好型生物杀虫剂奠定基础,采用分光光度法检测了几种抑制剂和金属离子对桑尺蠖(Phthonandria atrineata)多酚氧化酶活性的影响.结果表明:槲皮素和硫脲对该酶的抑制浓度(IC50)分别为0.036 mmol/L和0.12 mmol/L,Cu2+和Zn2+对该酶有强烈的抑制作用,而Ca2+和Mg...     

水杨酸对大丽花多酚氧化酶的影响

目的探讨如何提高大丽花的抗病性．方法以大丽花为实验材料,使用水杨酸（SA）叶面喷施处理方式,分析在水杨酸处理其植株叶片后,随时间变化,不同浓度的水杨酸对PPO活性的影响,为研究大丽花的抗病性提供实验依据．结果本品种大丽花的PPO最适pH为5．8;SA对大丽花PPO有一定的影响．用低于0．5mmol／L的SA处理后的大丽花,PPO活性无显著影响;1～2mmol／L的SA对PPO活性起促进作用,并且于24h达到高峰;而3mmol／L的SA对PPO活性起明显的抑制作用．而用以上几组浓度的SA处理大丽花后,PPO活性在48～60h之后逐渐恢复到未处理状态．结论外源SA对大丽花进行处理后对PPO活性在一定时间内有诱导作用．     

茉莉酸甲酯和剪叶互作研究

[目的]研究茉莉酸甲酯（MeJA）与剪叶互作对烟草防卫性酶一苯丙氨酸解氨酶（PAL）与多酚氧化酶（PPO）的影响。[方法]以云烟85为供试烟草，通过测定PAL和PI）o活性并利用SPSS12．0版统计软件对测定结果进行Duncan’s分析，研究了机械损伤与同源信号激发子MeJA闻的互作。[结果]浓度5mmol／LMeJA单独激发的PAL活性最高，其次是浓度5mmol／LMeJA＋剪叶双激发的PAL活性．再次是浓度1mmol／LMeJA单独激发和浓度1mmol／LMeJA＋剪叶双激发的PAL活性，对照的PAL活性最低，MeJA单激发的PAL活性高于其对应双激发的PAL活性，但差异不显著。浓度5mmol／LMeJA单独激发的PPO活性最高，其次是浓度5mmol／LMeJA＋剪叶双激发的PPO活性，再次是浓度1mmol／LMeJA单独激发和浓度1mmol／LMeJA＋剪叶双激发的PPO活性，对照的PP0活性最低。MeJA单激发的PP0活性高于其对应双激发的PP0活性，且差异显著。[结论]该试验初步研究了MeJA与剪叶的互作。     

几种化学物质诱导草莓抗根腐病的初步研究

利用叶圆片法对水杨酸(SA)、草酸(OAA)、磷酸氢二钾(K2HPO4)和壳聚糖(CTS)4种化学物质诱导草莓抗根腐病(Pestalotiopsis photiniae(Thuem)Y.X.Chen)的作用进行了研究,并对其机理进行了初步探讨。结果显示,SA在0.5 mmol/L浓度下诱导抗病效果达91.9%,OAA在20 mmol/L浓度下诱导抗病效果达96.4%,K2HPO4和CTS在供试浓度范围内均无诱导抗病作用;4种化学物质中只有CTS有直接抑菌作用,对根腐病菌丝生长的抑制中浓度为1.983 mg/mL,其余3种均无直接抑菌作用;用SA和OAA诱导处理后,草莓叶片中多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性变化表明,0.5 mmol/L SA诱导处理草莓叶片POD活性至第1天达到最大值,比对照增加了252.3%,而PPO和PAL活性变化不大;20 mmol/L OAA诱导处理草莓叶片PAL活性至第4天达到最大值,比对照增加了37.8%,而PPO和POD的活性变化不明显。     

普鲁兰短梗霉N2-3菌株碱性蛋白酶的纯化及性质研究

[目的]对普鲁兰短梗霉N2-3菌株的碱性蛋白酶进行纯化,并对其性质进行研究。[方法]利用层析柱Sephadex G-75与阴离子交换柱DEAE Sepharose Fast Flow纯化菌株N2-3的胞外碱性蛋白酶,并对纯化的酶进行SDS-PAGE凝胶电泳检测,同时对纯化蛋白酶的最适反应温度、温度稳定性、最适反应pH、pH稳定性进行测定,研究金属离子及各种化合物对蛋白酶活性的影响。[结果]试验中N2-3菌株的碱性蛋白酶纯化倍数和回收率分别为2.34和25.9%;SDS-PAGE凝胶电泳显示该酶的分子量约为33 kDa;该酶的最适反应温度和pH分别为52℃和9.0;Mn2+、Mg2+、Na+离子浓度在5 mmol/L时对纯化蛋白酶的酶活有激活作用,Zn2+、Ca2+、K+、Li+对酶活的影响不大,而当存在Fe2+、Fe3+、Cu2+、Co2+、Ag+、Hg2+离子时,蛋白酶活明显降低;苯甲基硫酰氟(PMSF)强烈抑制了该蛋白酶的活性,而乙二胺四乙酸(EDTA)与碘乙酸微弱抑制了该蛋白酶的活性。[结论]为普鲁兰短梗霉N2-3菌株碱性蛋白酶的工业化生产提供了一定的理论基础。     

采后硅酸钠处理对苹果梨青霉病的抑制

离体条件下,硅酸钠可抑制Penicillium expansum的菌丝生长,当浓度达到50 mmol/L时菌丝生长可被完全抑制.采用不同浓度的硅酸钠浸泡果实,可显著降低苹果梨损伤接种P.expansum的病斑面积,其中以200mmol/L的处理效果最好.硅酸钠处理可有效提高果实体内的过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性,促进过氧化氢(H2O2)和超氧化物阴离子(O2-)的产生,但对过氧化氢酶(CAT)和超氧化物岐化酶(SOD)活性的影响不大.由此表明,硅酸钠对梨果实青霉病的抑制与其的直接抑菌作用和诱导体内的抗性有关.     

重金属铜、锌、铁、铅污染对白菜幼苗鲜重及叶绿素含量的影响

以大白菜幼苗为试验材料,研究了不同浓度铜(Cu)、锌(Zn)、铁(Fe)、铅(Pb)等重金属因子胁迫对白菜幼苗单株鲜重和叶绿素含量。结果表明:随着重金属Cu、Zn、Fe、Pb溶液处理浓度的提高,大白菜幼苗的单株鲜重均逐渐降低,而叶绿素含量则随着重金属处理浓度的增加呈现先升后降的趋势。另外,低浓度的重金属(Cu2+0.1mmol/L、Zn2+1mmol/L、Fe2+0.2mmol/L、Pb2+1mmol/L)并不影响白菜叶绿素的合成,甚至有促进作用;当达到一定处理浓度(Cu0.1mmol/L、Zn1mmol/L、Fe2+0.2mmol/L、Pb2+1mmol/L)时,大白菜生长明显受到抑制。     

耐铜菌株4bs的鉴定及其对染料脱色的效果

从土壤中筛选出1株具有较高漆酶活性的菌株,经分子生物学方法鉴定,该菌株为芽孢杆菌属细菌,将其命名为Bacillus sp.4bs。菌株4bs的最适生长温度和pH分别为37℃和7.0,其在6%(w/v)Na Cl溶液中能够正常生长,在含有2.0 mmol/L Cu~(2+)的培养基中仍生长旺盛。以丁香醛连氮为底物,菌株4bs的芽孢漆酶活性为35.66U/g(干重),其芽孢漆酶最适反应温度为80℃,最适反应pH值为6.8;0.1 mmol/L的半胱氨酸、二硫苏糖醇和叠氮化钠抑制其活性,10 mmol/L的Na~+, K~+, Cu~(2+)和Li~+能够增强其活性。在pH 6.8的体系中,菌株4bs芽孢漆酶对结晶紫和茜素红在6 h内的脱色率分别为83.57%和77.16%;加入乙酰丁香酮(Ace)作介体时,对靛红的脱色率由52.73%提高到94.98%,对活性黑5的脱色率由19.01%提高到90.10%。