二倍体草莓‘Ruegen’再生体系的建立

【方法】以二倍体草莓(Fragaria vesca)‘Ruegen’叶片为试材,研究生长调节物质浓度和配比、不同暗培养时间、不同类型植物凝胶对其叶片再生的影响,【目的】建立‘Ruegen’草莓叶片再生体系。【结果】结果表明:暗培养7d、以Carrageenan为固化剂利于‘Ruegen’草莓叶片再生;激素配比为TDZ 2.0mg/L+IBA0.2mg/L时,再生频率较高,不定芽的再生率达到81.03%,平均再生芽数达到5.30个。     

二倍体草莓‘Ruegen’再生体系的建立乔瑞琪1,金万梅2*,沈元月1

【方法】以二倍体草莓(Fragariavesca)‘Ruegen’叶片为试材,研究生长调节物质浓度和配比、不同暗培养时间、不同类型植物凝胶对其叶片再生的影响,【目的】建立‘Ruegen’草莓叶片再生体系.【结果】结果表明:暗培养7d、以Carrageenan为固化剂利于‘Ruegen’草莓叶片再生;激素配比为TDZ20mg/L+IBA02mg/L时,再生频率较高,不定芽的再生率达到8103%,平均再生芽数达到530个.     

根癌农杆菌介导地被菊‘紫妍’遗传转化体系的建立

以地被菊‘紫妍’高效再生体系为基础,研究农杆菌介导的地被菊‘紫妍’遗传转化的若干影响因素。结果表明:卡那霉素6、4mg·L-1分别是叶片分化和植株生根的最适筛选质量浓度,同时确定羧苄霉素200mg·L-1是抑制农杆菌生长的最适质量浓度;预培养2d,侵染时菌液OD600约为0.5,侵染时间8min,共培养2d,延迟培养3d有利于提高转化频率。对抗性芽进行生根筛选后,抗性苗提取DNA经过PCR检测初步证明外源基因ClCBF4已整合到地被菊中。移栽出的转基因地被菊全部存活且生长状况良好。     

马铃薯‘华颂66号’遗传转化体系的建立

为探究马铃薯的最佳遗传转化体系,以紫色马铃薯‘华颂66号’无菌组培苗茎段为外植体,用农杆菌介导法将含有植物沉默载体质粒pBWA(V)KS-miR8019转化马铃薯外植体,测定不同预培养时间、不同激素组合及抗生素对马铃薯愈伤再生转化体系的影响。结果表明：1)茎段预培养时间为2 d时,愈伤组织诱导率最高;2)最适的外植体愈伤组织诱导的培养基配方为：MS干粉式培养基+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D,愈伤组织的诱导率为96.7%。最适愈伤组织分化的培养基为：MS干粉式培养基+4.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L GA₃;3)植株再生及生根的抗生素最适筛选浓度为75 mg/L的卡那霉素;4)农杆菌抑制剂的最适浓度为300 mg/L的特美汀,且在愈伤组织诱导、分化及生根阶段都需要加入。综上,通过对农杆菌介导的愈伤再生转化过程中各个影响因素进行试验,初步建立了马铃薯‘华颂66号’的遗传转化体系。     

森林草莓‘Hawaii4’继代培养与遗传转化条件的优化

【目的】探明森林草莓高效的组织培养和基因工程转化方法。【方法】以森林草莓组培苗为试验材料,对继代培养条件包括基本培养基、培养基的pH值、含糖量、琼脂量等以及遗传转化条件包括植物激素的选择、农杆菌的浓度等进行了摸索。【结果】组培苗继代培养的最佳条件为:1/2 MS,10g/L糖,7g/L琼脂粉,pH5.8。遗传转化的最佳条件为:叶片叶龄:39d左右,菌液浓度OD600=0.6,侵染时长15min,植物激素种类与配比:3.0mg/L的6-BA和0.2mg/L的IBA,暗培养2d,草铵膦筛选质量浓度:2mg/L。【结论】获得了有利于森林草莓愈伤组织生芽和幼苗生长的优化培养基成分,以及高效率的基因转化条件。     

农杆菌介导大豆遗传转化优化的初步研究

利用农杆菌对大豆成熟种子子叶节进行转化,探究了不同种植物提取物、植物提取物浓度、大豆基因型、萌发天数以及共培养天数对提高农杆菌遗传转化效率的影响。结果表明:含有植物提取物的共培养菌液侵染子叶节均能够明显提高抗性芽的再生率,但不同基因型的大豆所需的最适提取物浓度不同,‘豫豆22’最适浓度为7mL/L,‘中黄42’最适浓度为14mL/L;‘豫豆22’是本研究中最适宜转化的大豆基因型;萌发5d的大豆子叶节转化率最高;共培养10d获得阳性转化植株率最高。     

影响草莓遗传转化率的因子及转CBF1基因植株的获得

以草莓试管苗的叶片为外植体,经农杆菌介导将抗逆相关转录因子CBF1基因转入草莓基因组.探讨酚类物质、农杆菌菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间及选择方式等对草莓转化效率的影响,建立草莓遗传转化体系.在黑暗条件下预培养2～4 d,再用浓度OD6000.3～0.5的菌液侵染3～5 min后共培养2 d,将外植体先接到含有500 mg/L Cef的诱导培养基上进行培养,14 d后再转接到含有选择压20 mg/L Kan和500 mg/L Cef的诱导培养基上进行选择培养,得到卡那霉素抗性草莓植株.经PCR检测证实CBF1基因已整合到草莓基因组中.     

根癌农杆菌介导欧美杨108遗传转化体系的优化

[目的]优化根癌农杆菌介导的欧美杨108遗传转化体系。[方法]以欧美杨108无菌苗的叶片为外植体,通过农杆菌介导法对其遗传转化体系进行优化研究。[结果]试验获得的优化转化体系如下:农杆菌介导欧美杨108遗传转化的潮霉素最佳叶片分化浓度为2mg/L,生根浓度为1 mg/L。优化筛选的最适转化条件为:预培养48 h,菌液浓度OD600为0.4,侵染15 min,共培养48 h。试验共获得18个抗性愈伤和抗性芽,转化频率为4.3%;经PCR检测初步证明TCS基因已整合至欧美杨108再生植株中。[结论]该研究建立了高效欧美杨108叶片农杆菌介导的遗传转化体系。     

草莓叶盘再生和遗传转化体系的优化

农杆菌介导的叶盘法是目前草莓遗传转化的主要方法,建立高效稳定的叶盘再生体系是获得转基因草莓的必要条件.文章探讨了影响草莓离体叶片不定芽诱导的主要因素,建立了一个稳定的草莓植株再生体系,确定草莓品种弗吉尼亚不定芽诱导的最佳培养基组分为:MS+TDZ 2 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+2,4-D 0.2 mg·L-1,pH 5.8.发现叶盘近轴面向下放置能显著提高再生频率,且叶片幼嫩程度与草莓不定芽分化率呈正相关.并以此体系对草莓叶盘遗传转化进行优化,发现草莓品种弗吉尼亚遗传转化最佳预培养时间为2 d,最佳侵染时间为7 min.同时,利用该体系,将由不同启动子诱导的组织型纤溶酶原激活剂(Tissue-type plasminogen activator, t-PA)基因对草莓进行遗传转化.     

农杆菌介导CBL基因对菊花品种‘C008’的转化

以菊花品种‘C008’无菌苗叶片作为外植体,在建立了菊花高效再生体系的基础上,通过农杆菌介导法将CBL基因导入菊花品种‘C008’中。试验共获得抗性植株41株,PCR检测表明,阳性植株为5株,证明CBL基因已转化到菊花‘C008’的基因组DNA中,转化率为12.2%。遗传转化过程中,预培养2d后,将OD_(600)=0.5~0.6的农杆菌稀释50倍后侵染叶片8min,再共培养2d、延迟筛选2d,有利于获得较高的转化率。     

结合内标的RT-PCR技术检测草莓轻型黄边病毒(SMYEV)

草莓(Fragaria ananassaDuch)是蔷薇科(Ro-saceae)草莓属(Fragaria)多年生草本植物.在长期的生产过程中,草莓同其他无性繁殖植物一样,易感染病毒,从而造成草莓品种的种性退化.     

国内外草莓生产现状与发展趋势

2012年,世界草莓的产量为726.9万t,栽培面积30万hm2,其中中国的产量占1/3。虽然中国的草莓产量最高,但在生产中也存在不少问题,如缺乏安全生产技术、品种退化严重、生产劳动强度大、新技术应用不够等。我国草莓发展的主要趋势为：安全生产是重中之重,培育脱毒大苗是实施高效生产的前提,提高内在品质是占领市场的基础,转变栽培模式,提高生产效率是增加效益的保障,新品种、新模式将带领草莓产业新发展。     

利用小RNA深度测序快速鉴定草莓病毒

病毒侵染直接影响草莓的生长发育及果实品质,快速检测及鉴定病毒是病毒防治的前提。本研究以‘丰香’草莓和‘哈尼’草莓为试材,利用小RNA(sRNA)测序结合RT-PCR技术对2种栽培草莓品种中存在的病毒进行了研究。对sRNA测序结果进行组装和注释,结果表明:在混合样品中共有242个contigs比对到5种草莓病毒,分别为草莓白化病毒(strawberry pallidosis associated virus,SPaV)、草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus,SVBV)、草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus,SMoV)、草莓毛形病毒3(strawberry crinivirus 3,SCrV 3)和草莓毛形病毒4(strawberry crinivirus 4,SCrV 4)。利用RT-PCR技术对sRNA测序结果进行验证,结果表明:SMoV、SVBV和SCrV 3在‘丰香’草莓和‘哈尼’草莓中均检测到,而SPaV和SCrV 4只在‘哈尼’草莓样品中检测到。本研究利用sRNA测序技术鉴定了2个草莓品种中存在的病毒,首次在我国生产的同一个草莓品种中检测到5种病毒,为草莓病毒的检测和防控提供了新的思路。     

4种抗生素对草莓‘章姬’内生菌的抑制及对试管苗生长的影响

4种常用抗生素对‘章姬’草莓内生菌的抑制结果表明,卡那霉素(Kanamycin)不仅对内生菌无抑制效果,还对试管苗的生长有毒害作用。头孢霉素(Cefotaxime)和羧苄青霉素(Carbenicillin)的抑菌效果不明显,但对试管苗生长有促进作用。青霉素G钠(PenicinllinGsodium)对内生菌抑制效果很好,尤其是当其浓度为400mg/L时抑菌率可达100%,同时还对植株的生长有明显促进作用。     

利用草莓试管苗托叶再生植株

利用脱毒草莓试管苗叶柄基部的托叶在“MS＋6-BA 1.0～2.0 mg.L^-1”培养基上不经过愈伤组织阶段,直接再生了草莓试管植株,植株再生率达100%,每个托叶最高分化试管苗数达12.5株;提高了脱毒草莓试管苗的继代增殖倍数,提高了脱毒草莓试管种质材料的利用率,降低了脱毒草莓试管苗的成本。     

三种保鲜剂对草莓保鲜的影响

以市售法兰地草莓(Fragaia ananassa Duchesne)为材料,采用柠檬酸钠、柠檬酸钙和山梨酸钾作为保鲜剂,探究了3种保鲜剂对室温条件下贮藏7 d的草莓果实品质的影响。结果表明,3种保鲜剂均可维持贮藏期草莓的营养品质,适合草莓营养品质保持的保鲜剂依次为柠檬酸钙、柠檬酸钠和山梨酸钾。并对草莓保鲜效果较好的柠檬酸钙的适宜浓度进行了比较,2%为最适宜草莓保鲜的柠檬酸钙浓度。     

草莓试管内匍匐茎诱导技术

[目的]探讨试管内诱导草莓匍匐茎发生的最佳激素浓度配比,为草莓进一步脱毒奠定基础。[方法]应用均匀设计法对影响草莓丰香试管内诱导匍匐茎发生的激素浓度配比进行优化筛选,对各步骤各主要因子和水平的作用进行探讨,进而获得可用于脱毒的草莓匍匐茎茎尖。[结果]草莓丰香试管苗匍匐茎诱导的适宜培养基为：LS＋6-BA 1.00 mg/L＋GA3 1.90 mg/L＋KT 1.00 mg/L,在该培养基上其诱导率达99.5%以上。[结论]在试管内对草莓进行匍匐茎诱导是可行的。该研究为进一步茎尖脱毒奠定了基础。     

草莓胚状体形态发生的研究

对草莓丰香不同器官体细胞胚胎的诱导及形态发生进行了研究。结果表明,草莓体细胞胚胎形态发生经历了与合子胚形态发生相似的阶段,即球形胚—心形胚—鱼雷形胚—子叶期胚等,最后发育成再生植株。草莓不同器官花药、花蕾、叶、叶柄、子叶和下胚轴均能形成体细胞胚,但不同器官的体细胞胚发生率不同,其中以花蕾最高(平均61 74%),子叶次之(平均49 24%)。培养基中激素种类与配比对各器官体细胞胚的诱导率均有明显影响。     

不同消毒方式对设施草莓花药愈伤组织诱导的影响

以栽培品种京藏香草莓(Fragaria ananassa Duch.)花药(单核靠边期)为材料,75%乙醇为对照,研究了5种不同组合的消毒方式对草莓花药愈伤组织的诱导影响。结果表明,处理T_1经过Tween-80消毒后,用75%乙醇进行消毒30 s可以有效控制花药污染,同时还能减少花药褐化率;其次是处理T_3,该处理虽能减少污染,但是褐化率略高于T_1;处理T_0(CK)、T_2均有不同程度的污染,处理T4褐化率最高。     

配制型草莓酸奶的研制

向牛乳中加入食用乳酸和草莓汁，使乳中的蛋白质凝聚形成稠密的凝胶体，同时加入稳定剂以保证产品的稳定性。