拮抗细菌EBS05生长曲线及粗提物抑菌活性测定

为探明枯草芽孢杆菌EBS05的生长曲线及其菌液粗提物的抑菌活性,特开展本试验。通过测定D600值,初步构建EBS05的生长曲线;并分别采用盐酸和40%硫酸铵对发酵液中的抑菌物质进行沉淀粗提;用对峙培养法测定了粗提物的抑菌活性,用生长效率法测定了EBS05粗提取物对黄瓜灰霉菌、西瓜炭疽菌、黄瓜枯萎菌、小麦赤霉菌和小麦纹枯菌的抑菌活性。结果表明,在NYD培养液中培养72 h后,EBS05菌体数量最大,此时抑菌活性也最强;用0.1 mol·L-1盐酸调节菌液p H至2.0,或用40%硫酸铵都能够有效沉淀出发酵液中的抑菌物质,且沉淀抑菌活性与发酵原液相当;EBS05粗提物对12种植物病原菌均具有一定的抑菌活性。总体来看,枯草芽孢杆菌EBS05是一种很有发展前景的生防微生物资源。     

香蕉枯萎病内生生防菌H4-3抑菌蛋白提取及抑菌活性研究

铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa H4-3菌株是福建省农科院农业生物资源研究所微生物研究中心从香蕉植株中分离到的一株内生菌,该菌株对香蕉枯萎病病原菌具有很强的抑菌活性,初步判断其活性物质为大分子蛋白.采用硫酸铵沉淀方法提取H4-3菌株的抑菌蛋白,研究不同硫酸铵浓度对H4-3菌株抑菌活性的影响,结果表明：随着硫酸铵浓度的提高,H4-3菌株抑菌蛋白粗提液的抑菌活性逐步提高,其盐析后的上清液抑菌活性则逐步降低,70％饱和度的硫酸铵处理即可完全沉淀.     

透骨草内生菌对番茄灰霉病菌的抑制作用研究

摘 要：【研究目的】试图从中草药（植物）体内生菌中探寻其对植物病原菌的抑制作用。【方法】对峙试验、防效测定、菌株鉴定、抑菌活性及水解酶活性测定。【结果】从透骨草中筛选出一株内生拮抗菌株，对峙实验表明其抑制率为66.02%，在活体上的抑制率为51.68%。经形态观察、生理生化特性测定，确定此内生菌株为枯草芽胞杆菌。其不产生纤维素酶、β-1,3-葡聚糖酶、蛋白酶。发酵滤液经(NH4)2SO4沉淀获粗提蛋白，抑菌圈达20 mm以上，上清液无活性，表明抑菌物质基本被沉淀，主要为蛋白类，且此粗提蛋白对温度、紫外线、pH均具有较好的稳定性。【结论】透骨草内分离出的枯草芽胞杆菌对番茄灰霉病菌有较强且稳定抑制作用，抑菌活性成分主要是粗蛋白类物质，且其对温度、酸碱度、紫外线稳定性较好。     

人参内生菌B69菌株抑菌物质特性的研究

研究人参内生细菌B69菌株对人参根腐病病原菌的作用机制,通过硫酸铵沉淀、低温乙醇沉淀等方法获得菌株发酵液中活性成分,对其抑菌物质粗提液进行稳定性测定,并对其抑菌成分进行分离,采用平板扩散法测定提取成分的抑菌活性。结果表明,从B69菌株发酵液得到的提取液具有抑菌活性;对抑菌物质粗提物进行高温、酸碱度、紫外线、反复冻融和蛋白酶K处理,抑菌活性均未见明显变化。从B69发酵液中初步分离出具有抑制根腐菌活性的活性肽和胞外多糖。表明B69菌株能产生多种抑菌活性成分,抑菌成分对胁迫条件不敏感,值得进一步开发利用。     

多粘类芽孢杆菌S960抑制尖孢镰刀菌的活性物质分离纯化

对多粘类芽孢杆菌S960胞外粗提液采用硫酸铵沉淀法和Sephadex G-75凝胶层析法分离纯化多粘类芽孢杆菌S960释放的活性物质，用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测该活性蛋白质的相对分子量、薄层层析法初步鉴定该活性物质。结果表明，40%的硫酸铵沉淀提取效果最佳，Sephadex G-75凝胶层析在控制0.5 mL·min^-1的流速下，洗脱时间为50～70 min的收集液中具有有效活性物质，聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该活性物质相对分子量约为66.2 kDa，纯度为91.87%。薄层层析展开结果显示该活性物质可能含有α-氨基酸、苯丙氨酸、羟脯氨酸或脯氨酸。这说明多粘类芽孢杆菌S960可以通过释放具有抑菌活性的蛋白而抑制尖孢镰刀菌的生长。     

近缘毛壳Chaetomium subaffine LB-1抑菌物质存在部位及提取方法

【目的】对近缘毛壳Chaetomium subaffine菌株LB-1产生抑菌物质的部位及提取方法进行研究，为开发生防菌株LB-1防治植物病害奠定基础。【方法】以番茄灰霉病菌Botrytis cinerea和玉米大斑病菌Exserohilum turcicum为指示菌，采用平板密封培养法检测菌株LB-1是否产生挥发性抑菌物质；采用菌体超声破碎和液态培养的方式检测菌株LB-1产生的非挥发性抑菌物质存在的部位；采用含毒培养基法和滤纸片法检测菌株LB-1培养液的硫酸铵沉淀、盐酸沉淀和有机溶剂萃取物的抑菌效果，以确定菌株LB-1培养液中抑菌物质的提取方法。【结果】菌株LB-1与2种供试病原菌密封共培养时，对病原菌的生长没有明显影响，表明菌株LB-1不能产生挥发性抑菌物质。菌株LB-1菌体胞内提取物的抑菌活性与对照无差异，但其培养液对B. cinerea和E. turcicum的生长有较强的抑制作用，表明菌株LB-1产生的抑菌物质存在于菌体细胞外。菌株LB-1培养液的硫酸铵沉淀和盐酸沉淀对2种供试植物病原真菌的生长均无抑制效果，但有机溶剂萃取可获得菌株LB-1培养液中的抑菌物质，其中正丁醇萃取物...     

竹焦油对植物病原真菌抑制活性初探

以竹炭生产副产物竹焦油为活性成分，采用菌落生长速率法测定了竹焦油对12种植物病原真菌的抑菌活性。室内盆栽药效试验表明．体积分数50％竹焦油乳油在质量浓度为2000mg·L^-1对黄瓜白粉病Sphaerotheca fuliginea的预防效果达到79．13％．治疗效果达到78．36％；对黄瓜灰霉病Botrytiscinerea的预防效果和治疗效果分别为42.38％和46．98％，其防效与对照药剂200mg·L^-1三唑酮没有显著差异。竹焦油具有较好的抑菌活性。     

入侵植物斑地锦的生物学特性及其对3种草坪植物的化感作用

采用室内生物测定法,以白三叶、高羊茅、早熟禾3种草坪植物为受体,研究不同质量浓度的斑地锦水浸提液对3种受体植物种子萌发和幼苗生长的影响.结果表明:①浸提液均对3种受体植物幼苗的根长存在显著抑制作用,抑制作用随浸提液含量的升高而增强;浸提液对白三叶的抑制综合效应(SE)最强.②质量浓度为0.01和 0.02 g·mL-1的浸提液对高羊茅和早熟禾的幼苗株高有促进作用,质量浓度为0.01 g·mL-1浸提液对白三叶和早熟禾的种子活力有促进作用,但促进作用不显著.化感物质定性试验显示,斑地锦水浸提液中含有酚类化感物质.     

解淀粉芽孢杆菌F11抗真菌活性研究

解淀粉芽孢杆菌F11对核盘病菌、玉米大斑病菌、猕猴桃软腐病菌、烟草炭疽病菌等12种作物病原菌具有高效、广谱的抑菌效果,研究其生物防治机理可为该菌株应用于植物病害防治提供理论依据。本研究采用混菌法、牛津杯法及显微镜观察法探究了菌株F11发酵液不同稀释倍数、发酵液3种分离液（菌株发酵液离心分离获得上清液A,上清液A继而进行酸沉淀和甲醇提取分别获得发酵上清液B和胞外代谢物粗提液）对病原菌的抑制效果及抑菌特性。混菌法结果表明,菌株F11的抑菌效果随稀释倍数的增加而逐渐下降,但1 000倍稀释液对樟树炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）的相对抑制率和10倍稀释液与发酵原液对烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica var.nicotianae）、核盘病菌（Sclerotinia sclerotiorum）、玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）、猕猴桃软腐病菌（Botryosphaeria dothidea）的相对抑制率均达100%,且所列稀释液与发酵原液间无显著差异。牛津杯法结果表明,上清液B中不含抑菌活性物质,而上清液A与胞外代谢物粗提液中均含有抑菌活性物质。显微镜观察结果显示,胞外代谢物粗提液中的抑菌活性物质可使病原菌菌丝消融、断裂、扭曲、缠绕变形、原生质体凝集渗漏、形成泡囊结构等。研究表明,菌株F11病原菌的抑菌效果随发酵液稀释倍数增加而下降,其对樟树炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）的防治效果最好,发酵液经1 000倍稀释后相对抑制率仍达100%;对烟草黑胫病菌、核盘病菌、玉米大斑病菌、猕猴桃软腐病菌四种病原菌则可采用10倍稀释液代替发酵原液进行防治。其抑菌活性物质存在于胞外代谢物粗提液中,该物质的抑菌特性和脂肽抗生素的作用基本一致,推测为一类脂肽抗生素。     

抗烟草青枯病菌的枯草芽孢杆菌SH7的筛选与鉴定

由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)侵染引起的烟草青枯病是我国烟区的主要病害之一,严重影响烟草的产量和品质。从云南和贵州烟草青枯病重病区采集600份健康烟草根基土壤,并从中筛选出1株对R. solanacearum具有较强拮抗活性的细菌菌株SH7,该菌株在室内平板抑菌试验中,对R. solanacearum抑菌带宽可达132 mm。预先用SH7无菌发酵液保护烟株根部,对R. solanacearum防效达到66.0％。SH7发酵液经70％(NH4)2SO4饱和度沉淀并透析后得到的蛋白粗提液经平板抑菌活性检测,对R. solanacearum具有很强的抑菌活性,抑菌带宽为157 mm。初步确定SH7菌株产生的主要抑菌活性物质为蛋白多肽类物质。经菌体形态学、生理生化测定和16s rDNA序列测定,结果表明:SH7菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

一株溶藻细菌溶藻活性物质的初步研究

溶藻细菌A1是通过分泌胞外物质对青苔起到防除作用的。为进一步研究其防除机制,通过温度和pH值的单因素试验,活性炭吸附、有机溶剂萃取以及活性物质粗提等试验探讨活性物质的性质。研究结果表明：A1菌株溶藻活性成分具有很强的热稳定性,经过121℃处理后仍有很好的溶藻效果;发酵液的pH值分别调至2.0和4.0时,活性物质失活,而中碱性条件下活性物质防除青苔能力会增强;该活性物质不能被活性炭吸附;有机溶剂乙酸乙酯、石油醚和氯仿萃取后,该溶藻活性物质表现出强亲水性,由此可以初步推测活性物质属于糖类。溶藻活性成分粗提结果表明,A1菌株分泌的活性成分应由多种溶藻活性物质组成。     

银杏叶和银杏外种皮提取液对松材线虫的毒杀作用

[目的]寻找高效低毒和低残留的植物源杀线剂。[方法]以甲醇、乙醇、丙酮和蒸馏水4种溶剂对银杏外种皮进行粗提,以甲醇、乙醇、乙醚和石油醚4种分析纯有机溶剂对银杏鲜叶进行粗提,都以蒸馏水作为对照,采用浓度稀释法测定不同溶剂提取物在24、48和72 h对松材线虫的抑制作用。[结果]银杏外种皮和银杏叶不同溶剂提取液对松材线虫都有抑制作用,外种皮提取液在200 mg/ml时,蒸馏水在第2天死亡率达到100%,丙酮提取液中的线虫死亡率也达到100%;外种皮提取液在20 mg/ml时,蒸馏水和乙醇提取液的死亡率达到84.9%。[结论]银杏外种皮提取液对松材线虫具有很好的抑制作用。     

哈茨木霉T2菌株提取物对齐整小核菌抑菌活性的测定

采用甲醇法、乙醇法、超声波水法、碱法等4种方法对哈茨木霉菌(Trichoderma harzianum)T2菌株分生孢子中的抗菌物质进行了提取,并测定了各种粗提物对齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)的抑菌活性及温度对粗提物抑菌活性的影响.结果表明,用不同方法提取的哈茨木霉T2菌株粗提物对齐整小核菌有不同程度的抑制效果,其中以超声波水法提取物对齐整小核菌的抑制效果较好,温度对粗提物的抑菌活性有明显的影响.     

卢氏藻活性化合物的分离及抑菌活性研究

[目的]探索应用高速逆流色谱技术从卢氏藻中分离抑菌活性化合物。[方法]采用正己烷-乙酸甲酯-乙腈-水（体积比为4∶4∶3∶4）的液-液-液3相溶剂体系为高速逆流色谱的最优分离体系,以上相和中相为固定相,依次以下相和中相对样品进行洗脱,并收集分离液经高效液相色谱检测纯度。[结果]洗脱共得到RS1、RS2、RS3 3个组分物质,经HPLC纯度检测,RS1为极性较强的单一化合物;体外抑菌试验结果表明,RS1对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌都有很好的抑菌效果,RS2对细菌有抑菌效果,对真菌无抑菌作用,RS3没有抑菌活性。[结论]液-液-液3相高速逆流色谱法能够一步从卢氏藻混合物中分离获得具有良好抑菌活性的单体化合物。     

多孢木霉HZ-31菌株活性物质的初步分离及除草活性研究

为明确多孢木霉HZ-31菌株的除草活性物质,对其活性成分进行逐步分离。采用种子萌发法和离体叶片接种法分离最佳活性组分。结果表明,HZ-31菌株发酵滤液活性高于发酵液,发酵滤液对野燕麦和油菜种子萌发抑制率分别为80.00%和91.67%。4种有机溶剂萃取物对7种杂草叶片的致病效果由强到弱表现为:正丁醇相乙酸乙酯相石油醚相氯仿相。4种有机溶剂萃取粗提物在5 mg/mL浓度下对野燕麦和油菜的种子萌发均有强烈的抑制作用,除乙酸乙酯外,其余处理的发芽抑制率为100%。3 mg/mL浓度下正丁醇粗提取物能完全抑制野燕麦和油菜种子的萌发。因此,粗提物活性测定以离体叶片和种子萌发结果为依据,检测HZ-31菌株活性物质最佳有机相,最终确定最佳活性组分在正丁醇相中。     

管花肉苁蓉粗多糖提取方法及其清除二苯代苦味酰基自由基的效果

为探索管花肉苁蓉活性成分多糖的最佳提取方法,初步评价其抗氧化活性,分别采用超声-微波协同萃取、微波、水浴及超声波4种不同方法提取管花肉苁蓉中的粗多糖,并对其清除DPPH自由基的效果进行了初步研究.结果表明,超声-微波协同提取效果最佳,其次是微波、水浴和超声波.管花肉苁蓉粗多糖的最佳提取条件为:提取温度95℃,提取时间1...     

苦参抑菌活性的研究

中药苦参为豆科槐属植物,药用其根,具有清热解毒, 祛风燥湿,去虫止痒的功效.用4种提取方法提取苦参根的生物活性物质,研究不同方法提取物对病菌孢子萌发、菌丝生长及离体植物患病叶的抑菌作用.结果表明:丙酮粗提物对黑星病、炭疽病病菌孢子萌发有显著抑制作用,抑制率100%;对灰霉菌丝生长有显著抑制作用;对黄瓜离体叶黑星病菌有一定抑制作用.甲醇粗提物对黑星病、炭疽病孢子萌发抑制率达100% ;对灰霉菌丝生长有一定抑制作用;对黄瓜离体叶黑星病菌抑制率达50%;对番茄离体叶灰霉病菌有显著抑制作用.水提物对黑星病孢子萌发有显著抑制作用.灭菌水提物不仅不能抑制病菌生长,反而对病菌生长有促进作用.     

青刺果酵母发酵液活性成分分析及其抗氧化活性研究

采用水提取和微生物提取的方式对青刺果(Prinsepia utilis Royle)黄酮、总糖进行提取,并测定粗提液对DPPH自由基的清除作用。结果表明,水提取与微生物提取青刺果黄酮的提取率分别为0.37%和0.88%,水提取与微生物提取青刺果总糖提取率分别是7.65%和3.38%。青刺果微生物提取液对DPPH自由基的清除作用在相同的稀释倍数下高于水提取液,表明微生物提取植物中活性物质具有一定可行性和优越性。     

橘皮提取物的抗氧化能力与有效成分分析

用不同溶剂(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、去离子水)于室温对橘皮进行提取,得到不同溶剂的橘皮提取物.研究5种溶剂的橘皮提取物对1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)和亚硝酸盐的清除能力,并考察其有效成分的含量.结果表明,5种溶剂的橘皮提取物均具有清除DPPH和亚硝酸盐的能力,其中乙酸乙酯提取物的清除能力最强.在5种溶剂的橘皮提取物中柠檬苦素含量有极显著差异,黄酮、总酚的含量也如此;而氯仿提取物和石油醚提取物的单宁含量差异不显著,其他3种提取物的单宁含量差异极显著.乙酸乙酯提取物中各有效成分含量均最高,且相关性分析表明,橘皮提取物清除DPPH和亚硝酸盐的能力与其黄酮含量之间存在显著的相关性.     

4种叶状地衣粗提液对3种细菌的抑菌活性研究

分别以水、乙醇和丙酮为溶剂提取4种地衣中的有效成分,采用滤纸片法研究提取液对3种供试菌株的最低抑菌浓度（MIC）。结果表明,4种地衣中只有2种地衣的有机溶剂提取液对大肠杆菌和金色葡萄球菌具有抑制作用,且丙酮提取液的抑菌效果好于乙醇提取液;地衣有机溶剂提取液对枯草芽孢杆菌无抑制作用,其水提液无任何抑菌作用。